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抗TAG-72抗原单链抗体的原核表达及对人肝癌的检测 被引量：2
1
作者 徐宏勇 徐立 +1 位作者 李开宗 窦科峰 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2010年第7期699-702,共4页
目的探讨抗肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)单链抗体的原核表达及与4种肝癌细胞系和肝癌组织的特异性亲和力。方法将抗TAG-72单链抗体的cDNA片段插入噬菌粒载体pCANTAB5E,获得噬菌粒载体TAG-72-scFv-pCANTAB5E。将后者转化入E.coliHB2151,经... 目的探讨抗肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)单链抗体的原核表达及与4种肝癌细胞系和肝癌组织的特异性亲和力。方法将抗TAG-72单链抗体的cDNA片段插入噬菌粒载体pCANTAB5E,获得噬菌粒载体TAG-72-scFv-pCANTAB5E。将后者转化入E.coliHB2151,经β,D异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得抗TAG-72单链抗体蛋白。采用细胞培养及免疫细胞/组织化学方法 ,检测4种肝癌细胞系及石蜡包埋的肝癌组织中TAG-72抗原的表达。结果 SDS-PAGE及Western blot法证实,抗TAG-72单链抗体蛋白分子得以正确表达。抗TAG-72单链抗体可与肝癌细胞系SMMC7721、HepG2和HHCC结合,表明这3种细胞表达了特异性肿瘤抗原;抗TAG-72单链抗体不能结合BEL7402细胞。40例肝癌组织中TAG-72抗原表达阳性率Ⅰ期、Ⅱ～Ⅲ期分别为23.08%(3/13)和62.96%(17/27),在正常肝组织标本中无TAG-72抗原表达,TAG-72抗原在正常肝组织及肝癌组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TAG-72抗原在肝癌细胞或肝癌组织中有特异性表达,有可能成为判断肝癌的标志物。 展开更多
关键词 肝细胞癌 单链抗体 原核表达 肿瘤相关糖蛋白-72抗原
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肿瘤相关糖蛋白-72抗原在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义 被引量：6
2
作者 徐宏勇 徐立 +1 位作者 高建宏 李开宗 《山东医药》 CAS 北大核心 2007年第3期16-18,共3页
目的探讨抗肿瘤相关糖蛋白-72（TAG-72）抗原的表达及其与原发性胆囊癌（PGC）病理特征的关系。方法用原核表达获得抗TAG-72单链抗体，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和Western blot得以验证；用免疫组化方法检测TAG-72抗原在PGC... 目的探讨抗肿瘤相关糖蛋白-72（TAG-72）抗原的表达及其与原发性胆囊癌（PGC）病理特征的关系。方法用原核表达获得抗TAG-72单链抗体，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和Western blot得以验证；用免疫组化方法检测TAG-72抗原在PGC的表达。结果通过原核表达获取大小为31kDa的抗TAG-72单链抗体并得以证实。TAG-72抗原在胆囊良、恶性组织阳性率分别为59．6％、6．7％（P〈0．05）。高分化PGC的TAG-72抗原表达显著低于中低分化PGC（P〈0．05）；肿瘤直径≤2cm者TAG-72表达显著低于〉2cm者（P〈0．05）；在PGC Nevin临床分期Ⅰ～Ⅲ期与Ⅳ～Ⅴ期间则无显著性差异（P〉0．05）。结论获得了抗TAC-72单链抗体的原核表达方法。TAG-72抗原可以作为一个肿瘤标志物在临床中应用，为抗TAG-72单链抗体在PGC诊治中的应用奠定实验基础。 展开更多
关键词 胆囊肿瘤 抗肿瘤相关糖蛋白-72抗原 单链抗体
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嵌合锚定T淋巴细胞对肝癌细胞增殖的阻滞效应
3
作者 徐宏勇 徐立 李开宗 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2011年第4期370-373,共4页
目的探讨肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)靶向性嵌合锚定T淋巴细胞的制备方法,并检测它对TAG72阳性肝癌细胞增殖的阻滞效应。方法分离外周血单核细胞(PBMC),然后用免疫磁珠法分离得到CD8+T淋巴细胞。将重组真核表达载体anti-TAG72-scFv-CD28-pc... 目的探讨肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)靶向性嵌合锚定T淋巴细胞的制备方法,并检测它对TAG72阳性肝癌细胞增殖的阻滞效应。方法分离外周血单核细胞(PBMC),然后用免疫磁珠法分离得到CD8+T淋巴细胞。将重组真核表达载体anti-TAG72-scFv-CD28-pcDNA3.0采用脂质体介导的细胞转染和细胞培养,以制备TAG72靶向性的嵌合锚定T淋巴细胞;将嵌合锚定T淋巴细胞与TAG72阳性肝癌细胞SMMC7721共培养,通过流式细胞仪检测肝癌细胞的周期变化,分析嵌合锚定T淋巴细胞对肝癌细胞增殖的抑制效应。结果 TAG72靶向性嵌合锚定T淋巴细胞可识别肝癌细胞SMMC7721;用流式细胞仪检测发现,嵌合锚定T淋巴细胞可引起肝癌细胞SMMC7721的增殖阻滞。结论 TAG72靶向性嵌合锚定T淋巴细胞可特异性识别TAG72阳性肝癌细胞SMMC7721并引起其增殖阻滞。 展开更多
关键词 肝癌 肿瘤相关糖蛋白72抗原 单链抗体片段 T淋巴细胞
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