牛乳腺上皮细胞的分离培养 被引量：31

1

作者 李震 王英 +1 位作者 刘惠莉 张德福 《上海农业学报》 CSCD 2000年第3期25-28,共4页

比较了几种乳腺细胞分离培养方法的特点。实验证明 :胶原酶消化法和组织块种植法均可用于培养牛原代乳腺细胞。其中 ,胶原酶消化法容易得到均匀的乳腺细胞 ,且上皮细胞所占比例也比较高 ;组织块培养法不容易丢失、损伤上皮细胞 ,但上皮... 比较了几种乳腺细胞分离培养方法的特点。实验证明 :胶原酶消化法和组织块种植法均可用于培养牛原代乳腺细胞。其中 ,胶原酶消化法容易得到均匀的乳腺细胞 ,且上皮细胞所占比例也比较高 ;组织块培养法不容易丢失、损伤上皮细胞 ,但上皮细胞长出较晚 ,且占比例较低 ,然而 ,用于培养小动物乳腺组织具有优势 ,并且可结合组织块转移、胰蛋白酶消化纯化上皮细胞 ,用此方法本实验获得了牛乳腺上皮细胞富集的细胞系 ;同时讨论了乳腺上皮细胞增殖与分化的关系 。 展开更多

关键词 牛乳腺上皮细胞 分离培养 胶原酶消化法 组织块种植法 细胞增殖 细胞分化

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猪骨骼肌卫星细胞培养方法的建立 被引量：18

2

作者 王继新 江青艳 +1 位作者 高淑静 傅伟龙 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期89-89,91,共2页

关键词 猪 骨骼肌 卫星细胞 体外培养 胴体瘦肉率 胶原酶消化法

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新生大鼠成骨细胞原代培养与鉴定 被引量：15

3

作者 程浩 张延芳 许巍 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第41期7199-7204,共6页

背景:组织工程需要大量的种子细胞,成骨细胞是骨组织工程的重要种子细胞之一。但是成骨细胞培养难度大,不同培养方法得到的成骨细胞数量、纯度、增殖及分化活性各有区别。目的:验证及比较成骨细胞原代培养常用的3种方法,探索一种操作简... 背景:组织工程需要大量的种子细胞,成骨细胞是骨组织工程的重要种子细胞之一。但是成骨细胞培养难度大,不同培养方法得到的成骨细胞数量、纯度、增殖及分化活性各有区别。目的:验证及比较成骨细胞原代培养常用的3种方法,探索一种操作简便,既经济又高效的原代培养成骨细胞的方法,为进一步的实验研究奠定基础。方法:取新出生72 h内SD大鼠乳鼠颅骨,以胶原酶消化法、分段胶原酶消化法及组织块法分离成骨细胞,进行细胞形态观察、细胞化学染色、CCK-8法绘制生长曲线及锥虫蓝排斥法计数活细胞率。结果与结论:分离培养的成骨细胞增殖良好,具备典型成骨细胞特性,细胞化学染色结果明显。胶原酶消化法比分段胶原酶消化法提取的成骨细胞数量多,细胞存活率高(P<0.05);且比分段胶原酶消化法操作简单,耗时短。组织块法操作最为简单,对细胞损伤较小,但是细胞数量低、耗时长,很难用于大规模成骨细胞培养。胶原酶消化法是一种方便、高效、理想的原代成骨细胞分离培养方法。 展开更多

关键词 组织构建 骨组织构建 成骨细胞 原代培养 胶原酶消化法 组织块法 胶原酶 成骨细胞鉴定

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尿路平滑肌细胞的培养和鉴定 被引量：10

4

作者 周昕 耿红全 +6 位作者 吴湘如 谢华 陆建华 蔡冰 徐卯生 薛皓亮 陈方 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期348-350,共3页

目的　建立尿路 (膀胱、输尿管、肾盂 )平滑肌细胞分离、培养、扩增的常规方法。　方法　人肾盂及输尿管标本各 1例、人膀胱标本 3例 ,猪输尿管标本 1例、猪膀胱标本 5例 ,采用胶原酶消化法从中分离尿路平滑肌细胞 ,在含 10 %胎牛血清的... 目的　建立尿路 (膀胱、输尿管、肾盂 )平滑肌细胞分离、培养、扩增的常规方法。　方法　人肾盂及输尿管标本各 1例、人膀胱标本 3例 ,猪输尿管标本 1例、猪膀胱标本 5例 ,采用胶原酶消化法从中分离尿路平滑肌细胞 ,在含 10 %胎牛血清的DMEM中培养 ,观察细胞形态及扩增情况 ,用免疫组化方法鉴定细胞类型特异性蛋白质α 肌动蛋白 (α actin)。　结果　尿路平滑肌细胞生长良好 ,呈现典型的平滑肌细胞形态。细胞经 6次传代仍扩增迅速 ,免疫组化染色显示α actin阳性。　结论　此培养方法简单、可靠 ,短期内可获得大量纯净的尿路平滑肌细胞。 展开更多

关键词 尿路平滑肌细胞 培养方法 胶原酶消化法 DMEM 免疫组织化学 Α-肌动蛋白

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用胶原酶消化法培养德保矮马耳缘组织成纤维细胞初探 被引量：9

5

作者 马月辉 周向梅 +1 位作者 关伟军 李晗 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1282-1288,共7页

将德保矮马耳缘组织经胶原酶消化法培养成原代细胞,并成功建立起该组织成纤维细胞系。这种细胞贴壁生长,具有密度接触性抑制性质;该方法获得的原代细胞经传代后接种,细胞群体倍增时间(PDT)为35.9h;细胞染色体众数2n=64的细胞数占91.3%～... 将德保矮马耳缘组织经胶原酶消化法培养成原代细胞,并成功建立起该组织成纤维细胞系。这种细胞贴壁生长,具有密度接触性抑制性质;该方法获得的原代细胞经传代后接种,细胞群体倍增时间(PDT)为35.9h;细胞染色体众数2n=64的细胞数占91.3%～92.8%;乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶分析,没有其它细胞系污染;细菌、真菌、病毒、支原体检测阴性。该系符合ATCC要求的细胞系鉴定项目,成为保护矮马这一国家重要畜禽品种的宝贵遗传资源,并为相关遗传学研究提供了有效的试验材料。同时得出胶原酶消化培养法比组织块培养法在获得原代细胞速度快;组织块培养法的细胞群体倍增时间(PDT)为48h。 展开更多

关键词 胶原酶消化法 组织 矮马 原代细胞 成纤维细胞系 苹果酸脱氢酶 细胞群体 细胞染色体 乳酸脱氢酶 同工酶分析 遗传学研究 培养法 ATCC 遗传资源 畜禽品种 试验材料 接触性 细胞数 支原体 时间 倍增 接种 病毒

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酸性成纤维细胞生长因子和肝细胞生长因子在肝干细胞分化成熟中的作用 被引量：8

6

作者 王悍 滕皋军 +1 位作者 缪竞陶 张贵祥 《中华放射学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期124-128,共5页

目的　初步探讨了酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)及肝细胞生长因子 (HGF)对大鼠胎肝干细胞分化成熟的影响。方法　采用胶原酶消化法分离胎龄 13d的SD大鼠胎肝细胞 ,分别接种于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组细胞培养瓶中进行体外培养。Ⅰ组 :培养液... 目的　初步探讨了酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)及肝细胞生长因子 (HGF)对大鼠胎肝干细胞分化成熟的影响。方法　采用胶原酶消化法分离胎龄 13d的SD大鼠胎肝细胞 ,分别接种于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组细胞培养瓶中进行体外培养。Ⅰ组 :培养液中含酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和肝细胞生长因子 (HGF) ;Ⅱ组 :培养液中含aFGF ;Ⅲ组 :培养液中含HGF ;Ⅳ组培养液中无细胞因子 ,此组作为对照组。检测在相同培养时间 (第 3、5、7、9、11天 )细胞培养上清液中甲胎蛋白(AFP)和白蛋白 (ALB)的含量 ;并用免疫细胞化学法鉴定在无细胞因子干预培养 3d后 ,胎肝干细胞对细胞角质素 19(CK 19)的表达。结果　Ⅰ组、Ⅱ组及Ⅲ组分别与Ⅳ组比较 ,在相同培养时间的培养上清液中AFP的含量均较少 ,而ALB的含量均较多 ,且差异均有显著性意义 (AFP :t=6 2 6 4 ,3 2 2 1,2 5 91,P <0 0 5 ;ALB :t=6 32 4 ,2 14 5 ,2 95 4 ,P <0 0 5 ) ;Ⅱ组和Ⅲ组相同培养时间的培养上清液中AFP及ALB的含量差异均无显著性意义 (AFP :t =0 5 0 1,P >0 0 5 ;ALB :t =0 6 16 ,P >0 0 5 ) ;而Ⅳ组分别与Ⅱ组和Ⅲ组比较 ,在相同培养时间的培养上清液中ALB的含量均较少 ,而AFP的含量均较多 ,差异也均有显著性意义 (AFP :t =3 2 2 1,2 5 91,P 展开更多

关键词 酸性成纤维细胞生长因子 肝细胞生长因子 肝干细胞 胶原酶消化法

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组织块培养法及胶原酶消化法分离培养豚鼠耳蜗微血管内皮细胞 被引量：3

7

作者 魏运军 张学渊 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2002年第3期158-160,T001,共4页

目的　建立稳定的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞的培养方法。方法　采用显微解剖技术分离出豚鼠耳蜗血管纹 ,分别用组织块法及酶消化法进行培养及纯化。结果　耳蜗血管纹组织块培养后 2天 ,部分组织块边缘有散在的细胞生长 ,这些细胞逐渐增殖... 目的　建立稳定的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞的培养方法。方法　采用显微解剖技术分离出豚鼠耳蜗血管纹 ,分别用组织块法及酶消化法进行培养及纯化。结果　耳蜗血管纹组织块培养后 2天 ,部分组织块边缘有散在的细胞生长 ,这些细胞逐渐增殖形成大片细胞集落 ;耳蜗血管纹组织经胶原酶消化后 1～ 3天 ,可观察到培养皿底由一些细胞组成的细胞岛 ;细胞纯化后大多呈多边形 ,致密融合时具有内皮细胞培养时典型的“铺路石样”外观 ,经免疫组化检测其内皮细胞标志性抗原Ⅷ因子 ,95 %以上的培养细胞的胞浆中呈棕黄色阳性反应。 展开更多

关键词 组织块培养法 胶原酶消化法 血管纹 内皮细胞 细胞培养 免疫细胞化学染色 血迷路屏障

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胶原酶消化法、组织块贴壁法培养的大鼠RASMCs生长、增殖及分化对比观察 被引量：6

8

作者 赵志敏 王国坤 +3 位作者 王杨 杨帆 龚德军 徐志云 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第28期33-36,I0001,共5页

目的比较胶原酶消化法、组织块贴壁法培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(RASMCs)生长、增殖及分化的影响。方法选择6~8周龄雄性SD大鼠6只,取胸主动脉及主动脉弓部,保留中膜备用。分别采用胶原酶消化法、组织块贴壁法培养RASMCs。采用α-肌... 目的比较胶原酶消化法、组织块贴壁法培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(RASMCs)生长、增殖及分化的影响。方法选择6~8周龄雄性SD大鼠6只,取胸主动脉及主动脉弓部,保留中膜备用。分别采用胶原酶消化法、组织块贴壁法培养RASMCs。采用α-肌动蛋白免疫荧光染色法鉴定RASMCs,并比较两种方法培养第0、24、36、48、60、72、84、96 h RASMCs生长情况。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期。采用实时定量PCR法检测细胞表型标志基因表达,包括收缩型标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转胶蛋白(TAGLN)、肌球蛋白重链11(MYH-11)、转录因子1(SP-1)及合成型标志基因骨桥蛋白(OPN)。结果胶原酶消化法、组织块贴壁法均成功分离出RASMCs,细胞纯度均在95%以上。培养36、48、60、72 h时,组织块贴壁法分离、培养的RASMCs计数多于胶原酶消化法(P均<0.05)。培养36、48、60、72 h时,胶原酶消化法分离、培养的RASMCs活力优于组织块贴壁法(P均<0.05)。两种方法分离、培养的RASMCs G_1、G_2、S期细胞所占比例比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。胶原酶消化法分离、培养的RASMCs中α-SMA、TAGLN、MYH-11 mRNA相对表达量均高于组织块贴壁法,OPN mRNA相对表达量低于组织块贴壁法(P均<0.05)。结论胶原酶消化法、组织块贴壁法均成功分离、培养出RASMCs。胶原酶消化法分离、培养的RASMCs生长、增殖较慢,但保持收缩表型;组织块贴壁法分离、培养的RASMCs生长、增殖较快,但有向合成表型转化的趋势。 展开更多

关键词 血管平滑肌细胞 胸主动脉 胶原酶消化法 组织块贴壁法 细胞生长 细胞增殖 细胞分化 大鼠

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小白鼠乳腺上皮细胞的体外培养 被引量：1

9

作者 陶海静 王老七 《郑州牧业工程高等专科学校学报》 2003年第2期81-82,100,共3页

本试验对小白鼠乳腺上皮细胞的原代培养方法进行了探索。胶原酶消化法和组织块种植法均可用于培养小白鼠原代乳腺细胞。胶原酶消化法容易得到均匀的乳腺细胞 ,且上皮细胞所占比例也比较高。组织块种植法不容易丢失、损伤上皮细胞 ,然而... 本试验对小白鼠乳腺上皮细胞的原代培养方法进行了探索。胶原酶消化法和组织块种植法均可用于培养小白鼠原代乳腺细胞。胶原酶消化法容易得到均匀的乳腺细胞 ,且上皮细胞所占比例也比较高。组织块种植法不容易丢失、损伤上皮细胞 ,然而上皮细胞长出较晚 ,且占比例较低。结果表明 ,可结合组织块转移。 展开更多

关键词 小白鼠 乳腺 上皮细胞 体外培养 原代培养 胶原酶消化法 组织块种植法 胰蛋白酶

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一种简便分离纯化大鼠胰岛方法的探索 被引量：5

10

作者 郝丽萍 胡学锋 +3 位作者 曲巍 赵要武 杨年红 孙秀发 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期69-71,共3页

　目的　探索可大量获取纯化大鼠胰岛的最佳方法。方法　采用胰管内灌注生理盐溶液 KRBB, 外置胶原酶消化法及用单核细胞分离液Histopaque 1077纯化胰岛。结果　成年Wistar大鼠胰腺消化后能获得 (540±84) 胰岛/胰腺, 纯化后获得 (3... 　目的　探索可大量获取纯化大鼠胰岛的最佳方法。方法　采用胰管内灌注生理盐溶液 KRBB, 外置胶原酶消化法及用单核细胞分离液Histopaque 1077纯化胰岛。结果　成年Wistar大鼠胰腺消化后能获得 (540±84) 胰岛/胰腺, 纯化后获得 (335±81) 胰岛/胰腺, 纯度可达90%。纯化后的胰岛培养上清液中未检测到胰淀粉酶。胰岛培养1周后, 胰岛素分泌量仍保持较旺盛状态。结论　本方法能获得大量纯度较高且活性好的胰岛, 是一种简便高效的胰岛分离方法。 展开更多

关键词 胰岛分离 成年WISTAR大鼠 胰腺 分离纯化 胰管 法能 胰岛素分泌量 胶原酶消化法 生理 保持

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人胚肝细胞分离培养研究 被引量：3

11

作者 黄柏英 余剑英 祝和成 《湘南学院学报（自然科学版）》 2005年第1期10-11,14,共3页

目的　探讨体外优化培养人胚肝细胞的方法。方法　采用胰蛋白酶和聚乙烯吡咯烷酮(pvp) ,胶原酶,胶原酶和pvp消化法分离人胚肝细胞,并比较3种方法对分离人胚肝细胞的效果。结果　运用这三种方法均能成功地培养出原代肝细胞,并能够传代;... 目的　探讨体外优化培养人胚肝细胞的方法。方法　采用胰蛋白酶和聚乙烯吡咯烷酮(pvp) ,胶原酶,胶原酶和pvp消化法分离人胚肝细胞,并比较3种方法对分离人胚肝细胞的效果。结果　运用这三种方法均能成功地培养出原代肝细胞,并能够传代;但胶原酶和pvp消化法分离细胞效果最好,细胞贴壁生长能力强。三种消化方法其细胞存活率从高到低依次为胶原酶和pvp消化法、胶原酶消化法、胰蛋白酶和pvp消化法。结论　人胚肝细胞的分离首选胶原酶和pvp消化法,使用该法在体外培养的人胚肝细胞生长良好,可用于肝细胞移植和生物人工肝等方面的研究。 展开更多

关键词 人胚 分离培养 聚乙烯吡咯烷酮(pvp) 胶原酶消化法 胰蛋白酶 原代肝细胞 细胞存活率 肝细胞移植 优化培养 生长能力 消化方法 细胞生长 体外培养 人工肝

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肉豆蔻酸对猪肌内脂肪前体细胞分化聚酯和脂肪酸组成的影响 被引量：4

12

作者 谢秋萍 束刚 +4 位作者 王松波 朱晓彤 王丽娜 高萍 江青艳 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第S1期160-161,共2页

肉豆蔻酸是一种14碳饱和脂肪酸。以往的研究表明,肉豆蔻酸能够影响机体的脂肪代谢,但迄今有关肉豆蔻酸对脂肪前体细胞的分化聚酯是否具有调节作用尚未见报道。为此,本试验选用5-7日龄长白仔猪,采用胶原酶消化法,从背最长肌分离并纯化肌... 肉豆蔻酸是一种14碳饱和脂肪酸。以往的研究表明,肉豆蔻酸能够影响机体的脂肪代谢,但迄今有关肉豆蔻酸对脂肪前体细胞的分化聚酯是否具有调节作用尚未见报道。为此,本试验选用5-7日龄长白仔猪,采用胶原酶消化法,从背最长肌分离并纯化肌内脂肪前体细胞,并在分化培养基中添加不同浓度(0μM、10μM、50μM、100μM)的肉豆蔻酸,诱导脂肪前体细胞分化。在不同分化时间点(1天、3天、5天)观察细胞形态并进行油红O染色。 展开更多

关键词 肌内脂肪 脂肪前体细胞 肉豆蔻酸 背最长肌 脂肪代谢 胶原酶消化法 饱和脂肪酸 油红 分化培养基 长白仔猪

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人脐静脉内皮细胞分离培养方法的建立及优化 被引量：3

13

作者 马振华 张连杰 马艳琴 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 2015年第3期285-289,共5页

为优化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原代及传代的培养方法,建立一种简便且能够获得数量较多及活力良好的HUVEC培养体系。分离脐静脉并插管,用0.1%的II型胶原酶灌注消化分离内皮细胞。M199完全培养基悬浮并接种于细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养... 为优化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原代及传代的培养方法,建立一种简便且能够获得数量较多及活力良好的HUVEC培养体系。分离脐静脉并插管,用0.1%的II型胶原酶灌注消化分离内皮细胞。M199完全培养基悬浮并接种于细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。待细胞铺满80%时,0.25%胰酶-EDTA消化传代培养。倒置显微镜观察内皮细胞生长情况,姬姆萨染色法鉴定内皮细胞的形态,vWF因子相关抗原免疫荧光法鉴定内皮细胞。比较不同胶原酶消化时间、不同接种密度、不同胰酶消化时间、不同培养基组分对细胞得率、形态和纯度的影响。结果表明,原代培养时,II型胶原酶最佳消化时间为15min,最佳接种密度为1×106 mL-1;传代培养时,胰酶最佳消化时间为2min。倒置显微镜下观察和姬姆萨染色结果显示,贴壁内皮细胞呈长梭形,且呈单层铺路石状排列。免疫荧光检测结果表明,细胞胞浆呈绿色荧光,为vWF因子阳性细胞,DAPI衬染细胞核呈蓝色,显示内皮细胞纯度接近100%。本实验成功建立了HUVEC原代分离培养的优化体系,纯度高、活力好,为后续研究做好了准备。 展开更多

关键词 人脐静脉血管内皮细胞 胶原酶消化法 姬姆萨染色 免疫荧光技术

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大肠癌细胞的原代培养方法 被引量：3

14

作者 杨磊磊 戴岳楚 +4 位作者 董米连 朱敏 林雪飞 廖伟 梅统 《中国中西医结合外科杂志》 CAS 2012年第4期341-345,共5页

目的:探讨大肠癌细胞体外分离培养方法,建立合理、高效、稳定的短期大肠癌细胞原代培养模式。方法:取60例大肠癌(T3或T4,且CT示肿瘤直径>2.0 cm)的新鲜肿瘤组织,随机分为黏膜层取材组与浆膜层取材租,分别采用组织块法、机械分离法、... 目的:探讨大肠癌细胞体外分离培养方法,建立合理、高效、稳定的短期大肠癌细胞原代培养模式。方法:取60例大肠癌(T3或T4,且CT示肿瘤直径>2.0 cm)的新鲜肿瘤组织,随机分为黏膜层取材组与浆膜层取材租,分别采用组织块法、机械分离法、胰酶消化法、胶原酶消化法进行体外培养大肠癌细胞,对不同方法及培养条件进行比较并加以改进。结果:黏膜层取材组优于浆膜层取材组(P<0.05),胶原酶消化法优于胰酶消化法(P<0.05),胰酶消化法优于机械分离法(P<0.05),胶原酶消化法是最优的人类大肠癌细胞原代培养方法,细胞培养成功率达到66.7%。结论:通过黏膜层取材的胶原酶消化法可成功建立较为合理、高效、稳定的短期大肠癌细胞原代培养模式。 展开更多

关键词 大肠癌细胞 原代培养 鉴定 黏膜层 胶原酶消化法

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端粒酶催化亚单位转染血管内皮细胞的实验研究 被引量：3

15

作者 代晓明 李龙江 +4 位作者 温玉明 王昌美 刘华 刘坤 李胜富 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期373-375,389,共4页

目的 探讨端粒酶催化亚单位转染血管内皮细胞后,血管内皮细胞增生活性的变化。方法 应用胶原酶消化法培养脐静脉血管内皮细胞(UE),ABC法检测内皮细胞CD34表达。脂质体介导内皮细胞转染,MTT法测定细胞代谢活性并测定细胞生长曲线。基于... 目的 探讨端粒酶催化亚单位转染血管内皮细胞后,血管内皮细胞增生活性的变化。方法 应用胶原酶消化法培养脐静脉血管内皮细胞(UE),ABC法检测内皮细胞CD34表达。脂质体介导内皮细胞转染,MTT法测定细胞代谢活性并测定细胞生长曲线。基于逆转录聚合酶链反应的端粒重复末端扩增分析法检测端粒酶活性表达。结果 培养的细胞贴壁后为单层呈铺路石状排列。细胞爬片CD34染色呈阳性,pBABE-HYGRO-hERT转染内皮细胞测定端粒酶活性的吸光度为0.889。MTT实验表明:在各个时间点转染阳性细胞(HC)的吸光值都高于脐静脉血管内皮细胞(UE)(P<0.05)。UE与HC的细胞生长曲线形态相似,8 d内HC数量增长了约4倍。在各个时间点:HC较UE细胞数多(P<0.05)。结论 pBABE-HYGRO-hTERT转染内皮细胞后,提高了内皮细胞端粒酶的活性和增殖能力。 展开更多

关键词 转染 血管内皮细胞 端粒酶催化亚单位 脐静脉血 端粒酶活性 细胞生长 HC 胶原酶消化法 末端 细胞代谢

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肺泡型细胞培养方法的改良及其应用 被引量：1

16

作者 肖玉 李涛 麦根荣 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2005年第5期525-528,共4页

目的研究不同方法对体外培养肺泡型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法采用不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织,低密度接种,常规浓度含血清培养和无血清培养,抗大鼠IgG包被与不包被,倒置显微... 目的研究不同方法对体外培养肺泡型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法采用不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织,低密度接种,常规浓度含血清培养和无血清培养,抗大鼠IgG包被与不包被,倒置显微镜观察细胞生长,检测细胞活力,免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞。结果两种方法消化、分离组织,肺泡型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异。结论不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡型上皮细胞功能的需要,从而简化了体外培养肺泡型上皮细胞的程序。 展开更多

关键词 细胞培养方法 肺泡Ⅱ型上皮细胞 免疫组织化学方法 胰蛋白酶消化法 无血清培养 改良 胶原酶消化法 经统计学分析 上皮细胞功能 体外培养 存活时间 不同浓度 显著性差异 细胞生长 微镜观察 细胞活力 电镜检测 消化分离 体外研究

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大鼠颌下腺上皮细胞原代培养转染实验 被引量：1

17

作者 汤晓飞 高文涛 +3 位作者 孙宏晨 张泽兵 徐辉 欧阳喈 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第2期149-152,共4页

目的 :转染质粒pSV2neo、pSV3neo ,使大鼠颌下腺上皮细胞永生化 ,进而建立大鼠颌下腺肌上皮细胞系。方法 :采用改良磷酸钙沉淀法 ,将制备的质粒pSV2neo、pSV3neo转染大鼠颌下腺上皮细胞 ,G4 18筛选 ,Southern印迹杂交、透射电镜、免疫... 目的 :转染质粒pSV2neo、pSV3neo ,使大鼠颌下腺上皮细胞永生化 ,进而建立大鼠颌下腺肌上皮细胞系。方法 :采用改良磷酸钙沉淀法 ,将制备的质粒pSV2neo、pSV3neo转染大鼠颌下腺上皮细胞 ,G4 18筛选 ,Southern印迹杂交、透射电镜、免疫组化及软琼脂培养检测所筛选阳性细胞的性质。结果 :经质粒pSV2neo、pSV3neo转染分离的大鼠颌下腺上皮细胞仍保留上皮细胞的形态 ,生存期延长。经pSV3neo转染的上皮细胞 ,Southern印迹杂交证明整合有SV4 0T抗原 (LT) ;免疫组化和透射电镜观察显示存在有大量的肌上皮细胞和少量的腺泡细胞 ;软琼脂培养无克隆形成。结论 展开更多

关键词 大鼠 颌下腺 肌上皮细胞 原代培养 胶原酶消化法 透射电镜 免疫组织化学

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双氢青蒿素治疗对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠脾细胞上清液一氧化氮水平的影响 被引量：2

18

作者 李文桂 陈雅棠 刘成伟 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期134-136,共3页

目的　研究双氢青蒿素治疗对卡氏肺孢子虫肺炎 (PCD)大鼠脾细胞上清液一氧化氮 (NO)水平的影响。方法　以醋酸可的松皮下注射Wistar大鼠 ,建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型 ,用 60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠 ,杀鼠取肺 ,胶原酶消化法分... 目的　研究双氢青蒿素治疗对卡氏肺孢子虫肺炎 (PCD)大鼠脾细胞上清液一氧化氮 (NO)水平的影响。方法　以醋酸可的松皮下注射Wistar大鼠 ,建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型 ,用 60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠 ,杀鼠取肺 ,胶原酶消化法分离脾细胞 ,脂多糖 (LPS)刺激培养 72h ,用NO试剂盒检测大鼠脾细胞上清液NO活性 ,同时设有感染组和正常对照组。结果　感染组和治疗组大鼠NO水平高于正常对照组 ,治疗组NO水平低于感染组。结论　卡氏肺孢子虫 (Pc)感染可能引起大鼠脾细胞分泌高水平NO ,发挥杀伤Pc作用 ,同时加重宿主组织炎症反应 ,抑制宿主的免疫应答 ;经双氢青蒿素治疗后 ,PCP大鼠脾细胞分泌NO降低 ,组织炎症反应减轻 。 展开更多

关键词 卡氏肺孢子虫肺炎 脾细胞 一氧化氮水平 上清液 素治疗 Wistar大鼠 脂多糖(LPS) 正常对照组 胶原酶消化法 NO水平 细胞分泌 炎症反应 免疫应答 醋酸可的松 试剂盒检测 双氢青蒿素 皮下注射 动物模型 实验大鼠 NO活性 正常状态

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盐酸吡格列酮对SHR心脏成纤维细胞增殖的影响及其与一氧化氮的关系 被引量：1

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作者 于心亚 赵连友 +5 位作者 郑强荪 田建伟 尚福军 李爱国 张海涛 王斌 《高血压杂志》 CSCD 2003年第6期595-598,共4页

目的　研究胰岛素增敏剂盐酸吡格列酮 (PIO)对培养的自发性高血压大鼠 (SHR)和试验大鼠 (Wistar)心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的影响及其与一氧化氮 (NO)的关系。方法　采用胶原酶消化法培养SHR和Wistar的CFs ,四氮唑蓝比色法 (MTT)测定CF... 目的　研究胰岛素增敏剂盐酸吡格列酮 (PIO)对培养的自发性高血压大鼠 (SHR)和试验大鼠 (Wistar)心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的影响及其与一氧化氮 (NO)的关系。方法　采用胶原酶消化法培养SHR和Wistar的CFs ,四氮唑蓝比色法 (MTT)测定CFs的增殖状况 ,硝酸还原酶法测定CFs培养上清NO浓度。结果　 (1) 1× 10 - 7、1× 10 - 6 、5× 10 - 6 、1× 10 - 5 mol/L的PIO作用 2 4h ,SHR和Wistar的吸收值 (A4 90 值 )分别为SHR 0 .19± 0 .0 1、0 .18± 0 .0 1、0 .16± 0 .0 1、0 .16± 0 .0 2 ;Wistar 0 .2 1± 0 .0 1、0 .19± 0 .0 1、0 .18± 0 .0 1、0 .17± 0 .0 1,与各自对照组 (SHR 0 .2 2± 0 .0 1,Wistar 0 .2 1± 0 .0 2 )相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 1)。 (2 ) 5× 10 - 6 mol/L的PIO作用 12h、2 4h、3 6h、48h、60h、72h后 ,SHR的A490 值与同一时间点相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 0 1) ;Wistar的A4 90 值与同一时间点的对照组相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 0 1)。 (3 ) 5×10 - 6 mol/L的PIO干预 48小时后 ,SHR和Wistar的CFs培养上清NO浓度分别为 111.2± 12 .4μmol/L、2 2 1.7± 3 5.3μmol/L ,与各自对照组 (76.8± 2 .4μmol/L、112 .1± 8.9μmol/L)相比 ,差异非常显著 (P <0 .0 0 1)。 结论? 展开更多

关键词 胰岛素抵抗 盐酸吡格列酮 自发性高血压 大鼠 心脏成纤维细胞 胶原酶消化法 胰岛素增敏剂

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肺泡Ⅱ型细胞培养方法的探讨 被引量：1

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作者 肖玉 麦根荣 李涛 《郧阳医学院学报》 2004年第5期273-276,F003,共5页

目的 :研究不同方法对体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法 :不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织 ,低密度接种 ,常规浓度含血清培养和无血清培养 ,抗大鼠IgG包被与不包被 ,倒... 目的 :研究不同方法对体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法 :不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织 ,低密度接种 ,常规浓度含血清培养和无血清培养 ,抗大鼠IgG包被与不包被 ,倒置显微镜观察细胞生长 ,检测细胞活力 ,免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞。结果 :两种方法消化、分离组织 ,肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异。结论 :不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的需要 ,从而简化了体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞的程序。 展开更多

关键词 肺泡Ⅱ型上皮细胞 无血清培养 体外培养 存活时间 细胞培养 免疫组织化学方法 胰蛋白酶消化法 包被 胶原酶消化法 低密度

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