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植物脂质转移蛋白 被引量:13
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作者 田爱梅 曹家树 《细胞生物学杂志》 CSCD 2008年第4期483-488,共6页
脂质转移蛋白(lipid transfer proteins,LTPs)是植物生命活动中一类重要的活性蛋白质,在体外能够可逆地结合和转运多种脂质分子。目前已从多种植物中分离到LTPs基因。随着研究的深入,其不同水平的转录本在不同植物的不同发育阶段和生理... 脂质转移蛋白(lipid transfer proteins,LTPs)是植物生命活动中一类重要的活性蛋白质,在体外能够可逆地结合和转运多种脂质分子。目前已从多种植物中分离到LTPs基因。随着研究的深入,其不同水平的转录本在不同植物的不同发育阶段和生理条件下的不同组织中被发现,但LTPs体内确切的生理、生化功能和作用机制尚不明确。现介绍目前这一领域细胞与分子生物学方面的研究进展,并结合本课题组的研究结果进行了相关探讨,为进一步研究LTPs在植物生殖发育、抗性和防御反应及信号转导中的作用机制提供了新的线索。 展开更多
关键词 脂质转移蛋白 结构 基因表达 生物学功能
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LTP在植物抗环境胁迫中的作用 被引量:6
2
作者 李诚斌 施庆珊 +2 位作者 疏秀林 欧阳友生 陈仪本 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第6期19-22,共4页
脂质转移蛋(白Lipid transfer protein,LTP)是一类分泌蛋白,曾被认为是一种在体外膜间进行脂质转移的蛋白,因其作用对象很广泛,所以目前又称其为非特异性LTP(non-specific lipid transfer proteins,nsLTPs)。有很多证据表明nsLTPs可能... 脂质转移蛋(白Lipid transfer protein,LTP)是一类分泌蛋白,曾被认为是一种在体外膜间进行脂质转移的蛋白,因其作用对象很广泛,所以目前又称其为非特异性LTP(non-specific lipid transfer proteins,nsLTPs)。有很多证据表明nsLTPs可能参与多方面的植物细胞与生理生化反应,这些生物学功能包括:参与角质层的合成和胚胎的发育;适应各种胁迫环境;抗病原微生物等作用,尤其是在适应胁迫环境中,起到很大作用。介绍了nsLTPs在植物抗环境胁迫中所发挥的作用,同时对应用研究作了简单展望。 展开更多
关键词 植物 脂质转移蛋白 环境胁迫
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大白菜核雄性不育相关基因BrLTP1的克隆及特征分析 被引量:9
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作者 刘志勇 叶雪凌 +1 位作者 李承彧 冯辉 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期343-352,共10页
利用cDNA-AFLP技术分析大白菜核雄性不育两用系‘AB02’可育株(msms)和不育株(Msms)花蕾的基因表达谱,在可育株混合花蕾cDNA中扩增出1条特异条带TDF-25,通过RACE和RT-PCR技术克隆了该基因的全长cDNA序列。序列分析表明,该基因编码脂质... 利用cDNA-AFLP技术分析大白菜核雄性不育两用系‘AB02’可育株(msms)和不育株(Msms)花蕾的基因表达谱,在可育株混合花蕾cDNA中扩增出1条特异条带TDF-25,通过RACE和RT-PCR技术克隆了该基因的全长cDNA序列。序列分析表明,该基因编码脂质转移蛋白,命名为BrLTP1。BrLTP1全长cDNA序列为750bp,推测编码1个包含183个氨基酸残基的前体蛋白。BrLTP1蛋白含有典型的脂质转移蛋白N端信号肽,保守的AAI结构域和半胱氨酸位点。预测BrLTP1蛋白含有多种修饰性位点,包括1个PKC磷酸化位点,2个N-糖基化位点和10个N-端豆蔻酰基化位点。基因表达模式表明,BrLTP1在两用系不育株花蕾中受到强烈抑制,在可育株的大花蕾、成熟花药以及花瓣中高水平表达。 展开更多
关键词 大白菜 核基因雄性不育 脂质转移蛋白
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水稻脂质转移蛋白基因的分离和分析 被引量:6
4
作者 刘晓斐 徐久振 +3 位作者 侯宇清 詹树萱 葛晓春 曹凯鸣 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第7期730-740,共11页
用水稻脂质转移蛋白(lipidtransferprotein,LTP)的cDNA(pFDRSC110)为探针,从水稻(OryzasativaL.sp.indica)“广陆矮4号”基因文库中筛选出LTP基因,完成了1.... 用水稻脂质转移蛋白(lipidtransferprotein,LTP)的cDNA(pFDRSC110)为探针,从水稻(OryzasativaL.sp.indica)“广陆矮4号”基因文库中筛选出LTP基因,完成了1.8kb长片段的序列测定。该基因编码一个121个氨基酸组成的肽,编码区中间有一个90bp的内含子,基因的调控区除有2个TATAbox和polyA加工信号外,还存在多个回文序列和逆向重复序列。该基因编码的蛋白质N端是由28个氨基酸组成的信号肽,同源性比较表明它具有典型的植物LTP特征。 展开更多
关键词 水稻 调控元件 蛋白质同源性 脂质转移蛋白 基因
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大麦中的重要蛋白质及其对啤酒酿造的影响研究进展 被引量:1
5
作者 刘憨憨 徐晨 +2 位作者 孙明炀 江政辉 吕晨艳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第23期194-201,共8页
大麦作为重要的谷类作物,在饲料生产和食品加工中占有重要地位,其中大麦籽粒中所含的蛋白质对啤酒酿造过程及啤酒品质有重要的影响,尤其是啤酒泡沫、啤酒浑浊等。然而,目前对于大麦中起重要作用的蛋白质如大麦醇溶蛋白、热稳定性蛋白(... 大麦作为重要的谷类作物,在饲料生产和食品加工中占有重要地位,其中大麦籽粒中所含的蛋白质对啤酒酿造过程及啤酒品质有重要的影响,尤其是啤酒泡沫、啤酒浑浊等。然而,目前对于大麦中起重要作用的蛋白质如大麦醇溶蛋白、热稳定性蛋白(蛋白质Z和脂质转移蛋白)等的研究还较少,结构方面的信息有所欠缺,功能的开发也处于起步阶段。本文主要从大麦中重要的蛋白质出发,对大麦中蛋白质的结构、功能性质和应用进行综述,并概述其在啤酒酿造中的作用及变化,以期拓宽其在生产加工中的应用、为大麦中蛋白质的加工和利用提供理论参考。 展开更多
关键词 大麦 醇溶蛋白 蛋白质Z 脂质转移蛋白
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桃主要过敏原蛋白Pru p 3的分离纯化及质谱鉴定 被引量:4
6
作者 康文瀚 张九凯 +2 位作者 邢冉冉 孙秀兰 陈颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第20期38-44,共7页
选取水蜜桃、油桃、蟠桃及黄桃4种桃为原料,以ZipTipC18微量层析柱为纯化工具快速分离纯化果皮及果肉中的桃过敏原蛋白Pru p 3,并利用液相色谱-串联质谱对其进行鉴定。结果表明,该纯化方法获得的产物为桃过敏原蛋白Pru p 3,蛋白纯度为95... 选取水蜜桃、油桃、蟠桃及黄桃4种桃为原料,以ZipTipC18微量层析柱为纯化工具快速分离纯化果皮及果肉中的桃过敏原蛋白Pru p 3,并利用液相色谱-串联质谱对其进行鉴定。结果表明,该纯化方法获得的产物为桃过敏原蛋白Pru p 3,蛋白纯度为95%。该方法为桃过敏原蛋白Pru p 3的研究提供了技术支撑。 展开更多
关键词 过敏原 脂质转移蛋白 纯化 质谱
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逆境胁迫下柽柳脂质转运蛋白基因(ThLTP)的克隆与功能初步分析 被引量:2
7
作者 林琳 李健 +2 位作者 李慧玉 穆怀志 姜静 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2012年第4期492-499,共8页
从以刚毛柽柳为材料构建的NaCl胁迫的根cDNA文库中测序得到1条LTP基因序列,其全长为635 bp、编码116个氨基酸,命名为ThLTP基因。采用实时荧光定量RT-PCR的方法,分别对0.2 mol.L-1NaCl、150μmol.L-1CdCl2、20%(W/V)PEG6000、100μmol.L-... 从以刚毛柽柳为材料构建的NaCl胁迫的根cDNA文库中测序得到1条LTP基因序列,其全长为635 bp、编码116个氨基酸,命名为ThLTP基因。采用实时荧光定量RT-PCR的方法,分别对0.2 mol.L-1NaCl、150μmol.L-1CdCl2、20%(W/V)PEG6000、100μmol.L-1ABA及4℃下ThLTP基因在柽柳中的表达模式进行了分析,结果表明:ThLTP基因除了在4℃条件下根组织中为下调表达外,在其它处理中均表现为上调表达。将ThLTP基因克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)的原核表达载体pET32a中,对重组菌Escherichia coli BL21(pET32a-LTP)的抗旱耐盐性进行分析。结果表明:在0.8%(W/V)NaCl和20%(W/V)PEG6000条件下,对照菌E.coli BL21(pET32a)无对数生长期,而重组菌E.colii BL21(pET32a-LTP)经过3 h的延迟生长后,进入到对数增长期,表明ThLTP可受盐、碱、低温诱导并能提高重组菌的抗旱耐盐能力。 展开更多
关键词 刚毛柽柳 脂质转移蛋白 抗旱耐盐性 表达分析
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青花菜脂质转移蛋白基因的克隆与表达特征分析 被引量:2
8
作者 裴徐梨 荆赞革 +5 位作者 唐征 王岩 王镇 陈忠文 刘高峰 吕善武 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期615-621,共7页
脂质转移蛋白是植物生命活动中重要的活性蛋白质,在花粉发育中起着重要作用。本研究以青花菜保持系‘WN12-95B’为试验材料,采用RT-PCR技术获得脂质转移蛋白(LTP)基因c DNA序列。通过生物信息学分析,结果表明:该基因含有一个360 bp的开... 脂质转移蛋白是植物生命活动中重要的活性蛋白质,在花粉发育中起着重要作用。本研究以青花菜保持系‘WN12-95B’为试验材料,采用RT-PCR技术获得脂质转移蛋白(LTP)基因c DNA序列。通过生物信息学分析,结果表明:该基因含有一个360 bp的开放阅读框,推导编码119个氨基酸,预测蛋白分子量12.47 k D,p I值7.48,属疏水性蛋白。青花菜LTP蛋白氨基酸序列含有24个氨基酸长度的信号肽,α-螺旋和不规则卷曲是其二级结构的主要成分,三级结构则具有典型的LTP蛋白结构特征。分子进化分析表明该基因与油菜亲缘关系最近,相似性最高,其次为芥菜和芜菁。时空表达特性分析显示,青花菜LTP基因特异表达于花蕾中,且表达丰度较高。保持系和Ogu不育系不同发育阶段花蕾LTP基因的表达丰度差异明显,表达量随花蕾发育呈下降趋势。本研究可为深入研究LTP基因在青花菜绒毡层和小孢子发育过程中的作用提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 青花菜(Brassica OLERACEA var.italica) 脂质转移蛋白 基因克隆 生物信息学 表达分析
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水稻黄化苗中2种脂质转移蛋白基因表达的比较研究 被引量:2
9
作者 葛晓春 刘晓斐 +3 位作者 詹树萱 张江立 孙崇荣 曹凯鸣 《自然科学进展(国家重点实验室通讯)》 1999年第5期413-418,共6页
从水稻(Oryza satiua)“广陆矮4号”黄化苗cDNA文库中筛选到2种可能编码脂质转移蛋白(LTP)的cDNA克隆,将它们对应的基因命名为LTP110和LTP114.在完成2种cDNA全顺序测定的基础上,对它们的核苷酸顺序及推断的蛋白质一级结构进行了比较分析... 从水稻(Oryza satiua)“广陆矮4号”黄化苗cDNA文库中筛选到2种可能编码脂质转移蛋白(LTP)的cDNA克隆,将它们对应的基因命名为LTP110和LTP114.在完成2种cDNA全顺序测定的基础上,对它们的核苷酸顺序及推断的蛋白质一级结构进行了比较分析,结果显示两者均具有典型的LTP结构特征.Northern杂交结果表明,LTP110在幼叶和胚芽鞘中表达较强,在根中表达较弱;而LTP144只在幼叶中表达,在胚芽鞘和根中没有检测到信号.在黄化苗幼叶的生长过程中,LTP110的表达呈下降的趋势;而LTP144的表达则呈先升后降的趋势.显然两者具有不同的器官表达特异性和时间表达特异性,功能上可能有所不同.Southern杂交结果则显示,LTP110和LTP144均属于一个小的基因家族. 展开更多
关键词 脂质转移蛋白 水稻 黄化苗 基因表达 基因组
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谷子脂质转移蛋白基因SiLTP1的克隆及表达分析 被引量:2
10
作者 孟凡花 李臻 +1 位作者 王庆国 刘炜 《山东农业科学》 北大核心 2021年第10期1-7,共7页
植物脂质转移蛋白(LTP)是一类含量丰富并且由多基因家族编码的小分子碱性蛋白。本研究利用PCR技术从谷子中克隆得到一个LTP基因,命名为SiLTP1。该基因的开放阅读框全长为354 bp,编码117个氨基酸。对其核苷酸及蛋白序列进行生物信息学分... 植物脂质转移蛋白(LTP)是一类含量丰富并且由多基因家族编码的小分子碱性蛋白。本研究利用PCR技术从谷子中克隆得到一个LTP基因,命名为SiLTP1。该基因的开放阅读框全长为354 bp,编码117个氨基酸。对其核苷酸及蛋白序列进行生物信息学分析,并通过qRT-PCR方法分析了SiLTP1在各胁迫下的表达模式。结果表明,SiLTP1具有脂质转移蛋白家族共有特性,即N端的信号肽结构、跨膜螺旋区、8个高度保守的半胱氨酸基序;三级结构预测表明,该蛋白主要是由4个α-螺旋和无规则卷曲组成;qRT-PCR结果显示,盐、干旱、ABA及MeJA均可诱导SiLTP1表达,其中盐胁迫诱导最为明显,显示SiLTP1可能参与谷子逆境胁迫响应过程,尤其在耐盐品质形成中发挥作用。本研究为深入解析谷子中SiLTP1的生物学功能及作用机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 谷子 脂质转移蛋白 基因克隆 胁迫响应 表达模式分析
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高浓和低浓啤酒酿造中蛋白酶A对泡沫活性多肽的影响 被引量:1
11
作者 方华 陆健 《啤酒科技》 2004年第8期51-56,共6页
啤酒产生丰富泡沫的能力受泡沫活性多肽水平的影响,含有疏水区域的特定多肽,如脂质转移蛋白(LTP1)是啤酒泡沫的重要组成成分.尽管高浓啤酒酿造在商业上是一项可行的技术,但同低浓酿造相比,其产品具有更低的泡沫稳定性.人们认为这主要是... 啤酒产生丰富泡沫的能力受泡沫活性多肽水平的影响,含有疏水区域的特定多肽,如脂质转移蛋白(LTP1)是啤酒泡沫的重要组成成分.尽管高浓啤酒酿造在商业上是一项可行的技术,但同低浓酿造相比,其产品具有更低的泡沫稳定性.人们认为这主要是由于蛋白酶A对上述的疏水性多肽所起的降解作用造成的,本论文的研究目标是比较和确定在高浓(20°P)和低浓(12.P)麦汁发酵过程中疏水性多肽,尤其是泡沫-LTP1损失的数量,来评估蛋白酶A对这些多肽的影响,疏水性多肽和泡沫-LTP1,在高浓酿造中的损失更大,更进一步来说,已获得的结果表明蛋白酶A改变的是多肽的疏水性,而不是它们的分子量大小.大约有20%的疏水性多肽和57%的泡沫-LTP1表现出蛋白酶A抗性,这些疏水性多肽和泡沫-LTP1损失程度的差异直接影响到最终产品的泡沫稳定性. 展开更多
关键词 高浓啤酒 低浓啤酒 酿造 蛋白酶A 脂质转移蛋白 疏水性多肽 泡沫稳定性
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三类植物脂类转运蛋白家族研究进展
12
作者 姜雪 宋兴舜 孟威 《中国农学通报》 2021年第18期85-94,共10页
脂类是生物体内的最重要物质之一。脂质运输是脂质代谢过程中重要环节。植物中参与脂质运输的蛋白质家族主要有三类:脂质转移蛋白(lipid transfer proteins, LTPs)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter, ABC tr... 脂类是生物体内的最重要物质之一。脂质运输是脂质代谢过程中重要环节。植物中参与脂质运输的蛋白质家族主要有三类:脂质转移蛋白(lipid transfer proteins, LTPs)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter, ABC transporter)和酰基辅酶A结合蛋白(acyl-coenzyme A-binding proteins, ACBPs)。由于具有不同的亚细胞定位,这些脂类转运蛋白在脂类代谢过程中发挥着不同的作用。近期研究显示,除了保守的脂质转运功能,这三类脂类转运蛋白还不同程度地参与生长发育和胁迫响应。为进一步深入了解脂质运输在植物生长发育和胁迫响应过程中的作用机制,总结了以上三类脂类转运蛋白家族的结构、分类和不同植物中的亚细胞定位,并着重对脂质运输在生长发育和胁迫响应中的功能进行了整理。尽管大量证据显示这三类脂类转运蛋白在生长发育和胁迫响应中发挥作用,但是,只有少数研究说明脂质运输在其中发挥重要作用,而这些研究多集中在对ACBPs家族的研究中。 展开更多
关键词 脂质运输 脂质转移蛋白 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白 酰基辅酶A结合蛋白 功能
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水稻脂质转移蛋白cDNA结构及相应肽链构造特征的分析 被引量:1
13
作者 詹树萱 葛晓春 +2 位作者 李耕 孙崇荣 曹凯鸣 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1997年第8期701-706,共6页
从水稻(Oryza sativa L.ssp.indica)“广陆矮4号”黄化苗cDNA库中分离到一个与其它植物脂质转移蛋白(LTP)基因同源性很高的cDNA克隆(pFDRSC144)。完成了pFDRSC144克隆中840bp插入片段全顺序的测定。结果表明,该片段包含354个碱基的编码... 从水稻(Oryza sativa L.ssp.indica)“广陆矮4号”黄化苗cDNA库中分离到一个与其它植物脂质转移蛋白(LTP)基因同源性很高的cDNA克隆(pFDRSC144)。完成了pFDRSC144克隆中840bp插入片段全顺序的测定。结果表明,该片段包含354个碱基的编码区,编码118个氨基酸,其中包括26个氨基酸组成的信号肽。从疏/亲水性分布曲线可看出,该肽链形成的分子具有很大范围的疏水面。按Garnier二维结构预测法显示成熟蛋白的肽链主要以β-折叠肽链的形式存在,推测可能形成一种有利于脂质传送的开放性管形构造。Southern杂交分析表明,LTP基因在水稻基因组中以基因家族的形式存在。 展开更多
关键词 水稻 CDNA 结构 脂质转移蛋白 肽链
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雄性不育相关基因msLTP的反义RNA验证
14
作者 田爱梅 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期890-894,共5页
根据普通白菜雄性不育相关的脂质转移蛋白基因(msLTP)的cDNA序列设计引物,从普通白菜花蕾的cDNA中扩增出312bp的片段,然后将该片段连接至双元载体pBI12l中,得到反义RNA植物表达载体并导入农杆菌LBA4404菌株中,通过农杆菌介导法转化菜心... 根据普通白菜雄性不育相关的脂质转移蛋白基因(msLTP)的cDNA序列设计引物,从普通白菜花蕾的cDNA中扩增出312bp的片段,然后将该片段连接至双元载体pBI12l中,得到反义RNA植物表达载体并导入农杆菌LBA4404菌株中,通过农杆菌介导法转化菜心;利用PCR和Southern blot分析检测得到了25株转基因植株,转基因植株的花粉部分畸形或空瘪,花粉离体萌发率为38.56%,较未转化植株的萌发率(76.32%)降低了37.76个百分点.研究表明,反义RNA技术使msLTP基因沉默而导致了菜心转基因植株的部分花粉发育不良,说明msLTP基因在普通白菜和菜心等花粉发育中具有重要作用. 展开更多
关键词 脂质转移蛋白 雄性不育 反义RNA 花粉
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马铃薯非特异性脂质转移蛋白基因StLTPa1的克隆和表达 被引量:12
15
作者 郜刚 任彩虹 +2 位作者 金黎平 谢开云 屈冬玉 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1510-1517,共8页
非特异性脂质转移蛋白(nsLTP)是植物中大量存在的小分子脂类结合蛋白,具有多种生物学功能,如抗菌防御、信号传导、胞壁松弛、蛋白酶抑制等。通过接种青枯菌(Ralstonia solanacearum),从马铃薯栽培品种中薯3号中获得一个新的非特异性脂... 非特异性脂质转移蛋白(nsLTP)是植物中大量存在的小分子脂类结合蛋白,具有多种生物学功能,如抗菌防御、信号传导、胞壁松弛、蛋白酶抑制等。通过接种青枯菌(Ralstonia solanacearum),从马铃薯栽培品种中薯3号中获得一个新的非特异性脂质转移蛋白cDNA克隆StLTPa1,序列分析表明该基因含636bp核苷酸,编码91个氨基酸,属于I类非特异性脂质转移蛋白。基于氨基酸序列构建的系统发生树揭示,该基因与其他茄科nsLTP具有高度保守的序列相似性,核酸和氨基酸水平分别具75%~85%和60%~92%的同源性。对该基因在互作早期基因表达时空性分析表明,StLTPa1基因不仅受病菌的诱导,在不同抗、感病的马铃薯基因型中差异表达,而且受一定浓度外源非生物激发子如水杨酸、茉莉酸和脱落酸的诱导并产生一定时间的持续效应,其诱导表达模式也表现出一定的差异。原位杂交结果显示StLTPa1主要在马铃薯茎、叶维管束系统的韧皮部细胞中表达。这些结果说明StLTPa1基因受病菌和非生物激发子诱导,在植物防御反应中发挥作用。 展开更多
关键词 马铃薯 非特异性脂质转移蛋白 StLTPa1 克隆 表达
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丹参非特异性脂质转移蛋白基因(SmLTP1)的克隆及其表达分析 被引量:7
16
作者 刘梅 生华 +2 位作者 化文平 储君 王喆之 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期63-68,共6页
对丹参EST序列进行Blast分析,获得一个新的非特异性脂质转移蛋白基因,命名为SmLTP1(GenBank注册号为EF187461)。该基因cDNA全长593bp,包含一个长为357bp的开放读码框,编码118个氨基酸。生物信息学结构分析表明,该蛋白具有植物nsLTP的典... 对丹参EST序列进行Blast分析,获得一个新的非特异性脂质转移蛋白基因,命名为SmLTP1(GenBank注册号为EF187461)。该基因cDNA全长593bp,包含一个长为357bp的开放读码框,编码118个氨基酸。生物信息学结构分析表明,该蛋白具有植物nsLTP的典型结构,即4对二硫键,4个α-螺旋,1个可结合和容纳脂肪酸分子的类似口袋状的疏水结构。实时荧光定量PCR分析结果表明,SmLTP1基因在丹参不同组织器官中差异表达,其表达受病原菌和茉莉酸甲酯的诱导,显示SmLTP1基因在植物防御反应中发挥作用。 展开更多
关键词 丹参 非特异性脂质转移蛋白 基因克隆 生物信息学分析 实时荧光定量PCR
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非特异性脂质转移蛋白突变体的构建及在两种硫氧还蛋白表达载体中的表达比较 被引量:5
17
作者 葛晓春 陈继超 +2 位作者 王文漪 曹凯鸣 孙崇荣 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期167-171,共5页
对水稻非特异性脂质转移蛋白 (Nospecificlipidtransferprotein ,nsLTP)LTP110中结构重要的 5个氨基酸位点进行了定点突变 ,测序结果证实了突变体构建成功。在尝试了多种大肠杆菌表达系统进行表达之后 ,发现硫氧还蛋白融合表达载体适合... 对水稻非特异性脂质转移蛋白 (Nospecificlipidtransferprotein ,nsLTP)LTP110中结构重要的 5个氨基酸位点进行了定点突变 ,测序结果证实了突变体构建成功。在尝试了多种大肠杆菌表达系统进行表达之后 ,发现硫氧还蛋白融合表达载体适合于LTP110野生型及突变体的表达。将编码野生型LTP110及突变体Y17A ,P72L ,R46A ,D45A ,C5 0A蛋白的cDNA顺序克隆进两种硫氧还蛋白表达载体并对其表达情况进行了比较 :pTrxFus载体可以在宿主菌GI72 4中以较低水平表达野生型LTP110及突变体Y17A ,P72L ,R46A融合蛋白 ,但不能表达D45A和C5 0A融合蛋白 ;pET32a(+)载体可以在宿主菌BL2 1(DE3)trxB- 中以可溶蛋白的形式表达野生型及所有突变型融合蛋白 ,且表达量比在pTrxFus载体 GI72 4突主菌中表达量高。对pET32a(+)载体中表达的LTP110融合蛋白进行了纯化 ,并利用带有荧光标记的脂肪酸分子对其测活 。 展开更多
关键词 NSLTP 定点突变 硫氧还蛋白 融合表达载体 荧光标记脂质 非特异性脂质转移蛋白 突变体 植物
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牡丹非特异性脂质转移蛋白基因PsLTP的生物信息学分析
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作者 问荣荣 苏钰 +3 位作者 高泽芳 徐梦宇 何雯雯 王步勇 《安徽农业科学》 CAS 2024年第2期87-92,共6页
[目的]了解牡丹非特异性脂质转移蛋白基因LTP的基因特征及其编码蛋白的生物学特性,探索其生物功能。[方法]运用Blast、ORF-Finder、ProtParam、SignalP 4.1、ProtScale和TMHMM 2.0 Server等生物信息学软件,分析牡丹nsLTP基因序列及其编... [目的]了解牡丹非特异性脂质转移蛋白基因LTP的基因特征及其编码蛋白的生物学特性,探索其生物功能。[方法]运用Blast、ORF-Finder、ProtParam、SignalP 4.1、ProtScale和TMHMM 2.0 Server等生物信息学软件,分析牡丹nsLTP基因序列及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽、磷酸化位点、保守结构域等,并运用DANMAN、MEGA软件进行多序列比对和系统发育树构建。[结果]牡丹nsLTP基因(NCBI登录号为:JZ840269.1)序列全长为685 bp,开放阅读框长为354 bp,编码蛋白包含117个氨基酸,理论等电点为8.93,为不稳定性蛋白。牡丹nsLTP蛋白为疏水性蛋白,含有信号肽但不含跨膜结构域,NetPho Server预测其含有8个丝氨酸和3个酪氨酸磷酸化位点及5个苏氨酸磷酸化位点。PsnsLTP蛋白具有植物LTP蛋白典型结构,即4个α-螺旋,4对二硫键,1个可结合和容纳脂质分子的疏水结构。多序列比对及系统发育树分析显示,PsLTP蛋白与绒毛烟草LTP蛋白(XP_009608993.1)的相识度62.7%,且进化树聚为同一小分支,遗传距离较近。[结论]通过对牡丹nsLTP基因特性及蛋白结构研究,系统性研究了牡丹nsLTP基因的生物信息学特性,为牡丹抗病抗逆功能基因的研究提供了依据,也为其他植物nsLTP基因研究提供了参考。 展开更多
关键词 牡丹 非特异性脂质转移蛋白基因LTP 蛋白结构 生物信息学
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薰衣草非特异性脂质转移蛋白基因nsLTP2-1和nsLTP2-2的克隆与功能分析
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作者 张夏夏 陈凌娜 +2 位作者 杨扬 赵旌汝 陈永坤 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期834-843,共10页
非特异性脂质转移蛋白(nsLTP,non-specific lipid transfer proteins)在植物脂质转运和分泌中发挥重要作用。本研究从薰衣草(Lavandula angustifolia)中克隆到2个II型nsLTP基因,命名为nsLTP2-1和nsLTP2-2,并对其进行功能分析。生信分析... 非特异性脂质转移蛋白(nsLTP,non-specific lipid transfer proteins)在植物脂质转运和分泌中发挥重要作用。本研究从薰衣草(Lavandula angustifolia)中克隆到2个II型nsLTP基因,命名为nsLTP2-1和nsLTP2-2,并对其进行功能分析。生信分析表明,nsLTP2-1和ns LTP2-2分别编码119个和117个氨基酸,具有脂转移蛋白(LTP,lipid transfer proteins)保守结构域和8个高度保守的半胱氨酸残基;系统进化分析显示它们处于两个分支,与同科的紫苏(Perilla frutescens)相似性最高。基因表达分析显示2个基因均在花蕾中高表达,在叶片、茎和花瓣中几乎不表达,在花萼中的表达存在差异,nsLTP2-1和nsLTP2-2分别在成熟花萼和幼嫩花萼中表达量更高;2个基因在花蕾和叶片中的表达均受到强光诱导,且在花蕾中的表达均受脱落酸诱导,而叶片中nsLTP2-1和nsLTP2-2的表达分别受茉莉酸甲酯和乙烯诱导。亚细胞定位显示2个nsLTPs均定位在细胞膜和细胞壁上,可能与次生代谢物的转运有关。过表达nsLTP2-1和nsLTP2-2烟草叶片经尼罗红染色后,经485~543 nm激发光激发,叶片腺毛头部的荧光显示多于野生型,说明本研究中的nsLTPs可能在脂类的合成和转运中起重要作用。这些结果为明确薰衣草脂转移蛋白在脂类及萜类转运中的功能研究提供了参考。 展开更多
关键词 薰衣草 非特异性脂质转移蛋白 激素处理 非生物胁迫 基因表达 亚细胞定位 尼罗红染色
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烟草非特异性脂质转移蛋白基因的克隆与表达分析 被引量:5
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作者 金大伟 杨军 +6 位作者 李锋 王燃 罗朝鹏 武明珠 魏攀 侯明生 林福呈 《烟草科技》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第1期12-20,共9页
为了阐明非特异性脂质转移蛋白基因Nt LTP1.1在烟草抗病抗逆反应中的功能,用c DNA末端快速扩增技术(Rapid-amplification of c DNA ends,RACE)从普通烟草中克隆了该基因全长,并通过生物信息学方法分析了c DNA序列结构、蛋白理化性质、... 为了阐明非特异性脂质转移蛋白基因Nt LTP1.1在烟草抗病抗逆反应中的功能,用c DNA末端快速扩增技术(Rapid-amplification of c DNA ends,RACE)从普通烟草中克隆了该基因全长,并通过生物信息学方法分析了c DNA序列结构、蛋白理化性质、保守基序、三级结构以及系统进化关系;利用q RT-PCR检测了该基因在不同组织中的表达模式以及胁迫条件下的表达差异。结果表明:Nt LTP1.1基因全长615 bp,编码蛋白含有129个氨基酸,为一种小分子碱性可溶性蛋白。蛋白序列N端含有信号肽,预测其可能定位于分泌途径中。Blast比对结果显示,烟草非特异性脂质转移蛋白与番茄ns LTP1序列相似性最高,含有8CM保守基序(8个半胱氨酸残基组成的保守基序)。蛋白三级结构预测表明,Nt LTP1.1具有ns LTP典型的三级结构,包括4个α-螺旋,4对二硫键,1个可结合和容纳脂质分子的疏水腔。多重比对结果显示,Nt LTP1.1 8CM结构域模式为C1-X9-C2-X13-C3C4-X19-C5XC6-X22-C7-X13-C8。系统进化分析结果表明,ns LTP进化形成5类,Nt LTP1.1属于Type I。表达模式分析显示,Nt LTP1.1基因主要在烟草叶片中表达,具有明显的组织表达特异性。在低温胁迫条件下表达受到抑制,在水杨酸诱导条件下表达上调。因此,推测Nt LTP1.1基因可能在烟草防御反应中发挥作用。 展开更多
关键词 烟草 非特异性脂质转移蛋白基因 克隆 表达分析 生物信息学
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