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人端粒酶蛋白催化亚单位基因逆转录病毒真核表达质粒的构建及其对人乳腺癌相关成纤维细胞增殖的影响 被引量：1
1
作者 彭琼乐 王黎阳 +3 位作者 赵浏阳 孙艳 柳满然 彭惠民 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第12期1594-1598,共5页
目的构建人端粒酶蛋白催化亚单位(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)逆转录病毒真核表达质粒,并检测其在人乳腺癌相关的成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF)中的表达及其对CAF增殖的影响。方法扩增pIRES-EGFP-hT... 目的构建人端粒酶蛋白催化亚单位(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)逆转录病毒真核表达质粒,并检测其在人乳腺癌相关的成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF)中的表达及其对CAF增殖的影响。方法扩增pIRES-EGFP-hTERT质粒,酶切回收hTERT片段,正向克隆至逆转录病毒载体pBABE-puro上,构建重组质粒pBABE-puro-hTERT,转染PT67细胞,进行逆转录病毒的包装。将PT67细胞上清感染原代培养的人乳腺癌CAF,荧光定量PCR和Westernblot分别检测hTERT基因在人乳腺癌CAF中的转录和表达,流式细胞术检测细胞的增殖情况。结果重组质粒pBABE-puro-hTERT经酶切和测序证实构建正确;与未处理的人乳腺癌CAF和感染pBABE-puro的细胞相比,感染重组质粒的人乳腺癌CAF中hTERT基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显增强,其增殖指数也明显增加(P<0.05)。结论成功构建了hTERT基因逆转录病毒真核表达质粒,其能增强人乳腺癌CAF的增殖能力,为乳腺癌微环境CAF的研究提供了良好的细胞模型。 展开更多
关键词 人端粒酶蛋白催化亚单位 逆转录病毒 乳腺癌 肿瘤相关的成纤维细胞 细胞增殖
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胰腺癌抗间质治疗的研究进展 被引量：1
2
作者 屈舒婷 徐炜 许春芳 《交通医学》 2023年第5期448-453,共6页
胰腺癌恶性程度高,生存率低,多发于胰头部,胰腺导管腺癌是最常见的类型。既往研究认为,胰腺癌细胞自身改变(如表面抗原的缺失、信号通路异常活化等)是治疗失败的主要原因。随着对胰腺癌研究的深入,发现在肿瘤细胞周围存在高度免疫抑制... 胰腺癌恶性程度高,生存率低,多发于胰头部,胰腺导管腺癌是最常见的类型。既往研究认为,胰腺癌细胞自身改变(如表面抗原的缺失、信号通路异常活化等)是治疗失败的主要原因。随着对胰腺癌研究的深入,发现在肿瘤细胞周围存在高度免疫抑制的微环境。肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)与肿瘤细胞间的相互作用不仅直接刺激癌细胞的增殖,还使免疫抑制细胞异常活化和免疫杀伤细胞功能受限,导致抗肿瘤治疗的失效。TME主要由致密的间质和广泛的免疫抑制细胞两部分组成。间质的细胞和非细胞成分通过各种不同机制促进胰腺癌的进展、转移,诱导癌细胞的耐药。阐明间质各成分及其作用机制,有助于寻找胰腺癌新的有效治疗方案。 展开更多
关键词 胰腺癌 间质 胰腺星状细胞 肿瘤相关成纤维细胞 透明质酸 富含半胱氨酸的分泌性蛋白
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膀胱癌免疫治疗相关肿瘤微环境及其在人和小鼠肿瘤中的组成特征初探 被引量：1
3
作者 周炳坤 王博 +3 位作者 贺情情 黄孝东 陈俊宇 黄健 《岭南现代临床外科》 2022年第2期143-153,共11页
目的应用生物信息学分析鉴定膀胱癌免疫治疗中起关键作用的肿瘤微环境(TME)组成特征,初步分析这些组分在人膀胱癌组织和BBN(N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine)诱导的自发小鼠膀胱肿瘤中表型的相似性。方法分析晚期膀胱癌PD-L1阻... 目的应用生物信息学分析鉴定膀胱癌免疫治疗中起关键作用的肿瘤微环境(TME)组成特征,初步分析这些组分在人膀胱癌组织和BBN(N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine)诱导的自发小鼠膀胱肿瘤中表型的相似性。方法分析晚期膀胱癌PD-L1阻断治疗IMvigor210数据集,利用DESeq2筛选与疗效相关的差异基因,通过GO和KEGG通路富集分析找出差异富集的通路;采用IOBR分析TME中的细胞浸润特征。通过TCGA数据库分析差异浸润细胞基因集与膀胱癌预后和分期的关系,在我院32例膀胱癌组织标本中进行免疫组化验证。建立BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤模型,通过H&E染色和免疫组化对BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤和人膀胱癌进展相似性及其TME主要组分进行比较。结果在IMvigor210数据集中存在521个与免疫治疗疗效相关的差异基因,其中44个差异基因富集在含胶原细胞外基质上,提示成纤维细胞与免疫治疗疗效相关。TME分析发现细胞周期、组蛋白等肿瘤细胞基因集与NK细胞、CD8^(+)T细胞基因集在膀胱癌免疫治疗有效组中富集,而炎症性肿瘤相关成纤维细胞基因集在免疫治疗无效组中富集。TCGA分析显示:NK细胞和CD8^(+)T细胞基因集与膀胱癌患者总体生存时间呈正相关,CD56表达与膀胱癌病理分期呈正相关;PDGFRB表达与膀胱癌病理分期呈正相关。相比于低分期膀胱癌,PDGFRB^(+)成纤维细胞在高分期膀胱癌中数量更多。在BBN小鼠模型中,BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤发生率随着诱导时间逐渐升高,最终发展为肌层浸润性膀胱癌。免疫组化染色显示:小鼠和人膀胱肿瘤的TME中NK细胞和CD8^(+)T细胞以及成纤维细胞的浸润特征相似。结论本研究结合生信分析和免疫组化评分发现:膀胱癌中NK细胞、CD8^(+)T细胞和成纤维细胞与免疫治疗疗效和预后具有相关性;这些细胞在BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤与人膀胱癌组织中的浸润 展开更多
关键词 膀胱癌 生物信息学 肿瘤微环境 肿瘤相关成纤维细胞 BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤模型
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CAFs的活化机制及其在肿瘤发生发展中的作用
4
作者 陈曦 杨力芳 李丹 《生命科学研究》 CAS CSCD 2018年第3期235-242,共8页
肿瘤的发生发展不仅与肿瘤细胞本身有关,还与肿瘤微环境(tumor microenvironment)有密切关系。肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境中的主要成分之一,它能促进肿瘤的生长、侵袭转移以及血管生成。研究... 肿瘤的发生发展不仅与肿瘤细胞本身有关,还与肿瘤微环境(tumor microenvironment)有密切关系。肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境中的主要成分之一,它能促进肿瘤的生长、侵袭转移以及血管生成。研究认为CAFs主要来源于肿瘤周围间质组织中的成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),此外也可来源于肿瘤干细胞和肿瘤间质中的其他细胞。NFs可经过肿瘤微环境中一些可溶性的细胞因子诱导,发生一系列的表型改变及功能基因的差异表达,从而活化为CAFs。癌蛋白以及mi RNA也均可诱导NFs向CAFs转化,从而调控肿瘤的发生发展。因此,深入研究CAFs的活化途径和机制以及它在肿瘤发生发展中的作用是肿瘤微环境研究中的重要问题,可对今后肿瘤的治疗产生一定的推进作用。 展开更多
关键词 肿瘤微环境 肿瘤相关成纤维细胞(CAFs) CAFs的活化 肿瘤发生发展 肿瘤治疗
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