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养殖河蟹弧菌病病原茵分离鉴定及其胞外产物的致病性 被引量：41
1
作者 徐海圣 舒妙安 +1 位作者 占秀安 王淑霞 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期357-362,共6页
从杭州一养蟹场的病蟹体内分离到3株细菌,经形态学检查、生化性质测定,鉴定为副溶血弧菌。人工感染健康蟹,48h内均发生死亡,死亡率100％,证实副溶血弧菌为河蟹的致病菌。药敏试验结果表明,此病原菌对链霉素、利福平、卡那霉素、复方新... 从杭州一养蟹场的病蟹体内分离到3株细菌,经形态学检查、生化性质测定,鉴定为副溶血弧菌。人工感染健康蟹,48h内均发生死亡,死亡率100％,证实副溶血弧菌为河蟹的致病菌。药敏试验结果表明,此病原菌对链霉素、利福平、卡那霉素、复方新诺明、环丙沙星、氟哌酸、四环素、氯霉素、氟嗪酸、复达欣、菌必治、萘啶酸等药物高度敏感。分离菌株培养物经理化方法处理获得的胞外产物蛋白具有明胶酶、几丁质酶、淀粉酶、酪蛋白酶、脂酶、磷脂酶等多种酶活性及溶血活性,并对河蟹具有明显的致病作用。 展开更多
关键词 河蟹 弧菌病 病原菌 分离鉴定 胞外产物 致病性
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副溶血弧菌胞外产物对中国对虾的致病性分析 被引量：38
2
作者 牟海津 李筠 +2 位作者 包振民 杨学宋 徐怀恕 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期273-280,共8页
１９９０年 ６－９月，从青岛上马镇对虾养殖场患败血症的中国对虾血淋巴内分离到副溶血弧菌２５－Ｃ菌株，利用平板玻璃纸覆盖技术，获得２５－Ｃ菌株的胞外产物（ＥＣＰ），进行成分分析和致病性研究。结果表明，副溶血弧菌２５－Ｃ... １９９０年 ６－９月，从青岛上马镇对虾养殖场患败血症的中国对虾血淋巴内分离到副溶血弧菌２５－Ｃ菌株，利用平板玻璃纸覆盖技术，获得２５－Ｃ菌株的胞外产物（ＥＣＰ），进行成分分析和致病性研究。结果表明，副溶血弧菌２５－Ｃ菌株的胞外产物具有多种酶活性和溶血活性，是病原菌感染中国对虾的主要因素，单独注射感染即可导致中国对虾的严重发病至死亡，ＥＣＰ蛋白可以破坏中国对虾血清的体外杀菌活力，提高２５－Ｃ菌株对中国对虾的致病能力。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明，ＥＣＰ蛋白中含有２３条蛋白带。对具有溶血活性的蛋白组分进行热稳定性测试后，认为有两种溶血因子。经感染分析，发现其中具有热稳定性溶血活性和蛋白酶活性的两组蛋白对中国对虾具有明显的致病作用，可能是决定细菌毒力的主要因素。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 胞外产物 中国对虾 溶血活性 致病性
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地衣芽孢杆菌胞外产物消化活性的研究 被引量：38
3
作者 曹煜成 李卓佳 +2 位作者 冯娟 陈永青 吴灶和 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期6-12,共7页
将地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis的胞外产物置于不同的pH、温度和金属离子条件下,分别测定其蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性的变化。结果表明,当pH为7.5—8.5时胞外产物表现出较高的蛋白酶和淀粉酶活性,胞外产物消化脂肪的最适pH为9.... 将地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis的胞外产物置于不同的pH、温度和金属离子条件下,分别测定其蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性的变化。结果表明,当pH为7.5—8.5时胞外产物表现出较高的蛋白酶和淀粉酶活性,胞外产物消化脂肪的最适pH为9.0—10.0。胞外产物水解淀粉、脂肪和蛋白质最适温度分别为60—80、40—60和50—70℃,60℃时蛋白酶活力最大。试验测定了8种金属离子对胞外产物活性的影响,发现Mg2+、Zn2+Cu2+可抑制其水解蛋白质,而Ca2+、Fe3+、Mn2+和Ba2+却无此影响;在胞外产物消化脂肪底物时Co2+、Fe3+、Mn2+和Ba2+均能抑制其活力,而Mg2+、Zn2+能使其消化活力升高,与前者相比,金属离子对淀粉水解的影响相对较小,仅Cu2+有一定的抑制作用,其它离子对其均无明显的影响。还研究了不同胞外产物浓度与生物学活性的相关性,发现当反应体系中胞外产物浓度升高时水解蛋白质的活力会相应降低,但对脂肪的消化活力则与胞外产物的浓度呈正相关。反应体系中胞外产物的浓度在0—132.4μg.ml-1时其水解淀粉的活力随浓度的升高而升高,浓度为191.0μg.ml-1时活力最大,浓度大于191.0μg.ml-1时活力不再变化,稳定在一个较高的水平。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 BACILLUS licheni formis 胞外产物 PH 温度 金属离子 活性
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海洋微藻胞外产物研究进展 被引量：24
4
作者 高亚辉 荆红梅 +1 位作者 黄德强 杨心宁 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期35-38,共4页
关键词 海洋微藻 胞外产物 研究进展
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养殖刺参溃疡病杀鲑气单胞菌的分离、致病性及胞外产物特性分析 被引量：33
5
作者 杨嘉龙 周丽 +2 位作者 邢婧 绳秀珍 战文斌 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期981-989,共9页
从患溃疡病的养殖刺参(Apostichopus japonicus)病灶处分离出1株优势菌H1,以浸浴、创伤浸浴、体腔注射和体壁肌肉注射等方式进行感染实验,证实菌株H1为养殖刺参溃疡病病原菌,并证明该菌通过体表创伤侵入的方式感染刺参,以创伤浸浴和体... 从患溃疡病的养殖刺参(Apostichopus japonicus)病灶处分离出1株优势菌H1,以浸浴、创伤浸浴、体腔注射和体壁肌肉注射等方式进行感染实验,证实菌株H1为养殖刺参溃疡病病原菌,并证明该菌通过体表创伤侵入的方式感染刺参,以创伤浸浴和体壁肌肉注射感染的LD50(半数致死量)分别为2.26×107CFU/尾和1.80×107CFU/尾。经形态学观察、生理生化特性分析和mini API系统鉴定,确定菌株H1为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida ma-soucida)。提取菌株H1的胞外产物(ECP)进行致病性实验,结果表明ECP可导致刺参死亡,其对刺参的LD50为5.24μg蛋白/g体质量。H1-ECP具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、几丁质酶和淀粉酶活性,并具有溶血素活性;对底物偶氮酪蛋白(Azocasin)作用的酶比活力可达到674.5活力单位/mg蛋白,最适作用温度为50℃;对热不稳定,70℃作用30 min时,酪蛋白酶活性降到0;100℃作用30 min,ECP对刺参的毒性消失;ECP酶活可被10 mmol/L EDTA完全抑制,可被5 mmol/L PMSF抑制98.8%,Ca2+和Mg2+可使酶活性分别提高约9%和4%。结论认为,该病原菌通过体表创伤侵入方式感染宿主刺参,菌株H1胞外产物是其对刺参致病的因子之一。 展开更多
关键词 刺参 溃疡病 杀鲑气单胞菌 胞外产物 蛋白酶
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皱纹盘鲍脓疱病菌—河流弧菌Ⅱ胞外产物的研究 被引量：27
6
作者 李太武 苏秀榕 丁明进 《辽宁师范大学学报（自然科学版）》 CAS 1999年第3期231-235,共5页
利用杯碟法研究了河流弧菌Ⅱ的胞外产物．结果表明：河流弧菌Ⅱ含有淀粉酶、明胶酶、脂肪酶、酪蛋白酶、溶血因子，不含卵磷脂酶、脲酶．由于淀粉酶有分解糖原的作用；明胶酶、酪蛋白酶分解胶原等蛋白成分；脂肪酶分解了脂类；溶血因子... 利用杯碟法研究了河流弧菌Ⅱ的胞外产物．结果表明：河流弧菌Ⅱ含有淀粉酶、明胶酶、脂肪酶、酪蛋白酶、溶血因子，不含卵磷脂酶、脲酶．由于淀粉酶有分解糖原的作用；明胶酶、酪蛋白酶分解胶原等蛋白成分；脂肪酶分解了脂类；溶血因子使鲍的血细胞溶解，在病灶中，核仁消失，双层核膜破裂，核质外泄．病灶内的核糖体减少或消失，线粒体异形，嵴减少或甚至消失使其呈双层膜的空泡状结构，肌糖原消失，内质网变成大小不一的圆形空泡．在晚期的病灶内，肌纤维、结缔组织细胞几乎已完全溶解，只有许多血淋巴细胞存在．除少量细胞结构完整外，大部分血淋巴细胞的质膜破裂，胞质内充满圆形液泡，大部分胞质变性后破碎消失．核质均质化，呈无结构状态，核仁消失，核内具有数个高电子密度的结晶状颗粒． 展开更多
关键词 皱纹盘鲍 河流弧菌Ⅱ 胞外产物 脓疱病菌 养殖
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鳗弧菌胞外产物中致病因子的分离纯化及性质研究 被引量：18
7
作者 陈师勇 莫照兰 +2 位作者 张振冬 徐永立 张培军 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第8期96-100,共5页
鳗弧菌致病株M3的胞外产物经超滤、SephadexG10 0凝胶层析、DEAE cellulose离子交换层析和HPLC凝胶色谱层析纯化后 ,得到一个纯化的毒性蛋白酶 ,其对金鱼的半数致死量为 1 2微克蛋白 /克体重。该蛋白酶的分子量为 36 5kDa ,等电点为 5 ... 鳗弧菌致病株M3的胞外产物经超滤、SephadexG10 0凝胶层析、DEAE cellulose离子交换层析和HPLC凝胶色谱层析纯化后 ,得到一个纯化的毒性蛋白酶 ,其对金鱼的半数致死量为 1 2微克蛋白 /克体重。该蛋白酶的分子量为 36 5kDa ,等电点为 5 1;与底物A zocasin作用的最适pH为 8 0 ,最适作用温度 5 5℃ ,85℃作用 30min后酶被灭活。该酶活性可被EDTA、EGTA及 1,10 菲咯啉抑制 ,表明它是金属蛋白酶。N端部分氨基酸序列经测定为AGATGTGPGGAGLTG。 展开更多
关键词 胞外产物 鳗弧菌 致病因子 蛋白酶 分离纯化 鱼类 毒性 流行性疾病
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溶藻弧菌胞外产物对大黄鱼的致病性 被引量：24
8
作者 金珊 郑天伦 +1 位作者 王国良 赵青松 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期439-441,共3页
采用杯碟法测定了由网箱养殖濒死大黄鱼体内分离的溶藻弧菌胞外产物的成分及酶活性 ,并用胞外产物粗提液对大黄鱼进行致死试验 ,电镜观察了致死大黄鱼肝、肾、脾等组织的细胞病变。结果表明 ,溶藻弧菌胞外产物具有明胶酶、淀粉酶、酪蛋... 采用杯碟法测定了由网箱养殖濒死大黄鱼体内分离的溶藻弧菌胞外产物的成分及酶活性 ,并用胞外产物粗提液对大黄鱼进行致死试验 ,电镜观察了致死大黄鱼肝、肾、脾等组织的细胞病变。结果表明 ,溶藻弧菌胞外产物具有明胶酶、淀粉酶、酪蛋白酶、脂肪酶、卵磷酯酶、几丁质酶以及溶血活性 ,该胞外产物对大黄鱼具有明显的致死作用 ,可造成大黄鱼肝、肾。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 大黄鱼 致病性 网箱养殖 胞外产物
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海洋重金属污染及其对海藻的毒害作用 被引量：16
9
作者 赵素达 《青岛职业技术学院学报》 1999年第1期40-42,共3页
藻类通过主支和被动吸叫在体内累积海洋中的重金属离子，其微量元素对藻类无害，甚至是藻类生长发育的必需条件。当重金属离子在藻体内达到一定浓度时产生毒害作用。本文叙述了藻类对重金属污染的耐受程度、机理，以及重金属污染对藻类... 藻类通过主支和被动吸叫在体内累积海洋中的重金属离子，其微量元素对藻类无害，甚至是藻类生长发育的必需条件。当重金属离子在藻体内达到一定浓度时产生毒害作用。本文叙述了藻类对重金属污染的耐受程度、机理，以及重金属污染对藻类的生长、光合作用、蛋白质合成和酶活性的影响。 展开更多
关键词 海洋重金属污染 重金属含量 重金属离子 藻类 胞外产物 解毒作用 有机金属化合物 生长速率 海藻 墨角藻
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迟缓爱德华氏菌胞外产物的细胞毒性和动物致病性 被引量：22
10
作者 葛艳 陈怀青 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期34-37,共4页
分析了２８株迟缓受德华氏菌（Ｅdwardwiella tarda,Ｅt）胞外产物（extracellular puodrcts,ＥＣＰ）的致病性。将Ｅt用覆有玻璃纸的ＴＳＡ培养，１８株（６９．２３％）的 ＥＣＰ使ＨＥp－２细胞产生病认，认圆，脱落。这种细胞毒作... 分析了２８株迟缓受德华氏菌（Ｅdwardwiella tarda,Ｅt）胞外产物（extracellular puodrcts,ＥＣＰ）的致病性。将Ｅt用覆有玻璃纸的ＴＳＡ培养，１８株（６９．２３％）的 ＥＣＰ使ＨＥp－２细胞产生病认，认圆，脱落。这种细胞毒作用能被ＡＴＣＣ１５９４７株的ＥＣＰ抗体作为探 针进行免疫转印分析，结果显示，不同来源的９株Ｅt的ＥＣＰ在 转印膜上出现３条共同蛋白条带，相对分子质量分别约１４４００、３２、３００、７９、 展开更多
关键词 迟缓爱德华氏菌 胞外产物 细胞毒性 致病性
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铜绿假单胞菌致病、耐药机理研究进展 被引量：21
11
作者 毛德强 卢仙娥 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 2001年第3期142-143,共2页
铜绿假单胞菌是重要的条件致病菌 ,其致病机制复杂而多样。本文综述了国外近几年研究铜绿假单胞菌的胞外产物、外膜屏障及主动转运系统的致病、耐药机理。了解铜绿假单胞菌的致病机理对预防及治疗其引起的感染具有指导意义。
关键词 铜绿假单胞菌 外膜屏障 致病机理 耐药机理 胞外产物
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斑节对虾病原菌胞外产物的致病性研究 被引量：17
12
作者 张朝霞 王军 +3 位作者 苏永全 幺久刚 周胜利 鄢庆枇 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期94-99,共6页
由养殖濒死虾体内分离的副深血弧菌（２０１９＾＃）、溶藻弧菌（４３０２＾＃）和嗜水气单力（１００３＾＃）培养液中分别撮了上产物，测定了酶成分，定量分析了蛋白酶及磷酸酯酶的活性，用细菌胞外产物粗提液对斑节对虾进行致死试验... 由养殖濒死虾体内分离的副深血弧菌（２０１９＾＃）、溶藻弧菌（４３０２＾＃）和嗜水气单力（１００３＾＃）培养液中分别撮了上产物，测定了酶成分，定量分析了蛋白酶及磷酸酯酶的活性，用细菌胞外产物粗提液对斑节对虾进行致死试验，戊二醛固定致死对虾的肚组织，电镜观察了斑节对虾肝组织的超微病变，初步探讨了三株细菌胞外产物诱发虾病的病理。 展开更多
关键词 病原菌 胞外产物 斑节对虾 致病性
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弧菌拮抗菌的筛选及其效果 被引量：20
13
作者 张新明 李健 刘淇 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期325-332,共8页
从健康的鱼虾体内以及养殖水体中分离得到 2 19株海洋细菌 ,以鳗弧菌 (Vibrioanguillarum)、副溶血弧菌 (Vibrioparahaemolyticus)、沙蚕弧菌 (Vibrioneresis)、飘浮弧菌 (Vibrionatriegen)等病原性弧菌为指示菌 ,在 2 2 16E平板上采用... 从健康的鱼虾体内以及养殖水体中分离得到 2 19株海洋细菌 ,以鳗弧菌 (Vibrioanguillarum)、副溶血弧菌 (Vibrioparahaemolyticus)、沙蚕弧菌 (Vibrioneresis)、飘浮弧菌 (Vibrionatriegen)等病原性弧菌为指示菌 ,在 2 2 16E平板上采用十字交叉划线法、点种法和平板扩散法进行体外拮抗实验 ,从中筛选到 6株有拮抗作用的海洋细菌。用平板活菌计数法研究拮抗菌J - 10及其胞外产物对鳗弧菌的抑菌作用 ;采用平板扩散法研究拮抗菌J- 10胞外产物抑菌效果的影响因子。结果显示 ,拮抗菌J- 10在混合体系中 ,2 4h之后表现出拮抗作用 ,在第 3天使鳗弧菌的数量降为最低 ,比第 1天的鳗弧菌数量下降了 2个数量级 ,之后鳗弧菌的数量开始上升 ,而对照组鳗弧菌的数量在第 2～ 5天基本维持第 1天的水平 ,表明拮抗菌J - 10在混合体系中具有较强的拮抗作用。拮抗菌J- 10的胞外产物能较好地抑制鳗弧菌的生长 ,使实验组的弧菌数量在 3h降为最低 ,之后呈缓慢上升的趋势 ,而对照组则一直呈上升的趋势 ;拮抗菌J - 10的胞外产物对热敏感 ,对pH的变化不敏感 ,对蛋白酶K不敏感 ,Fe3 + 的添加会减弱其抑菌活性。根据形态特征和常规生理生化反应进行鉴定 ,J - 10为藤黄微球菌 (Micrococcusleteus)。 展开更多
关键词 拮抗菌 筛选 藤黄微球菌 抑菌活性 胞外产物
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大黄鱼(Pseudosciaena crocea)源美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)的分离鉴定及致病性研究 被引量：20
14
作者 张飞 苏永全 +3 位作者 王军 覃映雪 马英 鄢庆枇 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1202-1208,共7页
于2010年从宁德患病大黄鱼中分离得到一株优势菌NPL1006,经鉴定该菌株为美人鱼发光杆菌。人工感染实验结果显示该菌对大黄鱼的半致死浓度(LD50)为7.96×103CFU/g体重。药敏性实验结果显示NPL1006对头孢唑啉、头孢噻吩和诺氟沙星等9... 于2010年从宁德患病大黄鱼中分离得到一株优势菌NPL1006,经鉴定该菌株为美人鱼发光杆菌。人工感染实验结果显示该菌对大黄鱼的半致死浓度(LD50)为7.96×103CFU/g体重。药敏性实验结果显示NPL1006对头孢唑啉、头孢噻吩和诺氟沙星等9种药物高度敏感。采用纸片法检测得到NPL1006的胞外产物具有蛋白酶、明胶酶和淀粉酶活性。胞外产物感染斑马鱼研究结果显示其LD50为1.20mg蛋白/kg体重。以上结果表明大黄鱼源美人鱼发光杆菌NPL1006胞外产物含有多种毒力因子,与该菌对大黄鱼的致病性密切相关。 展开更多
关键词 大黄鱼 美人鱼发光杆菌 胞外产物 致病性
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鳗弧菌(Vibrio anguillarum)胞外产物中蛋白酶的纯化及其性质 被引量：17
15
作者 魏玉西 汪靖超 +1 位作者 程殿林 徐永立 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2002年第4期414-418,共5页
对鳗弧菌 (Vibrioanguillarum)胞外产物中蛋白酶的纯化方法及其性质进行了研究 .其中 ,蛋白酶的纯化步骤包括 :(1)硫酸铵沉淀 ;(2 )SephadexG 10 0凝胶过滤 ;(3)DEAE Sepharose色谱分离 ;(4)DEAE Cellulose (DE 32 )色谱分离 .经上述纯... 对鳗弧菌 (Vibrioanguillarum)胞外产物中蛋白酶的纯化方法及其性质进行了研究 .其中 ,蛋白酶的纯化步骤包括 :(1)硫酸铵沉淀 ;(2 )SephadexG 10 0凝胶过滤 ;(3)DEAE Sepharose色谱分离 ;(4)DEAE Cellulose (DE 32 )色谱分离 .经上述纯化步骤得到两种蛋白酶 ,经SDS PAGE分析 ,Mr分别为 37.4× 10 3 和 33.1× 10 3 .以偶氮酪蛋白 (azocasein)作底物测其水解酶活性 ,结果表明二者差别显著 ,前者明显高于后者 .而且 ,Mr37.4× 10 3 的蛋白酶在pH 7～ 10范围内均显示较高活性 ,在 4 0～ 6 0℃范围内稳定性好 .结果表明该蛋白酶是一种金属蛋白酶 .关于该蛋白酶对牙鲆(Paralichtysolivaceus)的毒性作用尚在研究之中 .图 6表 3参 展开更多
关键词 鳗弧菌 胞外产物 蛋白酶 纯化 性质
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养殖石斑鱼溃疡病病原哈维氏弧菌胞外产物的研究 被引量：18
16
作者 陈雅芳 王军 +2 位作者 苏永全 覃映雪 王世锋 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期30-34,共5页
以网箱养殖的患溃疡病青石斑鱼（Epinephlus awoara）和斜带石斑鱼（Epinephlus coioides）分离的哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）TS-628菌株为研究对象，采用平板玻璃纸覆盖技术，获得该菌株的胞外产物（ECP），并对其成分进行分析。利... 以网箱养殖的患溃疡病青石斑鱼（Epinephlus awoara）和斜带石斑鱼（Epinephlus coioides）分离的哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）TS-628菌株为研究对象，采用平板玻璃纸覆盖技术，获得该菌株的胞外产物（ECP），并对其成分进行分析。利用杯碟法研究表明，哈维氏弧菌TS-628菌株的胞外产物具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、卵磷脂酶等多种酶活性和溶血活性，且溶血性物质具有热不稳定性。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及考马斯亮蓝R-250染色分析表明，ECP蛋白条带主要集中在分子质量范围25．0～66．2ku之间，经不同时间培养所获得的ECP在凝胶上显示出的蛋白条带几乎一致。采用复性电泳方法（G-PAGE）分析了哈维氏弧菌及其它4种弧菌属细菌的ECP蛋白酶活性，结果发现哈维氏弧菌ECP在酸性条件下，蛋白酶活性较强，在碱性条件下，蛋白酶带明显减少，活性很弱。在相同的pH条件下，5种弧菌中以副溶血弧菌的ECP蛋白酶活性最强，种类多，分子质量范围宽；而哈维氏弧菌的蛋白酶带较少，活性也稍弱。 展开更多
关键词 青石斑鱼(Epinephlus awoara) 斜带石斑鱼(Epinephlus coioides) 哈维氏弧菌 (Vibrio harveyi) 胞外产物 溃疡病
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虹鳟致病性杀鲑气单胞菌的分离鉴定及其毒力因子的检测 被引量：17
17
作者 刁菁 李乐 +6 位作者 王晓璐 樊英 于晓清 许拉 盖春蕾 王勇强 叶海斌 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期435-443,共9页
为研究虹鳟Oncorhynchus mykiss致病性杀鲑气单胞菌Aeromonas salmonicida的致病机理,利用微生物学及分子生物学方法,从患皮肤溃疡病的虹鳟病灶处分离纯化获得1株优势菌株RBWF-1,通过人工感染试验证实其具有较强的致病性。结果表明:菌株... 为研究虹鳟Oncorhynchus mykiss致病性杀鲑气单胞菌Aeromonas salmonicida的致病机理,利用微生物学及分子生物学方法,从患皮肤溃疡病的虹鳟病灶处分离纯化获得1株优势菌株RBWF-1,通过人工感染试验证实其具有较强的致病性。结果表明:菌株RBWF-1对虹鳟的半致死浓度(LD50)为5.5×10~6CFU/m L;通过对菌株RBWF-1 16S r DNA基因序列扩增、测序及Blast对比,发现其与杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种Asalmonicida subsp.masoucida菌株NBRC 13748及无色亚种A.salmonicida subsp.achromogens菌株NCIMB 1110的16S rDNA基因序列同源性最高,一致性均为99.6%;构建系统发育树显示,菌株RBWF-1与杀鲑气单胞菌杀鲑亚种A.salmonicida subsp.salmonicida、杀日本鲑亚种、无色亚种和史氏亚种A.salmonicida subsp.smithia聚为一支;为进一步明确菌株的分类地位,利用Biolog微生物鉴定系统结合传统生理生化试验对菌株RBWF-1各项理化指标进行检测,经对比,与杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种吻合度最高,因而判断该分离株为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种;同时,对分离菌株的气溶素、溶血素、封闭带毒素、DNA酶、丝氨酸蛋白酶、磷脂酶、S层蛋白7个毒力相关基因进行了PCR检测,检测结果均呈阳性;酶活性检测结果显示,菌株RBWF-1胞外产物具有蛋白酶、淀粉酶、脂酶、DNA酶和溶血活性。本研究结果可为中国虹鳟养殖过程中杀鲑气单胞菌的感染特征、分类鉴定和疫苗研制提供必要的数据和参考。 展开更多
关键词 虹鳟 杀鲑气单胞菌 致病性 毒力因子 胞外产物
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乌鳢产吲哚金黄杆菌的鉴定及其胞外产物特性分析 被引量：16
18
作者 王鑫毅 韩艳楠 +3 位作者 金珊 王丽 赵青松 陈寅儿 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期641-646,共6页
乌鳢（Channaargus）俗称乌鱼、黑鱼、火头等，因其骨刺少，肉味鲜美，且具有去瘀生薪、生肌补血、滋补调养等多种生理功能，一直广受国内外消费者的亲睐。近十多年来，为顺应国内外贸易市场的需要，我国人工养殖乌鳢迅速发展。但由于... 乌鳢（Channaargus）俗称乌鱼、黑鱼、火头等，因其骨刺少，肉味鲜美，且具有去瘀生薪、生肌补血、滋补调养等多种生理功能，一直广受国内外消费者的亲睐。近十多年来，为顺应国内外贸易市场的需要，我国人工养殖乌鳢迅速发展。但由于高密度养殖、种质退化、环境恶化及人为因素干扰等多种原因，使得养殖乌鳢病害日趋增多，新的病原也不断出现。 展开更多
关键词 乌鳢 产吲哚金黄杆菌 生理生化鉴定 16S RRNA 胞外产物 抗菌药物
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高致病性维氏气单胞菌胞外产物对斑点鲖的致病性 被引量：16
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作者 贺扬 华丽 +8 位作者 汪开毓 陈德芳 王均 王二龙 王兴丽 杨倩 吴学婧 何洁 赖为民 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期457-467,共11页
为了研究维氏气单胞菌及其胞外产物的致病机制对预防和治疗斑点鲖维氏气单胞菌病的作用。通过对一株高致病性斑点鲖源维氏气单胞菌胞外产物（extracellular product,ECP）的提取并结合体内外实验研究其酶活性与致病性,以期为维氏气单胞... 为了研究维氏气单胞菌及其胞外产物的致病机制对预防和治疗斑点鲖维氏气单胞菌病的作用。通过对一株高致病性斑点鲖源维氏气单胞菌胞外产物（extracellular product,ECP）的提取并结合体内外实验研究其酶活性与致病性,以期为维氏气单胞菌的致病机制研究提供新思路。采用饱和硫酸铵沉淀法,对一株高致病性的斑点鲖源维氏气单胞菌的ECP进行了提取,将其进行浓度检测、SDS-PAGE分析和酶活测定;并将提取的ECP攻毒斑点鲖,通过病理学分析研究其致病机制。提取的ECP经考马斯亮蓝试剂盒确定其浓度为0.743 mg/mL;SDS-PAGE分析发现该ECP类型丰富,分子大小主要集中在20.0～33.0 ku。运用琼脂平板扩散法对ECP中主要毒力和代谢相关酶活性进行体外测定,发现ECP具有脂酶、蛋白酶、卵磷脂酶、DNA酶和溶血活性,不具有淀粉酶、明胶酶、脲酶活性;并对与毒力密切相关的溶血活性进行了进一步的溶血谱绘制,发现ECP对其他多种动物红细胞都有溶血活性,对鱼类红细胞溶血性较强,但对鸡、鸭红细胞无溶血活性。ECP攻毒健康斑点鲖后,发现其具有明显致病性,死亡率高达100%。病鱼大体病理变化为体表黏液增多,出现褪色斑以及不同程度的出血斑;眼球充血;肛门红肿外凸;剖检病变表现：鳃丝充血肿胀、肝脏肿大、散在少量出血点,脾脏肿大暗红,肠道扩张、肠壁变薄、肠腔内有大量黄色黏液。组织学病变主要表现为肝细胞变性、坏死;脾脏淋巴细胞减少,大量结缔组织增生;胃、肠道黏膜上皮坏死脱落。该株维氏气单胞菌的胞外产物具有多种酶活性,且对斑点鲖具有明显的致病性,推测该胞外产物在维氏气单胞菌入侵、感染甚至致死斑点鲖过程中都发挥了重要作用。 展开更多
关键词 斑点鲖 维氏气单胞菌 胞外产物 致病性
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地衣芽孢杆菌胞外蛋白酶的纯化及特性分析 被引量：12
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作者 曹煜成 李卓佳 +1 位作者 吴灶和 冯娟 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期262-268,共7页
研究不同条件对地衣芽孢杆菌De株产生胞外蛋白酶的量及其酶活性的影响,结果表明在pH为7.4—8.2范围内,温度为30℃时,培养8—12h的菌株所分泌胞外产物中的蛋白酶活性最高。实验先以半透膜法收集芽孢杆菌的胞外产物,然后再经过硫酸铵沉淀... 研究不同条件对地衣芽孢杆菌De株产生胞外蛋白酶的量及其酶活性的影响,结果表明在pH为7.4—8.2范围内,温度为30℃时,培养8—12h的菌株所分泌胞外产物中的蛋白酶活性最高。实验先以半透膜法收集芽孢杆菌的胞外产物,然后再经过硫酸铵沉淀过夜S、ephadex G-100凝胶层析和DEAE-Cellulose离子交换层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳等四个步骤的分离纯化后,可以得到含有3种主要蛋白质(BLP1、BLP2、BLP3)成分的胞外蛋白酶,其分子量分别为66.2KD、31.0KD及约20.1KD,所得纯化蛋白酶的蛋白浓度为0.773μg/mL,蛋白回收率为11.66%。实验还发现,纯化的胞外蛋白酶在100℃下作用30min,仍可保持其活力,可见具有相当的热稳定性,而其酶活最佳的pH和温度条件分别为7.8和45—65℃。酶活抑制实验显示EDTA、铜、钴、镁离子等均可成为其酶活抑制因子;而丝氨酸蛋白酶抑制剂甲基磺酰氟(PMSF)、铁、锰、钡、钙离子等对酶活性没有明显影响;锌则会令之酶活性其部分丧失。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 胞外产物 纯化 特性分析
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