小鼠胰星状细胞的分离培养及鉴定 被引量：8

1

作者 唐元瑜 苏式兵 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2010年第1期28-32,共5页

目的:建立简单易行的小鼠胰星状细胞(PSCs)原代培养方法,为胰腺纤维化研究提供可靠的体外细胞模型.方法:采用植块法结合酶消化法进行培养,即在无菌条件下取小鼠正常胰腺组织,经过剪碎、胰蛋白酶消化后植入培养瓶中贴壁培养,并予限制性... 目的:建立简单易行的小鼠胰星状细胞(PSCs)原代培养方法,为胰腺纤维化研究提供可靠的体外细胞模型.方法:采用植块法结合酶消化法进行培养,即在无菌条件下取小鼠正常胰腺组织,经过剪碎、胰蛋白酶消化后植入培养瓶中贴壁培养,并予限制性条件培养基进行纯化,通过倒置生物显微镜对传代前后所培养细胞进行形态学、自发荧光及油红染色脂滴的观察,并结合细胞免疫化学和免疫荧光等方法来鉴定小鼠PSCs.结果:小鼠原代PSCs培养3-4d后油红染色阳性,并能观察到自发荧光现象;传代后的细胞形态主要表现为体积较大,伪足发达,呈"星芒状"或"乌贼样";细胞免疫荧光染色和细胞免疫化学染色显示α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达阳性.结论:植块与酶消化结合法分离小鼠胰腺星状细胞,简单实用、成功率高,能够满足体外实验的要求. 展开更多

关键词 胰星状细胞 培养 鉴定 植块法

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大鼠胰星状细胞的分离与培养 被引量：8

2

作者 贾一韬 李兆申 《胰腺病学》 2003年第3期158-161,共4页

目的　建立大鼠胰星状细胞 (pancreatic stellate cells,PSCs)的分离培养方法。方法　大鼠胰腺组织经胶原酶和链霉蛋白酶 E消化后 ,用 Nycodenz不连续密度梯度离心法分离 PSC,在 32 8nm紫外光激发下观察细胞的自发荧光现象 ,并以免疫组... 目的　建立大鼠胰星状细胞 (pancreatic stellate cells,PSCs)的分离培养方法。方法　大鼠胰腺组织经胶原酶和链霉蛋白酶 E消化后 ,用 Nycodenz不连续密度梯度离心法分离 PSC,在 32 8nm紫外光激发下观察细胞的自发荧光现象 ,并以免疫组化技术检测结蛋白 (desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白 (glial fibrillary acidic protein,GFAP)和α-平滑肌动蛋白 (α- sm ooth m uscle actin,α- SMA )的表达 ,同时观察培养细胞的形态和生长特性。结果　新鲜分离的大鼠 PSCs产率、活力和纯度分别约为 2 .5 ×10 6 /g胰腺、95 %和 90 %。培养的 PSCs可自发活化 ,表达 α- SMA,细胞由静止型转化为肌成纤维样细胞表型。原代培养 10天后细胞纯度 >95 % ,传代培养后细胞纯度可达 99%以上。结论　利用 Nycodenz密度梯度离心方法可成功分离大鼠 PSCs,其细胞产率、活力和纯度均可满足体外研究需要。 展开更多

关键词 大鼠 胰星状细胞 分离 培养 胰腺组织经胶原酶 链霉蛋白酶E

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胰星状细胞与胰纤维化发生机制的研究进展 被引量：6

3

作者 万远太 王天才 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第3期376-380,共5页

胰纤维化是慢性胰腺炎的主要病理特征,胰星状细胞(PSC) 的活化在胰纤维化发生发展过程中起着关键作用.细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、血小板生长因子(PDGF)、白介素(IL)和瘦素(Leptin)等在PSC 增生、活化... 胰纤维化是慢性胰腺炎的主要病理特征,胰星状细胞(PSC) 的活化在胰纤维化发生发展过程中起着关键作用.细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、血小板生长因子(PDGF)、白介素(IL)和瘦素(Leptin)等在PSC 增生、活化和细胞外基质(ECM)产生的过程中通过相应的信号途径发挥不同作用.信号级联最终通过转录因子如核转录因子κB(NF-κB)、过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和Kruppel样转录因子(KLF)家族成员等,与特定的DNA“靶位”结合对致纤维化靶基因发挥调控作用. 展开更多

关键词 纤维化 胰星状细胞 发生机制 靶位 PDGF 核转录因子ΚB 血小板生长因子 过氧化物酶体增生物激活受体 肿瘤坏死因子α(TNF-α) 信号途径

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大鼠胰星状细胞体外分离培养的实验研究 被引量：5

4

作者 万远太 赵秋 +2 位作者 王天才 王波 李德明 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期125-127,共3页

　目的　体外分离培养胰星状细胞 (PSC) 以建立合适的体外模型, 为进一步研究胰纤维化的分子发生机制打下实验基础。方法　采用改良Apte MV酶消化法体外分离培养PSC, 胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP) 免疫组化染色和荧光倒置显微镜观察自发... 　目的　体外分离培养胰星状细胞 (PSC) 以建立合适的体外模型, 为进一步研究胰纤维化的分子发生机制打下实验基础。方法　采用改良Apte MV酶消化法体外分离培养PSC, 胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP) 免疫组化染色和荧光倒置显微镜观察自发绿色荧光对原代培养的 PSC加以鉴定。结果　PSC与肝星状细胞 (HSC) 具有相似的特征, 细胞呈梭形或星形, 细胞骨架蛋白 GFAP染色阳性, 由于胞质内含维生素 A脂滴, 在荧光倒置显微镜下于 328nm波长处可见自发绿色荧光。结论　改良酶消化法可用于体外分离培养 PSC, PSC分离培养的成功为进一步研究PSC活化与抑制信号通路的分子机制提供了体外模型。 展开更多

关键词 胰星状细胞 体外分离 体外模型 GFAP 酶消化法 大鼠 倒置显微镜 荧光 信号通路 原代培养

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血管紧张素Ⅱ受体在大鼠胰星状细胞上的表达及其调节 被引量：2

5

作者 鲁临 李兆申 +4 位作者 许国铭 邹多武 屠振兴 龚燕芳 贾一韬 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期307-308,共2页

关键词 胰星状细胞 血管紧张素Ⅱ受体 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) 大鼠 肾素-血管紧张素系统 表达及 胰腺纤维化 调节 纤维化作用 效应细胞 直接作用 表达情况 受体亚型 调控机制 PSC RAS AT2 AT1

原文传递

人、鼠胰星状细胞3种细胞标志物desmin、GFAP、α-SMA的表达 被引量：2

6

作者 贾一韬 龚燕芳 +1 位作者 高峻 李兆申 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期607-610,共4页

目的研究人和大鼠胰星状细胞(PSCs)在培养过程中细胞标志物表达的动态变化。方法人和大鼠胰腺组织经胶原酶、链霉蛋白酶E和DNaseI联合消化后,采用Nycodenz不连续密度梯度离心方法分离PSCs,获得的细胞采用离心淘洗技术进行纯化。用激光... 目的研究人和大鼠胰星状细胞(PSCs)在培养过程中细胞标志物表达的动态变化。方法人和大鼠胰腺组织经胶原酶、链霉蛋白酶E和DNaseI联合消化后,采用Nycodenz不连续密度梯度离心方法分离PSCs,获得的细胞采用离心淘洗技术进行纯化。用激光共聚焦扫描显微镜观察新鲜分离细胞的维生素A(VitA)自发荧光现象,用免疫组化法检测细胞标志物———结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达。细胞接种培养后,观察细胞形态和生长特性,采用Western和Northern分析分别检测细胞标志物和I型前胶原α1链基因表达的动态变化。结果采用离心淘洗技术获得的人和大鼠PSCs纯度分别可达85%以上和95%以上。新分离的人和大鼠PSCs胞浆内有VitA自发性蓝绿色荧光。新分离大鼠PSCs表达desmin和GFAP,不表达α-SMA,而人PSCs均不表达desmin、GFAP或α-SMA。在体外培养过程中,大鼠PSCs表达desmin和GFAP逐渐减弱,但人和大鼠PSCs均开始大量表达α-SMA蛋白和Ⅰ型前胶原基因。结论利用离心淘洗技术可获得高纯度的人和大鼠PSCs。人和大鼠PSCs细胞标志物表达存在种属差异,但它们活化后均高表达α-SMA蛋白和I型前胶原基因。 展开更多

关键词 胰星状细胞 结蛋白 神经胶质原纤维酸性蛋白 Α-平滑肌动蛋白

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PDGF-BB活化PSCs的分子机制研究 被引量：1

7

作者 万远太 王天才 《武汉科技大学学报》 CAS 2005年第2期208-211,共4页

血小板生长因子(PDGF)是诱导胰星状细胞(PSCs)活化的重要细胞因子,其分子机制尚不清楚。用PDGF-BB诱导体外培养的PSCs,旨在探讨PDGF信号转导通路在胰纤维化形成的分子发生机制中的可能作用。PSCs与不同剂量PDGF-BB(10ng/mL,25ng/mL和50n... 血小板生长因子(PDGF)是诱导胰星状细胞(PSCs)活化的重要细胞因子,其分子机制尚不清楚。用PDGF-BB诱导体外培养的PSCs,旨在探讨PDGF信号转导通路在胰纤维化形成的分子发生机制中的可能作用。PSCs与不同剂量PDGF-BB(10ng/mL,25ng/mL和50ng/mL)共培养,24h后收集细胞,采用Westernblotting检测PSC中磷酸化细胞外信号调节激酶-1(pERK1)蛋白水平和RT-PCR检测Colα1(I)mRNA的表达。结果表明,不同剂量PDGF-BB作用于PSCs后,各组pERK1蛋白表达比空白对照组有不同程度上调;Colα1(I)mRNA在PSCs中表达也明显上调,且在一定范围内与PDGF-BB剂量呈正相关。 展开更多

关键词 血小板生长因子 胰星状细胞 磷酸化细胞外信号调节激酶-1 α1 Ⅰ型胶原

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高糖对大鼠胰星状细胞增殖和细胞外基质合成的影响

8

作者 贾一韬 龚燕芳 +2 位作者 许爱芳 屠振兴 李兆申 《胰腺病学》 2002年第4期218-220,共3页

目的探讨高糖刺激对大鼠胰星状细胞(pancreatic stellate cell, PSC)增殖和细胞外基质(extracellular matrix, ECM)合成的影响.方法分离培养大鼠PSC,取传第3～5代细胞,分别用正常葡萄糖(5.6 mmol/L葡萄糖)(正常对照)、高葡萄糖(25 mmol/... 目的探讨高糖刺激对大鼠胰星状细胞(pancreatic stellate cell, PSC)增殖和细胞外基质(extracellular matrix, ECM)合成的影响.方法分离培养大鼠PSC,取传第3～5代细胞,分别用正常葡萄糖(5.6 mmol/L葡萄糖)(正常对照)、高葡萄糖(25 mmol/L葡萄糖)(高糖组)和甘露醇(5.6 mmol/L葡萄糖+19.4 mmol/L甘露醇)(等渗对照组)处理5天后,用MTT法、3H-Thymidine掺入和3H-Proline掺入法分别检测细胞增殖、DNA合成和总胶原合成,同时用放免法检测细胞培养上清中Ⅲ型前胶原氨基末端多肽(amino-terminal propeptide of type Ⅲ procollagen, PⅢNP)和透明质酸(hyaluronic acid, HA)含量.结果与等渗对照组比较,高糖组PSC增殖、DNA合成、总胶原合成和细胞上清HA含量均显著增加(P<0.05),但细胞上清PⅢNP含量无显著性差异(P>0.05).结论高糖可刺激PSC增殖与胶原合成,参与PSC活化.体内高糖血症可能是PSC活化的机制之一. 展开更多

关键词 细胞增殖 胰星状细胞 高糖 细胞外基质 大鼠

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血管紧张素Ⅱ诱导胰腺星状细胞炎性活化的分子机制研究

9

作者 鲁临 李兆申 +4 位作者 许国铭 邹多武 屠振兴 龚燕芳 贾一韬 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期243-246,共4页

目的探讨血管紧张素Ⅱ对大鼠胰星状细胞(PSC)核因子κB(NF-κB)信号转导通路活化的影响。方法采用电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测细胞NF- κB的DNA结合活性,Western印迹方法检测NF-κB抑制蛋白(Iκ... 目的探讨血管紧张素Ⅱ对大鼠胰星状细胞(PSC)核因子κB(NF-κB)信号转导通路活化的影响。方法采用电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测细胞NF- κB的DNA结合活性,Western印迹方法检测NF-κB抑制蛋白(IκBs)降解。单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)基因和蛋白表达分别采用Northern印迹和ELISA方法检测。结果血管紧张素Ⅱ可诱导大鼠PSC内NF-κB发生双相活化,活化高峰分别出现在15 min和6 h后。NF-κB活化伴有IκBα和IκBβ联合降解。抗氧化剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)、二碘基苯(DPI)和N-乙酰丝氨酸可明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导的NF-κB活化,提示氧化应激反应在NF-κB活化中发挥了重要作用。NF-κB抑制剂 MG132和PDTC可显著下调血管紧张素诱导的MCP-1基因表达。结论血管紧张素Ⅱ可通过氧化应激机制活化PSC内NF-κB信号通路,诱导MCP-1表达,从而参与胰腺炎症和纤维化的发生。 展开更多

关键词 血管紧张素Ⅱ 胰星状细胞 核因子ΚB 单核细胞趋化蛋白-1 胰腺炎

原文传递

血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胰星状细胞增殖和胶原合成

10

作者 鲁临 李兆申 +3 位作者 许国铭 邹多武 屠振兴 龚燕芳 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期272-275,共4页

目的：研究血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）对大鼠胰星状细胞（pancreatic stellate cells，PSCs）增殖和活化的影响。方法：取第4～7代培养的大鼠PSCs，采用无血清DMEM培养液培养48h使细胞同步静止化后，换含1、10和100nmol／LAn... 目的：研究血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）对大鼠胰星状细胞（pancreatic stellate cells，PSCs）增殖和活化的影响。方法：取第4～7代培养的大鼠PSCs，采用无血清DMEM培养液培养48h使细胞同步静止化后，换含1、10和100nmol／LAngⅡ的无血清培养液继续培养24h或48h；另外，在加入100nmol／LAngII无血清培养液前加入100nmol／LAT1受体拮抗剂ZD7155或AT2受体拮抗剂PD123319。分别采用[^3H]-胸嘧啶核苷掺入、[^3H]-脯氨酸掺入、Western印迹和Northern印迹法动态检测细胞DNA合成速率、胶原合成速率、α-平滑肌动蛋白和Ⅰ型前胶原mRNA表达。结杲：与正常对照组比较，1nmol／LAngⅡ刺激24h后细胞DNA合成率无显著增加（P〉0．05），而10和100nmol／L处理组细胞DNA合成率显著增加（P值均〈0．05）；刺激48h后，1、10和100nmol／LAngⅡ处理组细胞胶原合成率和Ⅰ型前胶原mRNA表达水平均明显增加（P值均〈0．05），但α-平滑肌动蛋白表达无明显变化（P值均〉0．05）。与AngⅡ（100nmol／L）处理组比较，AngⅡ（100nmol／L）＋ZD7155（100nmol／L）处理组细胞DNA合成率、胶原合成率和Ⅰ型前胶原mRNA表达水平均显著下降（P值均〈0．01），而AngⅡ（100nmol／L）＋PD123319（100nmol／L）处理组均无明显变化（P值均〉0．05）。结论：AngⅡ通过AT1受体介导，可剂量依赖性诱导大鼠PSCs增殖和胶原合成，从而参与胰腺纤维化的发生。 展开更多

关键词 胰星状细胞 细胞增殖 胶原 血管紧张素Ⅱ

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胰星状细胞对胰腺癌细胞株Patu8988侵袭和转移的影响

11

作者 倪建琦 蒋小华 +2 位作者 严伟 葛梓 汤文浩 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2010年第3期240-244,共5页

目的:探讨永生化人胰星状细胞(IPSC)对胰腺癌细胞株Patu8988侵袭和转移的影响.方法:制备IPSC上清,用IPSC上清和Patu8988共培养,以单独培养的Patu8988为对照,比较实验组与对照组细胞的增殖、黏附能力,侵袭、迁移能力,克隆形成以及抵抗H2O... 目的:探讨永生化人胰星状细胞(IPSC)对胰腺癌细胞株Patu8988侵袭和转移的影响.方法:制备IPSC上清,用IPSC上清和Patu8988共培养,以单独培养的Patu8988为对照,比较实验组与对照组细胞的增殖、黏附能力,侵袭、迁移能力,克隆形成以及抵抗H2O2诱导的Patu8988凋亡能力.结果:与单独培养的胰腺癌细胞株Patu8988相比,IPSC上清对胰腺癌细胞株Patu8988细胞的增殖、黏附、迁移、侵袭能力及克隆形成能力有促进作用(均P<0.05),并能抑制H2O2诱导的Patu8988的凋亡(P<0.05).结论:胰星状细胞可能通过增强胰腺癌细胞株Patu8988的增殖、黏附、迁移、侵袭能力及克隆形成能力,并抑制其的凋亡,在胰腺癌的发展和转移中起重要作用. 展开更多

关键词 胰腺癌 胰星状细胞 侵袭 转移

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健脾化湿法及含药血清对小鼠胰星状细胞活化增殖的影响

12

作者 水楠楠 唐元瑜 《成都中医药大学学报》 2013年第2期10-12,共3页

目的:观察健脾化湿法及含药血清对小鼠胰星状细胞活化增殖的影响以筛选出最佳药物效应浓度。方法:体外传代培养小鼠胰星状细胞,采用MTT比色法观察健脾化湿方药血清、卡莫司他药物血清及空白血清对小鼠胰星状细胞活化增殖影响。结果:健... 目的:观察健脾化湿法及含药血清对小鼠胰星状细胞活化增殖的影响以筛选出最佳药物效应浓度。方法:体外传代培养小鼠胰星状细胞,采用MTT比色法观察健脾化湿方药血清、卡莫司他药物血清及空白血清对小鼠胰星状细胞活化增殖影响。结果:健脾化湿方药组均能够有效抑制小鼠胰星状细胞的活化增殖,终浓度为10%的健脾化湿方药组与同等浓度的空白血清组比较有差异(P<0.05),与无血清组比较亦同样有统计学意义(P<0.05)。结论:健脾化湿法及含药血清可有效抑制小鼠胰星状细胞的活化增殖,10%是其最佳药物效应浓度。 展开更多

关键词 健脾化湿法 血清药理 小鼠胰星状细胞 活化增殖 MTT比色法

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