TNFR-Fc上调Nrf2表达改善小鼠急性肺损伤氧化损伤的作用

1

作者 袁伟锋 李理 +2 位作者 黄文杰 徐虹 郑燕列 《华南国防医学杂志》 CAS 2021年第9期621-624,634,共5页

目的探讨肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(tumor necrosis factor receptor-Fc fusion protein,TNFR-Fc)逆转急性肺损伤(acute lung injury,ALI)过程中受抑制的红系衍生的核因子2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nr... 目的探讨肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(tumor necrosis factor receptor-Fc fusion protein,TNFR-Fc)逆转急性肺损伤(acute lung injury,ALI)过程中受抑制的红系衍生的核因子2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)表达,并纠正肺组织氧化损伤的作用。方法小鼠分为对照组、ALI组、干预组,以气管内滴入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)复制ALI小鼠模型,干预组小鼠腹腔内注射TNFR-Fc,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清/支气管肺泡灌洗液(broncheo-alveolar lavage fluid,BALF)中白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)与IL-10浓度。Western blot检测肺组织Nrf2表达水平,比色法检测肺组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)与总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)。实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测肺组织氧化酶转录水平。结果干预组小鼠血清与BALF的IL-6浓度较ALI组显著下降(血清:1073.48±156.062 vs.1739.03±423.206,P<0.05;BALF:468.37±123.615 vs.1440.15±184.585,P<0.05),BALF中IL-10浓度与ALI组相仿(P>0.05)。干预组小鼠肺组织Nrf2相对表达水平(11.66±1.317 vs.3.00±0.184,P<0.001)与T-AOC(0.26±0.015 vs.0.22±0.020,P=0.034)高于ALI组,MDA浓度稍低于ALI组(22.51±3.875 vs.25.40±3.239,P=0.288)。干预组黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)基因转录强度显著低于ALI组(1.09±0.361 vs.2.46±0.650,P=0.008),而超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)基因转录水平相仿(P>0.05)。结论LPS致ALI时Nrf2表达水平下降,伴随肺组织氧化损伤,而通过TNFR-Fc降低炎症反应强度后,Nrf2表达水平增高,逆转ALI的肺组织氧化损伤。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子受体fc段融合蛋白 红系衍生核因子相关因子2 急性肺损伤 炎症反应 氧化损伤

原文传递

TNFR-Fc对急性肺损伤炎症失衡中MAPK通路的影响

2

作者 袁伟锋 李理 +1 位作者 黄文杰 郑燕列 《临床肺科杂志》 2022年第7期1051-1054,1060,共5页

目的评价在脂多糖(LPS)导致的炎症反应失衡中,肿瘤坏死因子受体Fc段融合蛋白(TNFR-Fc)对丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)磷酸化水平的影响。方法24只BALB/c小鼠随机平均分为LPS组与TNFR-Fc+LPS组。气管内滴入LPS复制急性肺损伤(ALI)的炎症失... 目的评价在脂多糖(LPS)导致的炎症反应失衡中,肿瘤坏死因子受体Fc段融合蛋白(TNFR-Fc)对丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)磷酸化水平的影响。方法24只BALB/c小鼠随机平均分为LPS组与TNFR-Fc+LPS组。气管内滴入LPS复制急性肺损伤(ALI)的炎症失衡小鼠模型,腹腔内注射TNFR-Fc中和肿瘤坏死因子(TNF-α),2小时后收集标本,ELISA法检测血清/支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、干扰素-γ(IFN-γ)浓度,RT-PCR法检测肺组织TNF-α与核因子-κB(NF-κB)基因转录强度,Western Blot检测肺组织MAPKs(包括Erk1/2、p38与JNK)磷酸化水平。结果两组小鼠在气管内滴入LPS后血清与BALF中IL-6浓度显著增高,TNF-α转录水平增高,MAPKs磷酸化水平增高;TNFR-Fc+LPS组小鼠血清与BALF中IL-6浓度较LPS组显著降低,TNF-α转录水平下降,MAPK磷酸化水平下降。结论TNFR-Fc中和TNF-α能下调炎症反应信号通路中MAPKs磷酸化水平,下调炎症反应强度,恢复ALI小鼠的炎症反应失衡。 展开更多

关键词 炎症反应 肿瘤坏死因子受体fc段融合蛋白 裂原活化蛋白激酶 急性肺损伤

下载PDF 职称材料

重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白质控方法和标准的研究 被引量：12

3

作者 张翊 高凯 +2 位作者 韩春梅 饶春明 王军志 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期165-168,共4页

目的　建立重组人肿瘤坏死因子受体 Fc融合蛋白质控方法和质量标准。方法　用中和TNF α生物学活性的方法测定重组人肿瘤坏死因子受体 Fc融合蛋白效价 ,用胰蛋白酶酶切分析肽图 ,用ELISA方法分别测定蛋白A、残留宿主细胞蛋白残留量和... 目的　建立重组人肿瘤坏死因子受体 Fc融合蛋白质控方法和质量标准。方法　用中和TNF α生物学活性的方法测定重组人肿瘤坏死因子受体 Fc融合蛋白效价 ,用胰蛋白酶酶切分析肽图 ,用ELISA方法分别测定蛋白A、残留宿主细胞蛋白残留量和重组人肿瘤坏死因子受体 Fc融合蛋白含量。结果　建立了重组人肿瘤坏死因子受体 Fc融合蛋白的生物学活性、肽图分析、残留蛋白A等质控方法和质量标准。结论　建立的方法和质量标准已用于重组人肿瘤坏死因子受体 展开更多

关键词 重组人肿瘤坏死因子受体-fc融合蛋白 质控 质量标准 生物学活性

下载PDF 职称材料

TNFR-Fc减轻LPS所致小鼠ALI炎症反应损伤 被引量：4

4

作者 袁伟锋 李理 +1 位作者 徐虹 黄文杰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2387-2390,2395,共5页

目的:评价肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(TNFR-Fc)能否有效下调炎症反应而减轻急性肺损伤(ALI)小鼠的肺组织破坏。方法:小鼠随机分为脂多糖(LPS)组、TNFR-Fc+LPS组和对照组。气管内滴入LPS复制ALI小鼠模型,TNFR-Fc组在滴入LPS前24 h腹膜... 目的:评价肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(TNFR-Fc)能否有效下调炎症反应而减轻急性肺损伤(ALI)小鼠的肺组织破坏。方法:小鼠随机分为脂多糖(LPS)组、TNFR-Fc+LPS组和对照组。气管内滴入LPS复制ALI小鼠模型,TNFR-Fc组在滴入LPS前24 h腹膜腔注射TNFR-Fc(0.4 mg/kg),在滴入LPS后2 h收集标本,检测肺湿/干重、肺泡蛋白含量与肺组织病理评分;ELISA法检测血清TNF-α浓度及检测肺泡灌洗液与血清IL-1β、IL-6、IL-10与IFN-γ浓度。结果:TNFR-Fc显著降低血清TNF-α浓度(P<0.05),轻度降低肺湿/干重比例,显著降低BALF蛋白浓度(P<0.05),显著降低ALI评分数值(P<0.05)。TNFR-Fc显著降低致炎症细胞因子IL-6在BALF(P<0.05)与血清(P<0.05)中的浓度,轻度提高BALF中IL-10浓度(P>0.05),但其差异不显著,亦能显著提高血清IL-10浓度(P<0.05)。IL-1β与IFN-γ水平处理前后变化不显著。结论:TNFR-Fc中和ALI中过度表达的TNF-α,下调以IL-6为代表的炎症反应,减轻ALI的肺组织破坏。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子受体-fc融合蛋白 急性肺损伤 炎症

下载PDF 职称材料

不同肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白N-糖基化修饰糖链的初步分析 被引量：4

5

作者 何椿鹏 华玲 +8 位作者 杨小盼 万德有 李萌萌 王清清 陈方 董立厚 高新 高月 宋海峰 《国际药学研究杂志》 CAS CSCD 2013年第3期344-349,364,共7页

目的建立基于LC-MS的N-糖基化修饰糖链的分析方法,并比较不同肿瘤坏死因子受体(TNFR)-Fc融合蛋白N-糖基化修饰差异。方法用肽-N-糖苷酶F释放糖蛋白中的修饰糖链,有机溶剂沉淀蛋白后,利用还原胺化反应将2-氨基苯甲酰胺标记至糖链上,并通... 目的建立基于LC-MS的N-糖基化修饰糖链的分析方法,并比较不同肿瘤坏死因子受体(TNFR)-Fc融合蛋白N-糖基化修饰差异。方法用肽-N-糖苷酶F释放糖蛋白中的修饰糖链,有机溶剂沉淀蛋白后,利用还原胺化反应将2-氨基苯甲酰胺标记至糖链上,并通过亲水作用萃取柱除去过量标记试剂,所得糖链采用ZIC-HILIC亲水作用色谱柱结合离子阱质谱进行分析。以市售TNFR-Fc融合蛋白为标准品,优化影响标记效率的各种因素后,对A和B两种TNFR-Fc融合蛋白制品的N-糖基化修饰糖链进行了分析和比较。结果 TNFR-Fc融合蛋白A和B中的修饰糖链主要含有岩藻糖、末端唾液酸、末端半乳糖、末端N-乙酰葡糖胺等糖型,且末端唾液酸含量相近,但融合蛋白A的岩藻糖和末端N-乙酰基葡萄糖的含量显著高于融合蛋白B,而融合蛋白B末端半乳糖含量高于融合蛋白A。结论成功建立了基于LC-MS的N-糖基化修饰糖链的分析方法,该方法可有效分析糖蛋白中的修饰糖链类型和含量比例,对于详细表征糖蛋白药物结构及性质具有参考价值,并为进一步研究糖基化对糖蛋白药物药理活性以及药代动力学研究奠定了良好基础。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子受体-fc融合蛋白 N-糖基化 2-氨基苯甲酰胺标记 LC-MS ZIC-HILIC 糖型

下载PDF 职称材料

重组人肿瘤坏死因子可溶性受体-Fc融合蛋白体外放射分析与活性的关系

6

作者 吴芳 董墨 +1 位作者 刘彦君 汪勇先 《药物生物技术》 CAS CSCD 2006年第3期192-196,共5页

建立可溶性受体放射分析方法以测试本实验室研制及国外上市的可溶性受体平衡解离常数,评价两者对配体亲和力的差异与活性的关系。用125I标记的配体(TNFα)进行放射配体结合实验,确定固相分离方法;中和TNFα对L929细胞杀伤检测可溶性受... 建立可溶性受体放射分析方法以测试本实验室研制及国外上市的可溶性受体平衡解离常数,评价两者对配体亲和力的差异与活性的关系。用125I标记的配体(TNFα)进行放射配体结合实验,确定固相分离方法;中和TNFα对L929细胞杀伤检测可溶性受体活性。结果:运用酶标板作为固相,分离结合标记配体与游离标记配体,测定本实验室研制的可溶性受体(TNFR-Fc)平衡解离常数Kd值为1.20 nmol/L,国外上市产品(ENBREL)平衡解离常数Kd值为0.95 nmol/L。两产品亲和力存在差异,平衡解离常数小,亲和力高,体外活性检测也高,从一个量化质控指标增至到两个量化质控指标来评价此类阻断炎症介质的药物的质量,也可以成为开发此类药物筛选评价的重要的手段。 展开更多

关键词 重组人肿瘤坏死因子受体-fc融合蛋白 配体 固相分离

下载PDF 职称材料

表达rhTNFR-Fc的CHO细胞的氨基酸代谢特征及氨基酸流加培养工艺研究

7

作者 唐治华 应跃斌 +3 位作者 江海燕 黄敏芬 罗家立 陈枢青 《药物生物技术》 CAS CSCD 2008年第1期35-39,共5页

为提高表达重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(rhTNFR-Fc)的CHO工程细胞的培养密度和目的蛋白表达,研究了葡萄糖和谷氨酰胺流加-批式培养工艺的细胞氨基酸代谢特征及游离氨基酸和大豆蛋白水解物的补加策略。通过补加葡萄糖和谷氨酰胺... 为提高表达重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(rhTNFR-Fc)的CHO工程细胞的培养密度和目的蛋白表达,研究了葡萄糖和谷氨酰胺流加-批式培养工艺的细胞氨基酸代谢特征及游离氨基酸和大豆蛋白水解物的补加策略。通过补加葡萄糖和谷氨酰胺浓缩液分别维持其浓度为10 mmol/L和2 mmol/L左右,在不同阶段定期补加特定的氨基酸浓缩液或大豆蛋白水解物补充氨基酸消耗,检测细胞培养上清中rhTNFR-Fc的表达。谷氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、脯氨酸等4种非必需氨基酸快速消耗,是CHO工程细胞增殖和目的蛋白表达的限制性底物。以游离氨基酸、游离氨基酸合并大豆蛋白水解物补充氨基酸消耗可分别使细胞生长密度提高50%、100%,目的蛋白表达增加60%、125%,培养时程延长44%、66%,同时葡萄糖比消耗率、乳酸比生成率降低,谷氨酰胺的利用效率提高。 展开更多

关键词 重组人肿瘤坏死因子受体-fc融合蛋白CHO细胞 氨基酸 流加-批式 代谢

下载PDF 职称材料

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白联合甲氨蝶呤治疗中重度类风湿关节炎的疗效与安全性

8

作者 刘丽蓉 张菊 +2 位作者 蔡青 管剑龙 戴生明 《药学服务与研究》 CAS CSCD 2013年第4期261-264,共4页

目的:观察国产重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(TNFRⅡ-Fc)与甲氨蝶呤(MTX)联合治疗中重度类风湿关节炎的疗效与安全性。方法:46例病人随机分为MTX组和TNFRⅡ-Fc联合MTX组,疗程24周。疗效评价采用美国风湿病学会(ACR)疗效评定标... 目的:观察国产重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(TNFRⅡ-Fc)与甲氨蝶呤(MTX)联合治疗中重度类风湿关节炎的疗效与安全性。方法:46例病人随机分为MTX组和TNFRⅡ-Fc联合MTX组,疗程24周。疗效评价采用美国风湿病学会(ACR)疗效评定标准。结果:治疗2周后,联合治疗组的ACR20改善率和ACR50改善率均显著高于MTX组(P<0.05,P<0.01)。治疗24周后,联合治疗组的ACR50改善率约为MTX组的2倍;ACR70改善率约为MTX组的3.5倍。与基线值相比,MTX组在治疗12周后DAS28明显下降,而联合治疗组在治疗2周后DAS28即有所下降。在治疗2～24周期间,联合治疗组的DAS28较基线值下降的幅度均显著大于MTX组。MTX组和联合用药组不良事件总的发生率分别为17.4%和30.4%,差异无显著意义。其中最常见的不良事件为恶心和上腹不适。结论:TNFRⅡ-Fc联合MTX较单用MTX能更有效控制类风湿关节炎的病情活动,且不良反应无明显增加。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 药物疗法 重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-fc融合蛋白 甲氨蝶呤

下载PDF 职称材料

表达人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc的CHO-DG44细胞的培养温度优化研究 被引量：2

9

作者 雷云 谢奎 +4 位作者 洪刚 陈宝琼 杨依丽 谢秋玲 熊盛 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期90-96,共7页

目的优化表达人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc(TNFR-Fc)融合蛋白的重组CHO-DG44细胞的培养温度,并考察该细胞株在最佳温度放大培养下纯化后的产物纯度及活性。方法采用批次培养方式,将重组中国仓鼠卵巢细胞培养于37℃、37℃转31℃、31℃3种不... 目的优化表达人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc(TNFR-Fc)融合蛋白的重组CHO-DG44细胞的培养温度,并考察该细胞株在最佳温度放大培养下纯化后的产物纯度及活性。方法采用批次培养方式,将重组中国仓鼠卵巢细胞培养于37℃、37℃转31℃、31℃3种不同的温度下,每日取样检测细胞密度、细胞活率、葡萄糖浓度、乳酸浓度、人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白浓度,并选择最佳的培养温度对重组中国仓鼠卵巢细胞进行放大(10、50、200 mL、2 L)培养,所得培养上清经Protein A亲和色谱柱纯化,并采用SDS-PAGE,SE-HPLC,WST-8对人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白进行相对分子质量,纯度和生物活性检测。结果研究发现,37℃转31℃的转温度培养条件可在保持高密度活细胞的同时维持细胞活率,延长培养周期,显著提高人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白产量,并且该转温度培养工艺可成功地应用于重组CHO细胞的规模放大培养中。纯化后的人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白相对分子质量约为150×103,纯度在93%以上,生物活性检测显示其可中和重组人肿瘤坏死因子α的细胞毒效应。结论相比单一的37℃培养条件,37℃转31℃的转温度培养工艺可明显提高重组CHO-DG44细胞的人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白表达量,且该工艺具有可放大性,这为该工艺的更大规模应用奠定了基础。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-fc融合蛋白 温度 规模放大

原文传递

重组人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白联合甲氨蝶呤治疗中重度活动性类风湿关节炎的临床和放射学疗效评估 被引量：2

10

作者 陈晓翔 戴青 +9 位作者 吴华香 赵东宝 李兴福 胡绍先 杨南萍 陶怡 徐建华 黄安斌 姜林娣 鲍春德 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期671-676,共6页

目的评价重组人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白（TNFRⅡ-Fc，商品名：安佰诺）治疗中重度活动性类风湿关节炎（RA）的临床和影像学疗效。方法396例RA患者随机分为联合用药组、TNFRⅡ-Fc组和甲氨蝶呤组，疗程均为24周，单因素方差分析美... 目的评价重组人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-Fc融合蛋白（TNFRⅡ-Fc，商品名：安佰诺）治疗中重度活动性类风湿关节炎（RA）的临床和影像学疗效。方法396例RA患者随机分为联合用药组、TNFRⅡ-Fc组和甲氨蝶呤组，疗程均为24周，单因素方差分析美国风湿病学会（ACR）-N、ACR20、ACR50、ACR70、疾病活动指数（DAS）28和治疗前后双手的X线sharⅡ评分（SHS）等疗效和安全性指标。结果治疗24周后，ACR—N的年改善率联合组为（12．79±9．24）％，TNFRⅡ-Fc组为（9．56±11．16）％，甲氨蝶呤组为（5．08±11．10）％，联合用药组优于TNFRⅡ-Fc组和甲氨蝶呤组（P〈0．05），TNFRⅡ-Fc组优于甲氨蝶呤组（P〈0．05）。ACR20的达标率联合组（80．4％）优于TNFRⅡ-Fc组（71．1％）和甲氨蝶呤组（56．7％），差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。治疗24周后，联合组ACR50和ACR70的达标率分别为53．6％和27．7％，TNFRⅡ-Fc组为41．2％和15．8％，甲氨蝶呤组为30．8％和7．7％，联合组ACR50达标率优于甲氨蝶呤组（P〈0．01），联合组ACR70达标率优于TNFRⅡ-Fc组和甲氨蝶呤组（P〈0．05或P〈0．01）。联合组的DAS28-红细胞沉降率（ESR）改善优于TNFRⅡ-Fc组和甲氨蝶呤组，差异有统计学意义（P〈0．05）。双手SHS评分治疗前后差值联合组（-11．7±11．2）较甲氨蝶呤组（2．1±11．5）显著下降（P=0．03）。联合组不良反应发生率（40．9％）高于甲氨蝶呤组（28．8％），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论本研究显示TNFRⅡ-Fc联合甲氨蝶呤较单独使用TNFRⅡ-Fc或甲氨蝶呤能更有效控制RA的活动性和影像学进展。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿 甲氨蝶呤 重组人肿瘤坏死因子受体Ⅱ-fc融合蛋白

原文传递

应用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体Fc融合蛋白治疗非全身型幼年特发性关节炎患者的护理 被引量：1

11

作者 彭芳 曾小燕 《中国实用护理杂志》 北大核心 2014年第22期48-50,共3页

目的总结重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体Fc融合蛋白治疗非全身型幼年特发性关节炎的护理体会。方法对32例非全身型幼年特发性关节炎患儿使用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体Fc融合蛋白进行治疗，着重加强了用药不良反应的观察，用药... 目的总结重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体Fc融合蛋白治疗非全身型幼年特发性关节炎的护理体会。方法对32例非全身型幼年特发性关节炎患儿使用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体Fc融合蛋白进行治疗，着重加强了用药不良反应的观察，用药指导。同时进行了心理护理、饮食指导、关节功能锻炼、康复指导等护理。结果使用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体Fc融合蛋白治疗非全身型幼年特发性关节炎安全、有效，给予正确的护理后不良反应发生率低。结论在使用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体Fc融合蛋白治疗非全身型幼年特发性关节炎时，应着重患儿的用药护理，使患儿了解疾病的相关知识、用药的重要性和注意事项，增加患儿的依从性，减少不良反应的发生，提高疗效，从而有效提高患儿的生活质量。 展开更多

关键词 重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体fc融合蛋白 幼年特发性关节炎 护理

原文传递