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水飞蓟宾对高脂饮食小鼠胰岛β细胞的保护作用 被引量：3
1
作者 陈科 徐君 +3 位作者 何红晖 赵立玲 熊静 莫朝晖 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期165-170,共6页
目的:研究水飞蓟宾对高脂饮食喂养的C57BL/6J小鼠胰岛β细胞的保护作用及其可能的机制。方法:18只3周龄雄性C57BL/6J小鼠分为普通饮食组(n=6)、高脂饮食组(n=6)及水飞蓟宾干预高脂饮食组(n=6),干预10周后观察各组小鼠空腹血糖、胰岛素... 目的:研究水飞蓟宾对高脂饮食喂养的C57BL/6J小鼠胰岛β细胞的保护作用及其可能的机制。方法:18只3周龄雄性C57BL/6J小鼠分为普通饮食组(n=6)、高脂饮食组(n=6)及水飞蓟宾干预高脂饮食组(n=6),干预10周后观察各组小鼠空腹血糖、胰岛素、血脂、谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮变化及胰岛β细胞的脂质含量、抗氧化水平及凋亡情况,并检测胰腺组织胰岛素诱导基因-1(insulin-induced gene-1,Insig-1)、固醇调节原件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)和脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)的m RNA,以及Insig-1和SREBP-1c蛋白的表达水平。结果:与高脂饮食组相比,水飞蓟宾干预高脂饮食组小鼠胰岛分泌功能明显改善,血糖水平降低(P<0.05),胰岛组织脂质含量、氧化应激水平及凋亡水平均降低(均P<0.05);水飞蓟宾能促进胰岛组织Insig-1的表达,抑制SREBP-1c和FAS的表达(均P<0.05)。三组间谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮功能差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:水飞蓟宾对高脂饮食小鼠的胰岛β细胞具有保护作用,其机制可能与调节Insig-1/SREBP-1c途径及增加抗氧化活性有关,且长期口服水飞蓟宾安全性良好。 展开更多
关键词 水飞蓟宾 胰岛Β细胞 胰岛素诱导基因-1 固醇调节原件结合蛋白-1c 糖脂毒性
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西农萨能奶山羊INSIG-1编码区的克隆、序列特征分析和组织表达 被引量：8
2
作者 王慧 罗军 +4 位作者 胡仕良 席利萌 张犁苹 李芳 孙雨婷 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第8期24-30,共7页
【目的】克隆西农萨能奶山羊胰岛素诱导基因1(INSIG-1)编码区,并对其进行序列特征分析和组织表达规律研究。【方法】提取西农萨能奶山羊总RNA,反转录cDNA后进行PCR反应,对克隆得到的INSIG-1序列进行生物信息学分析。用实时荧光定量PCR(R... 【目的】克隆西农萨能奶山羊胰岛素诱导基因1(INSIG-1)编码区,并对其进行序列特征分析和组织表达规律研究。【方法】提取西农萨能奶山羊总RNA,反转录cDNA后进行PCR反应,对克隆得到的INSIG-1序列进行生物信息学分析。用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测INSIG-1在皮下脂肪、胸部肌肉、乳腺、肝脏、肾脏、心脏、肺、脾脏、瘤胃、小肠10个组织中的表达情况。【结果】获得西农萨能奶山羊INSIG-1基因1 014bp序列(Gen-Bank登录号JQ665439),其中编码区序列长度为831bp,编码276个氨基酸。西农萨能奶山羊INSIG-1编码区与牛(GenBank登录号NM_001077909)的亲缘关系最近,相似性达97%,编码氨基酸序列的相似性达90%,而与小鼠(GenBank登录号NM_025836)的亲缘关系较远。预测INSIG-1蛋白质分子量为29.70ku,理论等电点为8.99;IN-SIG-1蛋白质具有5个跨膜螺旋结构,且有较强的疏水性,不含信号肽。RT-qPCR检测结果表明,在西农萨能奶山羊10个组织中INSIG-1均有表达,其中在肝脏中的相对表达量最高,皮下脂肪、胸部肌肉、肺次之,在心脏中的相对表达量最低。【结论】克隆得到了西农萨能奶山羊的INSIG-1基因,并探明了其组织表达规律。 展开更多
关键词 西农萨能奶山羊 胰岛素诱导基因1 实时荧光定量PCR 序列分析 组织表达
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山羊INSIG1基因超表达对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响 被引量：8
3
作者 王苗 罗军 +4 位作者 许会芬 朱江江 赫秋亚 姚大为 史怀平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1806-1816,共11页
本研究旨在通过构建西农萨能奶山羊胰岛素诱导基因1(INSIG1)的重组腺病毒(Adenovirus,Ad)超表达载体,研究该基因超表达后对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响,从而为该基因在山羊乳腺脂质合成调控中的功能研究奠定基础。根据GenBank(登录号:... 本研究旨在通过构建西农萨能奶山羊胰岛素诱导基因1(INSIG1)的重组腺病毒(Adenovirus,Ad)超表达载体,研究该基因超表达后对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响,从而为该基因在山羊乳腺脂质合成调控中的功能研究奠定基础。根据GenBank(登录号:JQ665439)中山羊INSIG1基因序列设计引物,PCR扩增得到其CDS区序列。将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV后获得pAdTrack-CMV-INSIG1质粒,将该质粒PmeⅠ线性化后转入大肠杆菌BJ5183感受态细胞进行同源重组,获得pAdEasy-INSIG1重组腺病毒超表达载体。该重组质粒经PacⅠ线性化后转染293A细胞进行病毒的包装及扩繁,利用LaSRT法测定其滴度。将获得的重组腺病毒AdINSIG1感染山羊原代乳腺上皮细胞,利用实时荧光定量PCR检测INSIG1及脂质合成相关基因的mRNA表达情况,利用GPO-Trinder酶学反应检测细胞中甘油三酯的含量。结果表明,成功构建了奶山羊INSIG1基因重组腺病毒超表达载体,获得了具有较高滴度(2×108 U·mL-1)的超表达腺病毒Ad-INSIG1;Ad-INSIG1感染山羊原代乳腺上皮细胞48h后,与Ad-GFP组相比,INSIG1基因的mRNA表达量上调约500倍,固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)和SREBP裂解活化蛋白(SCAP)的mRNA表达量无明显变化,参与脂肪酸从头合成(ACCα、FASN)及去饱和(SCD1)基因的mRNA表达量均显著下降(P<0.05);参与甘油三酯合成的3个关键基因中,GPAM及DGAT2的mRNA表达量显著下降(P<0.05),AGPAT6的表达无显著变化;同时,催化甘油三酯分解(ATGL)的基因mRNA表达量也显著下降(P<0.05);细胞内甘油三酯含量无显著变化。综上所述,在山羊原代乳腺上皮细胞中,INSIG1能够抑制脂质合成相关基因的表达,对山羊乳腺脂质合成具有调控作用。 展开更多
关键词 山羊乳腺上皮细胞 胰岛素诱导基因1(INSIG1) 超表达 脂质合成
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小鼠胰岛素诱导基因1 siRNA稳定表达细胞株的建立及其对细胞胆固醇代谢的影响 被引量：4
4
作者 柯大智 陈庆伟 +2 位作者 李桂琼 邓玮 莫显刚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第12期1445-1449,共5页
目的构建并筛选针对小鼠胰岛素诱导基因1(insulin induced gene 1,insig1)siRNA的特异性表达质粒,建立稳定转染细胞株,并观察其对小鼠巨噬细胞RAW264.7胆固醇代谢的影响。方法根据GenBank中登录的insig1基因序列及RNA干扰原则,设计3个... 目的构建并筛选针对小鼠胰岛素诱导基因1(insulin induced gene 1,insig1)siRNA的特异性表达质粒,建立稳定转染细胞株,并观察其对小鼠巨噬细胞RAW264.7胆固醇代谢的影响。方法根据GenBank中登录的insig1基因序列及RNA干扰原则,设计3个阳性克隆及1个阴性克隆序列,定向克隆入pGenesil-1质粒,构建insig1 shRNA真核表达质粒,测序鉴定后,脂质体法转染RAW264.7细胞,筛选干扰效果最佳的质粒,将其转染入RAW264.7细胞,经G418筛选建立稳定转染细胞株,采用RT-PCR及Western blot法检测转染细胞中insig1基因的转录水平及蛋白的表达水平,油红O染色观察转染细胞中胆固醇含量的变化。结果酶切及测序结果证实,insig1基因shRNA表达质粒构建正确,其中si-2为干扰效果最佳的质粒;在稳定转染的RAW264.7细胞中,si-2组insig1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较阴性质粒组和未转染组明显降低(P<0.05),油红O颗粒含量最多。结论成功建立了insig1 siRNA稳定表达细胞株,体外模型证明了对insig1基因的干扰可促进细胞胆固醇摄取。 展开更多
关键词 胰岛素诱导基因1 SIRNA RAW264.7细胞 胆固醇 代谢
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黄河鲤胰岛素诱导基因1(INSIG1)序列特征、SNP位点及其与生长性状的关联分析
5
作者 王新华 路畅 +2 位作者 徐文彦 齐子鑫 徐梦梦 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期763-771,共9页
为探究胰岛素诱导基因1(insulin-induced gene,INSIG1)在黄河鲤(Cyprinus carpio haematoperus)生长发育过程中的作用,采用候选基因法对黄河鲤生长候选基因INSIG1进行了序列特征分析、组织表达及SNP与生长性状的关联分析。结果表明:黄河... 为探究胰岛素诱导基因1(insulin-induced gene,INSIG1)在黄河鲤(Cyprinus carpio haematoperus)生长发育过程中的作用,采用候选基因法对黄河鲤生长候选基因INSIG1进行了序列特征分析、组织表达及SNP与生长性状的关联分析。结果表明:黄河鲤INSIG1基因全长为4853 bp,包含5个外显子和4个内含子,其中cDNA全长为1530 bp,蛋白编码区(CDS)全长为756 bp,可编码251个氨基酸;INSIG1在不同物种间序列保守性较高,黄河鲤INSIG1与金线鲃、斑马鱼和鲫等鲤科鱼类聚为一支;预测黄河鲤INSIG1蛋白相对分子质量为27674.25,理论等电点为8.09,属于稳定的疏水性蛋白,该蛋白无信号肽,包含6个跨膜结构,蛋白三级结构包含6个α-螺旋和部分无规则卷曲;qRT-PCR分析显示,INSIG1基因在黄河鲤肝、脾、肾、肠、心脏、鳃、脑、肌肉和皮肤等组织中均有表达,其中在肠和肝组织中表达量较高,在鳃组织中表达量最低;黄河鲤INSIG1基因共鉴定到10个SNP位点,其中g.1854T>C和g.1982A>T 2个SNP位点的不同基因型与黄河鲤肥满度性状显著相关(P<0.05),其他位点的不同基因型与生长性状未表现出显著关联性。研究表明,INSIG1基因参与了黄河鲤的生长发育过程,其突变位点g.1854T>C和g.1982A>T显著影响了黄河鲤的肥满度,该结果为黄河鲤生长性状的分子标记辅助育种提供了可用的分子标记,对于选育具有优良性状的黄河鲤具有重要的实践意义。 展开更多
关键词 黄河鲤 胰岛素诱导基因(INSIG1) 组织表达 SNP位点 生长关联性
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乌药醇提物对酒精联合高脂饮食诱导的脂肪肝防治作用研究
6
作者 顾建荣 韩丽萍 +4 位作者 吴瑶 赖威旨 何志刚 叶合 楼招欢 《浙江中西医结合杂志》 2023年第5期400-405,共6页
目的观察乌药醇提取物(LREE)对酒精性脂肪肝模型小鼠的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法32只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、易善复组(0.2736 g/kg)和乌药组(1 g/kg),每组8只。采用饮食高脂饲料复合梯度浓... 目的观察乌药醇提取物(LREE)对酒精性脂肪肝模型小鼠的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法32只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、易善复组(0.2736 g/kg)和乌药组(1 g/kg),每组8只。采用饮食高脂饲料复合梯度浓度白酒连续灌胃8周复制酒精性脂肪肝模型小鼠,造模的同时给予易善复、LREE进行干预;于第2、4、6、8周采血,全自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)水平;实验期末,解剖,取肝脏,油红O染色检测肝组织脂肪病变程度,RT-PCR检测肝组织低密度脂蛋白受体(LDLR)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-α)、胰岛素诱导基因1(Insig1)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)、固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)mRNA表达水平。结果LREE和易善复能抑制高脂饮食+酒精诱导的小鼠体质量增加[(38.6±2.9)g、(39.4±2.3)g比(42.3±1.9)g,P<0.05],实验期末,乌药组及易善复组小鼠血清ALT、AST活性显著降低[ALT:(37.5±8.2)U/L、(41.4±17.5)U/L比(64.3±14.7)U/L,P<0.05;AST:(67.3±23.0)U/L、(67.4±23.9)U/L比(96.3±11.5)U/L,P<0.01],肝组织脂质沉积改善;RT-PCR结果显示,LREE与易善复能上调肝组织LDLR[(0.6±0.1)、(0.8±0.1)比(0.3±0.1),P<0.01]和PPAR-α[(0.8±0.1)、(0.7±0.1)比(0.5±0.1),P<0.05或P<0.01]mRNA表达水平,下调Insig1[(1.6±0.1)、(1.6±0.1)比(3.1±0.4),P<0.01]、SCAP[(1.8±0.2)、(1.3±0.1)比(2.3±0.1),P<0.05]和SREBP-1[(1.5±0.3)、(1.2±0.1)比(2.5±0.1),P<0.01]mRNA表达水平。结论LREE对高脂联合酒精诱导的酒精性脂肪肝具有良好的保护作用,其机制可能与抑制Insig1-SCAP-SERBP1通路活化有关。 展开更多
关键词 小鼠 乌药醇提物 酒精性脂肪肝 低密度脂蛋白受体 胆固醇调节元件结合蛋白-1c 内质网胰岛素诱导基因1
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奶牛胰岛素诱导基因1的克隆、组织分布及稳定表达细胞系的建立 被引量：2
7
作者 庞坤 石科 +1 位作者 杨亮 韩立强 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1681-1685,共5页
为研究奶牛INSIG1基因的功能,本研究检测了8个组织中INSIG1基因的分布情况,PCR扩增得到INSIG1基因的编码区序列,采用嘌呤霉素筛选稳定表达INSIG1的肝脏细胞系并进行鉴定,结果表明INSIG1基因在奶牛肝脏、小肠、肌肉和脂肪组织的表达丰度... 为研究奶牛INSIG1基因的功能,本研究检测了8个组织中INSIG1基因的分布情况,PCR扩增得到INSIG1基因的编码区序列,采用嘌呤霉素筛选稳定表达INSIG1的肝脏细胞系并进行鉴定,结果表明INSIG1基因在奶牛肝脏、小肠、肌肉和脂肪组织的表达丰度较高,将构建的INSIG1-C31真核载体与phi C31整合酶共转染肝脏细胞,经过4μg/m L嘌呤霉素筛选后,获得完全表达绿色荧光蛋白的肝脏细胞系,鉴定表明INSIG1基因已经整合到细胞基因组中。本研究获得了稳定表达INSIG1基因的肝脏细胞系,为深入研究INSIG1基因功能提供了材料。 展开更多
关键词 奶牛 胰岛素诱导基因1 组织分布 细胞系
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牛科物种胰岛素诱导基因1(INSIG1)研究进展 被引量：1
8
作者 罗建椿 邱立华 +1 位作者 范新阳 苗永旺 《中国牛业科学》 2017年第3期31-35,共5页
胰岛素诱导基因1编码蛋白(INSIG1)定位于内质网膜上,是调控脂代谢的重要因子。INSIG1主要通过调控固醇调控元件结合蛋白(SREBP)和3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)来影响脂质代谢。越来越多的研究结果揭示了INSIG1在生物体内作用的... 胰岛素诱导基因1编码蛋白(INSIG1)定位于内质网膜上,是调控脂代谢的重要因子。INSIG1主要通过调控固醇调控元件结合蛋白(SREBP)和3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)来影响脂质代谢。越来越多的研究结果揭示了INSIG1在生物体内作用的复杂性。本文综述了INSIG1与SREBP和HMGR之间在脂代谢调控过程中的相互作用机制、INSIG1的结构及表达调控、INSIG1对牛科动物泌乳、生长等性状的影响。 展开更多
关键词 胰岛素诱导基因1 固醇调控元件结合蛋白 3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶 表达调控 泌乳性状 基因多态性
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使用phiC31整合酶构建奶牛INSIG1基因乳腺恒定表达细胞系 被引量：1
9
作者 韩立强 王林枫 +6 位作者 王月影 朱河水 王江 褚贝贝 郑悦亭 张超 杨国宇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2135-2139,共5页
为了使用phiC31整合酶建立奶牛胰岛素诱导基因1(INSIG1)的稳定表达乳腺细胞系,首先从奶牛乳腺组织中克隆得到INSIG1基因的编码区,然后将克隆片段与phiC31载体进行BamHⅠ和KpnⅠ双酶切构建INSIG1-C31真核表达质粒;将其与phiC31整合酶质... 为了使用phiC31整合酶建立奶牛胰岛素诱导基因1(INSIG1)的稳定表达乳腺细胞系,首先从奶牛乳腺组织中克隆得到INSIG1基因的编码区,然后将克隆片段与phiC31载体进行BamHⅠ和KpnⅠ双酶切构建INSIG1-C31真核表达质粒;将其与phiC31整合酶质粒共同转染到小鼠乳腺细胞中,采用嘌呤霉素筛选细胞,荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的表达,PCR鉴定细胞基因组中INSIG1基因的表达,荧光定量PCR检测细胞中INSIG1基因的表达。结果表明,试验成功构建INSIG1-C31真核载体,与phiC31整合酶共转染小鼠乳腺细胞,经过8mg/L嘌呤霉素筛选后获得完全表达绿色荧光蛋白的乳腺细胞系;对细胞系鉴定表明INSIG1基因已经整合到细胞基因组中,与对照组相比,INSIG1基因的mRNA表达丰度增加了597.98倍(P<0.001)。本研究获得了稳定表达奶牛INSIG1基因的乳腺细胞系,为深入研究INSIG1基因功能打下基础。 展开更多
关键词 奶牛 胰岛素诱导基因1 phiC31整合酶 乳腺细胞
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INSIG1基因SNP rs9769506位点的多态性与2型糖尿病的关系
10
作者 勾朝阳 丁可 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第31期4239-4240,共2页
目的探讨胰岛素诱导基因1(INSIG1)单核苷酸多态性(SNP)rs9769506位点的多态性与2型糖尿病(T2DM)的相关性,以期为T2DM的防治提供潜在的分子靶点。方法选择河南省南阳市中心医院2013年1月至2014年3月收治的T2DM患者98例,另选取体检中心的... 目的探讨胰岛素诱导基因1(INSIG1)单核苷酸多态性(SNP)rs9769506位点的多态性与2型糖尿病(T2DM)的相关性,以期为T2DM的防治提供潜在的分子靶点。方法选择河南省南阳市中心医院2013年1月至2014年3月收治的T2DM患者98例,另选取体检中心的健康体检者90例作为对照组,INSIG1基因SNP rs9769506位点多态性检测使用实时荧光定量PCR(RT-PCR)Taqman分析。结果 T2DM组rs9769506位点A等位基因频率为54.1%,G等位基因频率为45.9%,对照组A等位基因频率为47.8%,G等位基因频率为52.2%,两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。T2DM组患者rs9769506位点A/A、A/G和G/G基因型频率分别为41.8%、24.5%和33.7%,对照组rs9769506位点A/A、A/G和G/G基因型频率分别为32.2%、31.1%和36.7%,A/A基因型频率在对照组和T2DM组之间差异有统计学意义(P<0.05),而A/G和G/G基因型频率在对照组和T2DM组之间差异则无统计学意义(P>0.05)。T2DM患者中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)表达水平在A/A、A/G、G/G基因型患者之间差异有统计学意义(P<0.05),而A/G、G/G基因型患者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 INSIG1基因SNP rs9769506位点A/A基因型在T2DM患者中检出率高,对T2DM早期筛查及基因治疗具有临床指导意义。 展开更多
关键词 糖尿病2型 多态性单核苷酸 胰岛素诱导基因1
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