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TPT1基因转染对肝癌细胞系SMMC-7721生物学行为的影响 被引量:3
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作者 高天慧 段芳龄 +4 位作者 周云 尚佳 孙嫣 孙艳 王晓 《中国误诊学杂志》 CAS 2005年第16期3004-3007,共4页
目的:观察TPT 1转染对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:用Q IAGEN超纯质粒抽提试剂盒抽提TPT 1的真核表达质粒pEGFP-N 3TPT 1和pEGFP-N 3,通过lipofectAM INE,在24 h内连续3次转染肝癌细胞系SMM C-7721,通过荧光显微镜、RT-PCR观察转... 目的:观察TPT 1转染对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:用Q IAGEN超纯质粒抽提试剂盒抽提TPT 1的真核表达质粒pEGFP-N 3TPT 1和pEGFP-N 3,通过lipofectAM INE,在24 h内连续3次转染肝癌细胞系SMM C-7721,通过荧光显微镜、RT-PCR观察转染、表达效率,通过M TT实验、软琼脂克隆形成实验、细胞周期分析,研究TPT 1转染对肝癌细胞系SMM C-7721生物学行为的影响。结果:用此重构体转染后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率约在30%左右。RT-PCR分析显示,pEGFP-N 3 TPT 1转染的细胞,TPT 1 mRNA水平升高0.78倍(P<0.05)。与对照组相比,pEGFP-N 3TPT 1转染可明显增强肝癌细胞系的增殖能力和软琼脂克隆形成能力(P值均<0.05),使G 2+S/M期细胞数增多。结论:pEGFP-N 3 TPT 1可在肝系细胞内高效表达,TPT 1可增强肝癌细胞系SMM C-7721的恶性表型。 展开更多
关键词 肿瘤/病理 转染 细胞系 肿瘤 肿瘤蛋白质/遗传学
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肺癌中FH IT基因缺失和p53蛋白表达的研究
2
作者 葛云洁 刘明霞 栾念旭 《中国误诊学杂志》 CAS 2006年第6期1013-1014,共2页
目的:探讨肺癌组织中FH IT(frag ile h istid ine triad gene)基因缺失和p53蛋白表达及其与临床病理因素的关系。方法:采用逆转录-巢式聚合酶链反应方法及免疫组织化学ABC法分别检测42例肺癌组织中FH IT基因缺失和p53蛋白表达。结果:肺... 目的:探讨肺癌组织中FH IT(frag ile h istid ine triad gene)基因缺失和p53蛋白表达及其与临床病理因素的关系。方法:采用逆转录-巢式聚合酶链反应方法及免疫组织化学ABC法分别检测42例肺癌组织中FH IT基因缺失和p53蛋白表达。结果:肺癌组织中FH IT基因缺失和p53蛋白表达阳性率分别为66.7%(28/42)和76.2%(32/42),FH IT基因缺失肺癌的p53蛋白阳性率明显高于FH IT基因正常表达的肺癌(P<0.01)。FH IT基因缺失与肺癌的淋巴结转移有关,p53蛋白表达与临床分期、淋巴结转移密切相关。结论:FH IT基因缺失和p53蛋白异常表达与肺癌发生、发展密切相关,二者相互促进,呈明显正相关。 展开更多
关键词 肿瘤/遗传学 肿瘤蛋白质/遗传学 酸酐水解酶/遗传学 蛋白质p53/遗传学 基因缺失
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Survivin基因沉默对胰腺癌细胞Patu8988增殖及其对吉西他滨敏感性的影响
3
作者 岑伟立 刘凤华 《中国医师杂志》 CAS 2012年第8期1055-1059,共5页
目的研究Survivin基因沉默对人胰腺癌Patu8988细胞增殖和对化疗药物吉西他滨敏感性的影响。方法设计合成Survivin的siRNA序列,Lipofectamine^TM 2000转染入Patu8988细胞。采用RT.PCR和Western blot检测Survivin在干扰后mRNA和蛋白的... 目的研究Survivin基因沉默对人胰腺癌Patu8988细胞增殖和对化疗药物吉西他滨敏感性的影响。方法设计合成Survivin的siRNA序列,Lipofectamine^TM 2000转染入Patu8988细胞。采用RT.PCR和Western blot检测Survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期。通过MTY法和细胞克隆形成试验法观察Survivin基因沉默后Patu8988细胞对吉西他滨的敏感性。结果Survivin基因沉默48h后,Patu8988细胞的Survivin基因和蛋白表达明显降低,基因表达分别为:对照组:0.78±0.03,空白组:0.82±0.06,实验组:0.52±0.05;蛋白表达分别为:对照组:0.77±0.21,空白组:0.77±0.26,实验组:0.57±0.03,差异有统计学意义(P〈0.05)。细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少,其差异有统计学意义(P〈0.05)。Survivin基因沉默组细胞对吉西他滨的敏感性显著性增强。结论Survivin特异性siRNA能显著沉默Patu8988细胞Survivin基因,抑制细胞增殖,并增强Patu8988细胞对吉西他滨的敏感性。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 肿瘤蛋白质/遗传学 基因沉默 细胞增殖 脱氧胞苷/似物和
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非小细胞肺癌中PTEN及p53的表达及其临床意义 被引量:4
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作者 舒红 张洪兰 +1 位作者 杨春秋 姜卫国 《实用肿瘤杂志》 CAS 北大核心 2009年第6期559-562,共4页
目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)中PTEN及p53的表达及其临床意义。方法采用免疫组化S-P法,对61例NSCLC手术切除标本进行PTEN及突变型p53蛋白表达研究,分析其与NSCLC患者的病理类型及临床分期、预后的关系。结果(1)非小细胞肺癌中PTEN的表... 目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)中PTEN及p53的表达及其临床意义。方法采用免疫组化S-P法,对61例NSCLC手术切除标本进行PTEN及突变型p53蛋白表达研究,分析其与NSCLC患者的病理类型及临床分期、预后的关系。结果(1)非小细胞肺癌中PTEN的表达明显低于对照组(P<0.05);而p53蛋白则明显增高。(2)PTEN表达与组织学类型、临床分期和淋巴结转移显著相关;p53表达与性别和淋巴结转移显著相关。(3)非小细胞肺癌标本中PTEN与p53的表达呈显著负相关(rs=-0.282,P<0.05)。(4)Kaplan-Meier生存分析显示,PTEN表达阴性组患者平均生存期为36.5月,阳性组为71.0月;p53表达阴性组患者平均生存期为70.1月,阳性组为46.0月,经Logrank检验均显示P<0.05。结论PTEN的表达缺失及野生型p53基因的突变,可能是导致NSCLC发生的重要原因之一,可以作为肿瘤基因治疗的靶点;PTEN及p53的表达与NSCLC患者的预后关系密切,可能是肿瘤预后的标志物;PTEN与p53的表达呈明显的负相关,两者是否通过同一途径,或者两条途径如何相互影响,需进一步研究。 展开更多
关键词 非小细胞肺/病理 蛋白质P53 基因 肿瘤抑制 肿瘤抑制蛋白质/遗传学 免疫组织化 存活率 预后
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两种ErbB2/Neu阳性-PTEN缺失乳腺癌基因工程小鼠模型的建立及其生物学特征比较 被引量:1
5
作者 王庆飞 丁慧 +1 位作者 刘宝瑞 张葵 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期427-433,共7页
目的:建立两种ErbB2/Neu阳性-PTEN缺失的乳腺癌基因工程小鼠模型并比较其生物学特征。方法:利用先前建立的由鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子同时驱动活化型ErbB2/Neu基因和重组酶Cre表达的FVB/N—MMTV—NIC小鼠与Flox-PTEN小鼠交配... 目的:建立两种ErbB2/Neu阳性-PTEN缺失的乳腺癌基因工程小鼠模型并比较其生物学特征。方法:利用先前建立的由鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子同时驱动活化型ErbB2/Neu基因和重组酶Cre表达的FVB/N—MMTV—NIC小鼠与Flox-PTEN小鼠交配;或将由内源性启动子驱动活化型ErbB2/Neu基因表达的FVB/N-ErbB2^KI、FVB/N—MMTV—Cre及Flox—PTEN三种基因工程小鼠交配;PCR分别扩增Neu、Cre和PTEN基因,对其子代小鼠进行基因型鉴定;免疫组织化学法检测乳腺组织ErbB2/Neu和PTEN蛋白表达。对两种模型的成瘤时间、肿瘤数目、肺转移等生物学特征进行比较,观察肿瘤组织病理学形态,免疫组织化学法检测肿瘤细胞Ki-67表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡水平。结果:经基因型鉴定和组织蛋白表达分析,获得了两种ErbB2/Neu阳性-PTEN纯合型缺失的乳腺癌基因工程小鼠模型;一是由MMTV外源性启动子同时驱动活化型ErbB2/Neu和Cre表达,抑癌基因PTEN条件性敲除的NIC/PTEN^-/-模型;二是由MMTV-Cre使内源性启动子驱动ErbB2/Neu基因表达,PTEN条件性敲除的ErhB2^KI/PTEN^-/-模型。NIC/PTEN^-/-模型的平均成瘤时间低于ErbB2^KI/PTEN^-/-模型(30d与368d,P〈0.01);肿瘤数目、肺转移率均高于ErbB2^KI/PTEN^-/-模型(分别为10个与1~2个,75.0%与37.5%,均P〈0.01);两种模型肿瘤呈现不同的组织病理形态,肿瘤细胞凋亡水平相当(P〉0.05);NIC/PTEN^-/-模型Ki-67阳性细胞百分率高于ErhB2^KI/PTEN^-/-模型(86.9%±2.8%与37.4%±7.2%,P〈0.01)。结论:两种不同表型的ErbB2/Neu阳性-PTEN缺失的乳腺癌基因工程小鼠为探索ErbB2/HER2阳性乳腺癌的发生、发展规律及更有效的防治方案提供了理想的动物模型。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 基因 ERBB-2 磷酸单酯水解酶/生物合成 免疫组织化 染色体缺失 肿瘤抑制蛋白质/遗传学 疾病模型 动物 遗传工程
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真核表达载体pcDNA3.1-RASSF1的构建及其对肝癌细胞凋亡的影响
6
作者 邓应彬 朱烈烈 李志涛 《中国医师杂志》 CAS 2011年第1期16-18,22,共4页
目的构建pcDNA3.1-RASSFl真核表达载体,并检测其对肝癌细胞系HepG2凋亡的影响。方法应用聚合酶链反应技术从人RASSFlcDNA中扩增出RASSF1基因后,以内切酶XhoI和EcoRI进行双酶切,将其克隆人用相同酶处理的载体pcDNA3.1;将重组质粒p... 目的构建pcDNA3.1-RASSFl真核表达载体,并检测其对肝癌细胞系HepG2凋亡的影响。方法应用聚合酶链反应技术从人RASSFlcDNA中扩增出RASSF1基因后,以内切酶XhoI和EcoRI进行双酶切,将其克隆人用相同酶处理的载体pcDNA3.1;将重组质粒pcDNA3.1-RASSF1转染肝癌HepG2细胞,应用Westernblot法检测RASSF1的表达水平;用AnnexinV/PI法检测细胞的凋亡情况。结果酶切和测序结果表明,重组质粒pcDNA3.1.RASSF1构建成功;Westernblot法结果表明转染pcDNA3.1-RASSF1后HepG2细胞中RASSFl表达升高;AnnexinV/PI法用流式细胞术检测凋亡,空白组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-RASSFl组HepG2细胞的凋亡率分别为(5.8±0.42)%、(7.48±0.68)%和(35.1±3.15)%。结论真核表达载体pcDNA3.1-RASSF1构建成功;RASSF1蛋白在HepG2细胞中高表达,并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 ras蛋白质/遗传学/代谢 肿瘤抑制蛋白质/遗传学 遗传载体 肿瘤/代谢 细胞凋亡
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P15INK4B基因启动子甲基化程度与不同类型的MDS及其预后的关系探讨
7
作者 胡国瑜 谭奎 +3 位作者 袁朝晖 沈婵娟 罗晶 刘玉霞 《中国医师杂志》 CAS 2015年第9期1339-1342,共4页
目的 探讨P15INK4B基因启动子甲基化程度在不同类型骨髓增生异常综合征(MDS)的差异及与预后的关系.方法 运用甲基化特异性PCR及焦磷酸盐测序技术对44例不同类型的MDS患者P15INK4B基因启动子进行甲基化频率的检测,并与MDS的临床类型及... 目的 探讨P15INK4B基因启动子甲基化程度在不同类型骨髓增生异常综合征(MDS)的差异及与预后的关系.方法 运用甲基化特异性PCR及焦磷酸盐测序技术对44例不同类型的MDS患者P15INK4B基因启动子进行甲基化频率的检测,并与MDS的临床类型及临床特征进行统计学分析.结果 骨髓增生异常综合征-难治性贫血伴原始细胞增多Ⅱ型(MDS-RAEBⅡ)的患者P15INK4B基因启动子甲基化频率为(46.89±15.41)%,较其它类型的MDS增高,差异具有统计学意义(P<0.05),其它各型MDS患者P15INK4B的启动子甲基化频率差异无统计学意义(P>0.05);患者就诊时血小板下降的程度与P15INK4B基因启动子甲基化频率增高有关(t=9.02,P<0.01),血红蛋白下降和白细胞下降程度与P15INK4B基因启动子甲基化频率无关(P>0.05);P15INK4B基因启动子甲基化频率与MDS的危险分层的关系显示,低危和极低危组之间差异无统计学意义(P>0.05),中危组、高危组及极高危组之间差异均有统计学意义(P<0.05),且二年内转变为白血病患者的P15INK4B基因启动子甲基化频率为(49.21±8.78)%,与二年内未发生白血病转变的MDS患者的P15INK4B基因启动子甲基化频率(19.64%±6.24)%比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 P15INK4B基因启动子甲基化频率的检测可有助于判断MDS患者的预后评估. 展开更多
关键词 肿瘤抑制蛋白质/遗传学 甲基化 骨髓增生异常综合征/遗传学 预后
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RASSF1A和WIF-1基因甲基化程度与直肠癌患者新辅助放化疗疗效的关系
8
作者 张荣枝 荆威 《医学临床研究》 CAS 2022年第7期973-976,共4页
【目的】探讨血清Ras相关区域家族1A基因(RASSF1A)和Wnt抑制因子-1(WIF-1)基因甲基化程度与直肠癌患者新辅助放化疗(nCRT)疗效的关系。【方法】选取本院收治的109例直肠癌患者为研究对象,均给予nCRT治疗。分析患者治疗效果,根据肿瘤消... 【目的】探讨血清Ras相关区域家族1A基因(RASSF1A)和Wnt抑制因子-1(WIF-1)基因甲基化程度与直肠癌患者新辅助放化疗(nCRT)疗效的关系。【方法】选取本院收治的109例直肠癌患者为研究对象,均给予nCRT治疗。分析患者治疗效果,根据肿瘤消退程度分级(TRG)标准分为观察组(nCRT敏感,n=73)和对照组(nCRT不敏感,n=36)。收集两组患者年龄、性别、肿瘤距离肛门位置、分化类型、临床分期、淋巴结转移及合并疾病等临床资料,对比两组血清RASSF1A和WIF-1基因甲基化阳性表达率,分析RASSF1A和WIF-1基因甲基化程度与直肠癌患者nCRT疗效的相关性。【结果】两组年龄、性别、肿瘤距离肛门位置、分化类型、临床分期、淋巴结转移、合并疾病构成比及血压、血脂水平相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组血清RASSF1A基因阳性率为16.44%(12/73)、WIF-1基因甲基化阳性率为13.70%(10/73),均低于对照组的41.67%(15/36)和33.33%(12/36),且差异均有统计学意义(P<0.05)。经Spearman检验,血清RASSF1A和WIF-1基因甲基化程度与疗效呈负相关(P<0.01)。【结论】RASSF1A和WIF-1基因甲基化程度与直肠癌患者nCRT疗效关系密切,RASSF1A和WIF-1基因甲基化阳性率越高,患者nCRT疗效越低。 展开更多
关键词 直肠肿瘤/病理 肿瘤抑制蛋白质/遗传学 甲基化 化放疗
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骨肉瘤组织与血浆中RASSFIA甲基化的检测及其临床诊断意义
9
作者 肖智 臧晓方 王卫国 《医学临床研究》 CAS 2016年第9期1688-1691,共4页
[目的]寻求有助于骨肉瘤临床诊断的分子生物学标志物。[方法]甲基化特异性PCR法检测30例骨肉瘤患者肿瘤组织和血浆及15例健康志愿者骨组织和血浆中RASSF1A启动子甲基化情况。统计分析RASSF1A甲基化与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤分... [目的]寻求有助于骨肉瘤临床诊断的分子生物学标志物。[方法]甲基化特异性PCR法检测30例骨肉瘤患者肿瘤组织和血浆及15例健康志愿者骨组织和血浆中RASSF1A启动子甲基化情况。统计分析RASSF1A甲基化与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤分化、肿瘤转移等临床病理特征的相关性。[结果]正常骨组织及血浆中均未检测到RASSFlA基因启动子区的甲基化。骨肉瘤组织中RASSF1A甲基化阳性率为40%(12/30),血浆甲基化阳性率为26.7%(8/30)。12例肿瘤组织甲基化阳性患者其血浆甲基化阳性共8例,癌组织和血浆RASSF1A甲基化一致率为66.7%(8/12),18例癌组织甲基化阴性其血浆甲基化也为阴性,Kappa一致性检验显示骨肉瘤组织和血浆中RASSF1A甲基化水平具有一致性(κ=0.133,P〈0.05)。骨肉瘤组织及血浆中RASSF1A甲基化阳性率显著高于正常骨组织及血浆的甲基化阳性率(P〈0.05),且骨肉瘤组织和血浆中RASSF1A甲基化水平与患者的性别、年龄、肿瘤位置无关(P〉0.05),而与肿瘤的分化及有无远处转移有关(P〈0.05)。[结论]骨肉瘤患者血浆中RASSF1A启动子甲基化与骨肉瘤组织中变化具有一致性,可作为骨肉瘤患者临床诊断的一个辅助指标。 展开更多
关键词 骨肉瘤/诊断 肿瘤抑制蛋白质/遗传学 甲基化 生物标记
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