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以差速贴壁与化学药物并胰酶限时消化法纯化新生大鼠嗅鞘细胞:优于单一差速贴壁和化学药物法吗? 被引量：6
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作者 杨博宇 王锋 王玮 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第49期9761-9764,共4页
背景:目前国内外对嗅鞘细胞培养条件的报道各不相同,个别方法重复性较差,不利于实际应用。目的:观察差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化法纯化大鼠嗅鞘细胞的效果,并与化学药物法、差速贴壁法培养结果进行比较。设计、时间及地点:细胞学体... 背景:目前国内外对嗅鞘细胞培养条件的报道各不相同,个别方法重复性较差,不利于实际应用。目的:观察差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化法纯化大鼠嗅鞘细胞的效果,并与化学药物法、差速贴壁法培养结果进行比较。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-06/2008-06在福建医科大学人体解剖与组织胚胎学系实验室完成。材料:新生2d的SD大鼠8只,由福建医科大学试验动物中心提供。方法:无菌条件下完整取出大鼠双侧嗅球,剥除嗅球表面的软脑膜及毛细血管网,剪成0.5mm3的小块进行胰蛋白酶消化,过筛后按4.0×108L-1密度种植于包被多聚左旋赖氨酸的培养瓶中进行原代培养。设立4组:①未经纯化的常规对照组。②化学药物组加入5μmol/L阿糖胞苷抑制成纤维细胞分裂。③差速贴壁组采用Nash差速贴壁法纯化嗅鞘细胞。④差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化组首先采用Nash差速贴壁法去除大部分成纤维细胞,而后对于少量残留的成纤维细胞加入阿糖胞苷处理,培养6d贴壁细胞大部分融合后,加入1.25g/L胰蛋白酶消化1min,显微镜下见突起回缩、细胞变圆、少量细胞浮起时终止消化。主要观察指标:嗅鞘细胞的形态,NGFRp75免疫细胞荧光染色结果。结果:体外培养的新生大鼠嗅球嗅鞘细胞主要为双极或三极细胞,其突起细长;未经纯化的常规对照组培养7d时视野内成纤维细胞已达60%以上,至14d成纤维细胞完全长满;经过纯化处理的另外3组始终以嗅鞘细胞居多,嗅鞘细胞的形态与原代基本相同。存活的双极和3极嗅鞘细胞呈NGFRp75阳性反应,但化学药物组、差速贴壁组嗅鞘细胞纯度偏低,仅为75%;差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化组嗅鞘细胞纯化效率明显增高,达85%以上。结论:实验结果证实了差速贴壁+化学药物+胰酶限时消化法的三合一操作技术,是一种高效率的纯化培养嗅球嗅鞘细 展开更多
关键词 差速贴壁 阿糖胞苷 胰酶限时消化 纯化 嗅球 嗅鞘细胞
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胰酶限时消化在嗅鞘细胞培养中的运用 被引量：3
2
作者 徐朝伟 李佳 +2 位作者 付裕 周瑞瑞 张旭 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2011年第6期425-427,443,共4页
目的探索出一套高效、实用的大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的培养和纯化方案。方法分离SD大鼠嗅球的外两层组织,剪切消化成细胞悬液进行接种。采用3种方法进行OECs的培养和纯化:(1)A组分别经6h、24h两次差速贴壁去除杂质细胞,培养至12d左右消... 目的探索出一套高效、实用的大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的培养和纯化方案。方法分离SD大鼠嗅球的外两层组织,剪切消化成细胞悬液进行接种。采用3种方法进行OECs的培养和纯化:(1)A组分别经6h、24h两次差速贴壁去除杂质细胞,培养至12d左右消化重悬细胞进行爬片分析。(2)B组分别经6h、24h两次差速贴壁去除杂质细胞,培养至12d左右经胰酶限时消化,留成纤维细胞于瓶壁,重悬的细胞进行爬片分析。(3)C组采用经典的Nash法(分别经18h、36h两次差速贴壁去除杂质细胞),培养至11d左右消化重悬细胞进行爬片分析。采用NGFRP75与碘化丙啶(PI)双染的方法进行OECs的鉴定和纯度分析。结果在共聚焦显微镜下呈双染阳性的细胞为OECs,OECs多数突起细长,呈双极或三极,少量呈单极或多极。A、B、C组所纯化的OECs纯度分别为(67.3±6.2)%、(83.7±7.7)%和(74.6±9.5)%,3组间比较有统计学差异(F=13.633,P<0.01),B组所得OECs纯度均较另两组高(P<0.05)。结论经6h、24h两次差速贴壁+胰酶限时消化可以获得较高纯度的OECs,能够满足动物实验的需要。 展开更多
关键词 嗅鞘细胞 细胞培养技术 差速贴壁 胰酶限时消化
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