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柴胡含药血清通过Smad3/Rheb轴调节HFL1细胞凋亡和肌成纤维细胞转化 被引量：2
1
作者 李妲 沈枭 +5 位作者 吴趋荟 郑蕾 赵四林 金朝晖 肖雪飞 范伏元 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期89-96,共8页
目的:利用转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))刺激人胚肺成纤维细胞(HFL1)模拟特发性肺纤维化(IPF)的病理过程,探讨柴胡含药血清对IPF的作用和机制。方法:采用10μg·L^(-1)TGF-β_(1)刺激HFL1细胞,给予不同体积分数柴胡含药血清(5%、... 目的:利用转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))刺激人胚肺成纤维细胞(HFL1)模拟特发性肺纤维化(IPF)的病理过程,探讨柴胡含药血清对IPF的作用和机制。方法:采用10μg·L^(-1)TGF-β_(1)刺激HFL1细胞,给予不同体积分数柴胡含药血清(5%、10%、15%、20%)干预24 h后,利用细胞增殖与活性检测试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖率。随后细胞分为空白血清组(20%空白血清)、TGF-β_(1)组(20%空白血清和10μg·L^(-1)TGF-β_(1))、TGF-β_(1)+柴胡含药血清组(5%空白血清、15%含药血清和10μg·L^(-1)TGF-β_(1))、TGF-β_(1)+SIS3组(3μmol·L^(-1)SIS3、20%空白血清和10μg·L^(-1)TGF-β_(1))。采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达情况;通过免疫荧光法检测α-SMA、脑Ras同源蛋白(Rheb)、磷酸化(p)-Smad3蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Rheb、p-Smad3、Smad3蛋白表达。结果:与空白血清组比较,TGF-β_(1)组细胞增殖率明显上升(P<0.05)。与TGF-β_(1)组比较,TGF-β_(1)+15%柴胡含药血清组和TGF-β_(1)+20%柴胡含药血清组细胞增殖率显著降低(P<0.01)。与空白血清组比较,TGF-β_(1)组细胞凋亡率显著下降,Bcl-2、α-SMA mRNA表达增加,Bax mRNA表达减少,α-SMA、Rheb蛋白表达增加,Smad3磷酸化水平明显上升(P<0.05);与TGF-β_(1)组比较,TGF-β_(1)+柴胡含药血清组和TGF-β_(1)+SIS3组细胞凋亡率显著上升,Bcl-2、α-SMA mRNA表达减少,Bax mRNA表达增加,α-SMA、Rheb蛋白表达减少,Smad3磷酸化水平下降(P<0.05)。结论:柴胡能够抑制TGF-β_(1)诱导的HFL1细胞增殖和肌成纤维细胞转化,促进成纤维细胞凋亡,该作用可能与Smad3/Rheb轴有关。 展开更多
关键词 特发性肺纤维化 柴胡 成纤维细胞 SMAD3 脑ras同源蛋白 成纤维细胞向肌成纤维细胞转化
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普伐他汀对子痫前期样小鼠模型中Rheb表达的影响 被引量：3
2
作者 淮静 杨孜 +1 位作者 易雁鸿 王广娇 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期38-43,共6页
目的观察普伐他汀(Pra)干预的子痫前期(PE)样小鼠模型中脑Ras同源蛋白(Rheb)的表达变化,探讨Pra对子痫前期样小鼠模型中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的抑制是否通过Rheb调节。方法将C57BL/6J孕鼠随机分组,于妊娠7~18 d每天注... 目的观察普伐他汀(Pra)干预的子痫前期(PE)样小鼠模型中脑Ras同源蛋白(Rheb)的表达变化,探讨Pra对子痫前期样小鼠模型中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的抑制是否通过Rheb调节。方法将C57BL/6J孕鼠随机分组,于妊娠7~18 d每天注射亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)建立PE样模型,并设立生理盐水对照(Con);于妊娠第8天起再分别每天给予Pra(PE+Pra组、Con+Pra组)或生理盐水(PE+N组、Con+N组),每组8只。于妊娠18 d收集孕鼠的肝脏及胎盘组织;采用蛋白印迹法、实时荧光定量PCR技术和免疫组化法检测组织中Rheb基因和蛋白的表达水平,并比较各组孕鼠肝脏及胎盘组织中Rheb的表达水平变化。结果(1)蛋白印迹法检测结果:PE+N组(肝脏:0.706±0.123;胎盘:0.866±0.128)及Con+N组(肝脏:0.732±0.123;胎盘:0.909±0.097)孕鼠的肝脏和胎盘组织中Rheb蛋白的表达水平,分别比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);PE+Pra组(肝脏:0.669±0.134;胎盘:0.940±0.221)与PE+N组孕鼠比较,差异也均无统计学意义(P均>0.05)。(2)实时荧光定量PCR检测结果:PE+N组(肝脏:1.026±0.480;胎盘:1.102±0.361)与Con+N组(肝脏:1.058±0.389;胎盘:1.067±0.400)孕鼠的肝脏和胎盘组织中Rheb mRNA的表达水平,分别比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);PE+Pra组(肝脏:0.735±0.356;胎盘:0.822±0.304)与PE+N组比较,差异也均无统计学意义(P均>0.05)。(3)免疫组化结果:Rheb蛋白在各组孕鼠肝脏和胎盘组织的表达部位无明显差异,PE+N组与Con+N组、PE+Pra组与PE+N组的Rheb蛋白表达水平分别比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论Pra在PE样小鼠模型中抑制mTOR信号通路的作用,可能与Rheb基因和蛋白的表达水平无关。 展开更多
关键词 先兆子痫 普伐他丁 富含脑蛋白ras同源蛋白 疾病模型 动物
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