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表达H9N2 AIV双脯氨酸突变HA蛋白的基因Ⅶ型重组NDV的构建及鉴定
1
作者 谢文婷 徐婷 +1 位作者 杨洁 陈瑞爱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1381-1387,共7页
构建表达H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype avian influenzavirus, H9N2 AIV)双脯氨酸突变的HA蛋白的基因Ⅶ型重组新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV),为NDV和H9N2 AIV新型二联疫苗的研发提供前期基础。通过对H9N2亚型AIV的HA基... 构建表达H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype avian influenzavirus, H9N2 AIV)双脯氨酸突变的HA蛋白的基因Ⅶ型重组新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV),为NDV和H9N2 AIV新型二联疫苗的研发提供前期基础。通过对H9N2亚型AIV的HA基因进行分析,将其编码区第403位氨基酸由I突变为P以及第411位氨基酸由V突变为P,并利用反向遗传操作系统,将突变前与双脯氨酸突变的HA插入到基因Ⅶ型NDV病毒弱毒株rDHN3-mF基因组P基因与M基因之间的非编码区,经病毒拯救后获得重组病毒(rDHN3mF-HA/HA-2P)。通过Western blot试验证明重组病毒rDHN3mF-HA-2P可在DF1细胞内表达特异性HA蛋白,且与rDHN3mF-HA相比,经双脯氨酸突变后的HA蛋白表达水平更高。重组病毒rDHN3mF-HA-2P可以在鸡胚中稳定传代,与亲本毒株具有相似的复制特性,保留了rDHN3-mF株在鸡胚中高滴度复制、低致病性等生物学特性。本试验成功构建表达H9N2亚型AIV的双脯氨酸突变HA基因的重组病毒rDHN3mF-HA-2P,将为研发同时防控H9N2亚型AIV毒株和基因Ⅶ型NDV感染的新型高效、廉价多联疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感 HA蛋白 脯氨酸突变 新城疫病毒反向遗传系统
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猪德尔塔冠状病毒双脯氨酸突变S蛋白的表达及免疫原性评价
2
作者 文玉涵 于瑞明 +6 位作者 张莉萍 杜晓华 潘丽 王永录 郭慧琛 刘霞 刘新生 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期2799-2812,共14页
【目的】猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种重要的猪肠道冠状病毒,给全球生猪养殖业带来了巨大的经济损失,截至目前,尚无可用的商品化疫苗。本研究选择宿主免疫反应主要诱因因子棘突(spike,S)蛋白,并将PDCoV S蛋... 【目的】猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种重要的猪肠道冠状病毒,给全球生猪养殖业带来了巨大的经济损失,截至目前,尚无可用的商品化疫苗。本研究选择宿主免疫反应主要诱因因子棘突(spike,S)蛋白,并将PDCoV S蛋白七肽重复序列1(heptapeptide repeat-1,HR1)与中心螺旋之间的环中855和856位点均突变为双脯氨酸(E855P和V856P),然后利用ExpiCHO-S真核表达系统表达、纯化重组S蛋白和双脯氨酸突变S蛋白(S2P)并评价其免疫原性及免疫保护性,以初步研制一种免疫效果较好的PDCoV亚单位疫苗。【方法】利用间接酶联免疫吸附法检测免疫小鼠血清特异性抗体IgG水平;利用血清中和试验检测免疫小鼠血清中和抗体滴度;通过流式细胞术检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖情况;通过细胞因子检测免疫小鼠干扰素(interferon,IFN)-γ、IFN-α、白细胞介素(interleukin,IL)-2和IL-4等细胞因子分泌情况;采用RT-qPCR检测攻毒后小鼠肠道组织PDCoV病毒载量;采用病理组织切片检测小鼠肠道有无病理损伤;利用免疫组织化学检测小鼠肠道组织PDCoV抗原分布情况。【结果】免疫原性结果显示,小鼠在肌肉注射S组和S2P组亚单位疫苗后能够产生较高水平的抗PDCoV特异性IgG抗体,免疫后42 d的小鼠血清均对PDCoV具有中和作用,其中,S2P组对LLC-PK细胞50%中和保护效价显著高于S组。此外,S组和S2P组显著地诱导小鼠CD_(4)^(+)T淋巴细胞增殖,并且S2P组高于S组,而S2P组能够诱导小鼠CD_(8)^(+)T淋巴细胞增殖,但S组与PBS组并无差异。同时,S组和S2P组诱导的IFN-γ、IFN-α、IL-2和IL-4等细胞因子水平均显著高于PBS组,但S组和S2P组并无差异。免疫保护性结果显示,PBS组肠组织中可检测到PDCoV病毒,肠组织出现病理损伤且可见大量PDCoV抗原,而S组和S2P组未检测到PDCoV病毒且未观察到肠组织损伤,二者之间无明显差异。【结论】S2P组较之S组能� 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus PDCoV) S蛋白 双脯氨酸突变 免疫原性
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