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抑癌基因FATS真核表达载体的构建及其定点突变
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作者 闫双双 马克 +2 位作者 仇丽 田寅 李政 《山东医药》 CAS 2012年第11期12-14,共3页
目的构建抑癌基因FATS的真核表达载体和针对其单核苷酸多态性(SNP)位点定点突变的真核表达载体,为进一步研究其功能奠定基础。方法通过RT-PCR从小鼠睾丸cDNA中扩增FATS基因,并克隆到p3×Flag-myc-CMV-26载体上,构建FATS真核表达载体... 目的构建抑癌基因FATS的真核表达载体和针对其单核苷酸多态性(SNP)位点定点突变的真核表达载体,为进一步研究其功能奠定基础。方法通过RT-PCR从小鼠睾丸cDNA中扩增FATS基因,并克隆到p3×Flag-myc-CMV-26载体上,构建FATS真核表达载体p3×Flag-FATS;利用定点突变技术构建Flag-FATS-C213G,经测序检测突变结果后将两质粒分别转染FATS基因沉默的U2OS细胞,Western blot检测FATS蛋白和标签蛋白表达。结果重组质粒p3×Flag-FATS经EcoRⅠ/KpnⅠ双酶切出现质粒和目的片段两条带,且大小相符、无其他条带;编码FATS第213位氨基酸的第637-639位碱基由AAU突变为GAU,其他碱基均无突变;p3×Flag-FATS和Flag-FATS-C213G转染U2OS细胞可检测出标签蛋白Flag和目的蛋白FATS表达。结论 FATS基因及其定点突变载体均可成功构建,且转染后表达良好;此为深入研究FATS基因的抑癌功能及与肿瘤发生风险的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 脆性位点相关的肿瘤抑制基因 定点突变 真核表达
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