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虫草多糖对单侧输尿管梗阻小鼠肾小管上皮-间充质转化的影响 被引量:19
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作者 吴冀宁 刘必成 +1 位作者 夏慧玲 刘殿阁 《中国中西医结合肾病杂志》 2008年第5期400-402,I0006,共4页
目的:观察虫草多糖对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾小管上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:建立小鼠UUO模型,虫草多糖干预7 d。观察模型及治疗组在第7天时肾间质纤维化程度及肾小管α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肾小管上皮表型标记物(E-cadh... 目的:观察虫草多糖对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾小管上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:建立小鼠UUO模型,虫草多糖干预7 d。观察模型及治疗组在第7天时肾间质纤维化程度及肾小管α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肾小管上皮表型标记物(E-cadherin)、整合素连接激酶(integrin-linked protein kinase,ILK)的表达分布。结果:治疗组的肾间质纤维化程度明显改善,同时α-SMA、ILK蛋白的表达显著低于对照组(P<0.01)。而E-cadherin的表达显著高于对照组(P<0.01)。结论:虫草多糖可显著减轻E-cadherin的丢失和α-SMA的表达,并明显抑制ILK的表达,提示其可能通过下调ILK,抑制EMT,从而减轻肾小管间质纤维化。 展开更多
关键词 虫草多糖 单侧输尿管梗阻 肾小管上皮-转化 纤维化 整合素连接激酶
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复方蛇龙胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化抑制作用及机制研究
2
作者 郑博文 李宇玲 +5 位作者 刘华亭 陈晨 范晓阳 司瑞花 贾世艳 刘光珍 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2024年第12期29-36,共8页
目的在体内肾纤维化模型研究复方蛇龙胶囊(Compound Shelong Capsules,CSC)对肾小管上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的调控作用,以及对Wnt4/β-catenin信号通路的影响,为慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD... 目的在体内肾纤维化模型研究复方蛇龙胶囊(Compound Shelong Capsules,CSC)对肾小管上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的调控作用,以及对Wnt4/β-catenin信号通路的影响,为慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)肾纤维化治疗提供实验依据。方法采用单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)法建立肾纤维化大鼠模型。将SD大鼠随机分为空白组(Control组)、假手术组(Sham组)、造模组。造模组行UUO手术后,将大鼠随机分为模型组(UUO组)、阳性药物对照组[LP组,7.5 mg/(kg·d)]、复方蛇龙胶囊高剂量组[CSC-H组,1.5 g/(kg·d)]、复方蛇龙胶囊中剂量组[CSC-M组,0.75 g/(kg·d)]、复方蛇龙胶囊低剂量组[CSC-L组,0.375 g/(kg·d)]。手术24 h后给药,1次/d,连续给药14 d。检测血清中肌酐(creatinine,Cr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)的含量;留取患侧肾脏在光镜电镜下观察病理改变;Western blot、荧光定量PCR检测患侧肾脏α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、上皮型钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、Wnt4和β-catenin的表达水平。结果与UUO组比较,LP组、CSC-H组和CSC-M组Cr水平降低(P<0.05,P<0.01),CSC-H组和CSC-L组BUN水平降低(P<0.05,P<0.01)。患侧肾脏观察HE染色结果可知各给药组病变程度均有一定改善;天狼星红染色结果可知各给药组红染程度有所减轻;透射电镜结果各给药组肾小管上皮细胞水肿程度减轻。与UUO组比较,LP组、CSC-M组和CSC-L组α-SMA蛋白表达水平显著降低(P<0.01);CSC-M组E-cadherin蛋白表达水平增加(P<0.05);CSC-M组Wnt4蛋白表达水平降低(P<0.05);LP组和CSC-H组β-catenin蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与UUO组比较,CSC-H组α-SMA mRNA表达水平下降(P<0.05);CSC-H组、CSC-M组、CSC-L组E-cadherin mRNA表达水平显著增加(P<0.01);各给药组Wnt4 mRNA表达水平下降(P<0.05,P<0.01);LP组、CSC-H组、CSC-M组β-catenin mRNA表达水平下降(P<0.05,P<0.01)。结 展开更多
关键词 复方蛇龙胶囊 肾纤维化 肾小管上皮-转化 Wnt4/β-catenin
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舒洛地特抑制单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化 被引量:4
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作者 张颖娟 连耀国 +3 位作者 夏文丽 李明喜 李雪梅 郑法雷 《北京医学》 CAS 2011年第2期157-162,166,共7页
目的探讨舒洛地特对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾脏间质纤维化的作用,及其对肾小管上皮-间充质转化(EMT)和肾组织Jagged-1、Notch1表达的影响。方法雄性CD1小鼠60只随机分为:假手术组(A组),仅行腹膜切开后缝合;对照组(B组),行单侧输尿管结... 目的探讨舒洛地特对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾脏间质纤维化的作用,及其对肾小管上皮-间充质转化(EMT)和肾组织Jagged-1、Notch1表达的影响。方法雄性CD1小鼠60只随机分为:假手术组(A组),仅行腹膜切开后缝合;对照组(B组),行单侧输尿管结扎,术后予生理盐水0.1ml/d皮下注射;低剂量治疗组(C组),单侧输尿管结扎术后予小剂量舒洛地特6mg/(kg·d)皮下注射;高剂量治疗组(D组),单侧输尿管结扎术后予大剂量舒洛地特12mg/(kg·d)皮下注射。B、C、D组动物分别于术后第3d、7d、14d处死6只,取输尿管结扎侧肾组织。肾脏标本行HE、Masson染色检测肾间质纤维化程度。应用免疫组化、WesternBlot、RT-PCR检测肾脏组织中α-SMA、TGF-β1、VEGF、Jagged-1和Notch1表达。结果 HE染色显示,UUO术后肾脏间质区域细胞外基质成分逐渐增多,肾小管萎缩,细胞成分减少,而肾小球病变不明显。舒洛地特治疗后UUO小鼠肾脏组织学变化减轻,高剂量组效果更为显著。Masson染色显示,UUO术后小鼠肾组织出现明显肾间质纤维化,舒洛地特治疗可明显抑制肾间质纤维化(P<0.001)。与A组比较,B组肾组织α-SMA、TGF-β1和Jagged-1mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05);舒洛地特治疗明显抑制UUO小鼠肾组织α-SMA、TGF-β1和Jagged-1表达(P<0.05)。B组和A组比较,VEGF表达明显降低(P<0.05),舒洛地特治疗后VEGF表达无明显变化。未检测出小鼠肾组织中Notch1表达。结论舒洛地特可抑制UUO小鼠肾间质纤维化,这可能与舒洛地特抑制UUO小鼠肾组织EMT有关,而EMT的减轻可能与UUO小鼠肾组织TGF-β1,Jagged-1表达下调有关,VEGF在其中的作用尚不明确,其确切机制需进一步探讨。 展开更多
关键词 舒洛地特 单侧输尿管梗阻 纤维化 肾小管上皮-转化 TGF-Β1 JAGGED-1
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地塞米松对马兜铃酸诱导的人肾小管上皮-间充质转化的作用及可能机制 被引量:1
4
作者 马东红 苏颖 +2 位作者 李明喜 李雪梅 郑法雷 《北京医学》 CAS 2012年第4期305-309,I0002,共6页
目的探讨地塞米松(Dex)对马兜铃酸诱导的肾小管上皮-间充质转化(EMT)的影响及可能机制。方法体外培养的人肾小管上皮细胞(HKC)分为阴性对照组、马兜铃酸(AA,10μg/ml)作用组、Dex(100μmol/L)作用组、AA(10μg/ml)+无水乙醇(100μmol/L... 目的探讨地塞米松(Dex)对马兜铃酸诱导的肾小管上皮-间充质转化(EMT)的影响及可能机制。方法体外培养的人肾小管上皮细胞(HKC)分为阴性对照组、马兜铃酸(AA,10μg/ml)作用组、Dex(100μmol/L)作用组、AA(10μg/ml)+无水乙醇(100μmol/L)组、AA(10μg/ml)+Dex(100、10、1、0.1、0.01μmol/L)共同作用组,培养细胞48h,应用激光共聚焦显微镜(CFMS)观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)的表达,采用Real-timePCR和WesternBlot方法检测α-SMA、E-cadherin、p-Smad3、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad7mRNA和蛋白的表达。结果 AA作用48h后,CFMS观察发现HKC细胞E-cadherin表达减弱而α-SMA表达增强;地塞米松干预后,E-cadherin表达逐渐增强而α-SMA表达减弱,且呈剂量依赖性。Real-timePCR、WesternBlot结果均显示,与阴性对照组相比,AA组α-SMA、p-Smad3、TGF-β1mRNA和蛋白表达水平均显著增强,E-cadherin、Smad7mRNA和蛋白的表达均减弱(P<0.05)。同AA作用组比较,AA+Dex共同作用组随Dex剂量增加,α-SMA、p-Smad3、TGF-β1mRNA和蛋白的表达逐渐减弱,E-cadherin、Smad7mRNA和蛋白的表达逐渐增强(P<0.05),而无水乙醇却无此作用。结论 Dex可抑制AA诱导HKC细胞发生EMT,并同时下调EMT过程中TGF-β1和p-Smad3的表达、上调Smad7分子的表达,提示TGF-β1/Smad下调可能是Dex抑制EMT发生的机制之一。 展开更多
关键词 地塞米松 肾小管上皮-转化 马兜铃酸 转化生长因子-Β1 SMAD
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miR-138-5p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞间充质转化的影响 被引量:6
5
作者 王晓妮 朱兵 +2 位作者 陈卓玥 张海雄 龙开平 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期64-68,共5页
目的研究miR-138-5p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)的影响。方法将HK-2细胞分为正常组(NG,5mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(HG,30mmol/L D-葡萄糖)、HG+miR-138-5p抑制剂转染组及HG+抑制剂对照转染组。RT-PCR检测高糖处理对miR... 目的研究miR-138-5p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)的影响。方法将HK-2细胞分为正常组(NG,5mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(HG,30mmol/L D-葡萄糖)、HG+miR-138-5p抑制剂转染组及HG+抑制剂对照转染组。RT-PCR检测高糖处理对miR-138-5p表达的影响;Western blot检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、同源盒蛋白A13(HOXA13)、骨形成蛋白7(BMP-7)、转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad7等的表达;荧光素酶活性实验检测miR-138-5p与HOXA13的靶向关系。结果高糖刺激后,miR-138-5p表达升高约1.5倍(P<0.05),α-SMA表达升高1.8倍,而E-cadherin表达下降;高糖促进TGF-β1的表达,抑制HOXA13、BMP-7和Smad7的表达(P<0.05)。miR-138-5p抑制剂转染组α-SMA和E-cadherin的表达均接近NG组,且miR-138-5p抑制剂转染组TGF-β1表达下降约1.1倍,同时HOXA13、BMP-7和Smad7表达升高(P<0.05)。结论抑制MiR-138-5p表达可通过靶向调节HOXA13的表达,提高BMP-7和Smad7水平,抑制TGF-β1信号通路,进而抑制高糖诱导的HK-2细胞EMT的发生。 展开更多
关键词 miR-138-5p 高糖 肾小管上皮细胞转化
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miR-23b过表达对高糖诱导近端肾小管上皮细胞EMT及PI3K-AKT通路的影响 被引量:5
6
作者 胡涛 韩璐 《河北医药》 CAS 2019年第2期190-194,共5页
目的研究过表达miR-23b对高糖诱导近端肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)及PI3K-AKT通路的影响。方法将人近端肾小管上皮细胞HK-2分为4组:正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG)组、miR-23b阴性对照(NC)组和miR-23b过表达(mimic)组,转染48 h后,采用... 目的研究过表达miR-23b对高糖诱导近端肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)及PI3K-AKT通路的影响。方法将人近端肾小管上皮细胞HK-2分为4组:正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG)组、miR-23b阴性对照(NC)组和miR-23b过表达(mimic)组,转染48 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-23bmRNA的表达,光学显微镜观察细胞形态,qRT-PCR检测波形蛋白(VIM)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-CD) mRNA的表达,蛋白免疫印迹(WB)检测VIM、α-SMA、E-CD、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达。结果与NG组比较,HG组中miR-23b表达显著下调,差异有统计学意义(P <0. 05);转染miR-23b mimic后,HK-2细胞中miR-23b表达显著上调(P <0. 05)。与NG组比较,HG组、NC组和mimic组HK-2细胞出现大量纺锤形细胞,细胞中VIM、α-SMA mRNA和蛋白表达显著上调(P <0. 05),E-CDmRNA和蛋白表达显著下调(P <0. 05),PTEN蛋白表达上调(P <0. 05),PI3K、p-Akt蛋白表达下调(P <0. 05);与HG组、NC组比较,mimic组HK-2细胞纺锤形细胞数量明显减少,细胞中VIM、α-SMA mRNA和蛋白表达下调(P <0. 05),E-CD、PI3K mRNA和蛋白表达上调(P <0. 05),PTEN蛋白表达下调(P <0. 05),PI3K、p-Akt蛋白表达上调(P <0. 05)。结论过表达miR-23b抑制高糖诱导近端肾小管上皮细胞间充质转化作用,其机制可能与抑制PI3K-AKT通路激活有关。 展开更多
关键词 miR-23b 高糖 肾小管上皮细胞转化 磷脂酰肌醇3-激酶 丝氨酸/苏氨酸激酶
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LINC00667调控NF-κB信号通路对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的影响 被引量:2
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作者 张彦 金进 +1 位作者 王黎 王玉梅 《中国中西医结合肾病杂志》 2021年第7期575-578,共4页
目的:探讨LINC00667对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)及核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将人肾小管上皮细胞HK-2分为正常对照(NC)组、高糖(HG)组、HG+si-con组、HG+si-LINC00667组、HG+si-LINC00667+PBS组、HG+... 目的:探讨LINC00667对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)及核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将人肾小管上皮细胞HK-2分为正常对照(NC)组、高糖(HG)组、HG+si-con组、HG+si-LINC00667组、HG+si-LINC00667+PBS组、HG+si-LINC00667+TNF-α组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC00667的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测白细胞介素1β(IL-1β)和转化生长因子(TGF-β_(1))含量;蛋白质印记(Western blot)检测钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果:与NC组比较,HG组HK-2细胞LINC00667、Vimentin和α-SMA表达升高,E-cadherin表达降低,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_(1)含量升高,NF-κB信号通路激活(P<0.05)。与HG+si-con组比较,HG+si-LINC00667组HK-2细胞Vimentin和α-SMA表达降低,E-cadherin表达升高,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_(1)含量降低,NF-κB信号通路受到抑制(P<0.05)。与HG+si-LINC00667+PBS组比较,HG+si-LINC00667+TNF-α组HK-2细胞NF-κB信号通路激活,Vimentin和α-SMA表达升高,E-cadherin表达降低,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_(1)含量升高(P<0.05)。结论:沉默LINC00667可抑制高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT,抑制炎症反应,其机制与抑制NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 LINC00667 高糖 肾小管上皮细胞转化 NF-ΚB信号通路
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褐藻多糖硫酸酯对腺嘌呤致大鼠肾间质纤维化的干预作用及其机制探讨 被引量:17
8
作者 刘建春 郑法雷 刘燕萍 《中国中西医结合肾病杂志》 2008年第2期100-103,I0001,共5页
目的:观察褐藻多糖硫酸酯(FPS)对大鼠慢性肾衰竭模型肾间质纤维化的干预作用,并初步探讨其机制。方法:将Wistar雄性大鼠随机分为3组,即:(1)正常对照组(n=15);(2)CRF模型组(n=24),进食含0.75%腺嘌呤的饲料;(3)CRF+FPS治疗组(n=24),在进食... 目的:观察褐藻多糖硫酸酯(FPS)对大鼠慢性肾衰竭模型肾间质纤维化的干预作用,并初步探讨其机制。方法:将Wistar雄性大鼠随机分为3组,即:(1)正常对照组(n=15);(2)CRF模型组(n=24),进食含0.75%腺嘌呤的饲料;(3)CRF+FPS治疗组(n=24),在进食含0.75%腺嘌呤饲料的同时每天给予FPS 200mg.kg-1.d-1灌胃。持续喂养6周。于第2、4、6周末收集大鼠血、尿标本,应用自动分析仪测定血肌酐、白蛋白和24h尿蛋白;并留取肾组织,Masson染色切片分析肾间质纤维化程度,免疫组化方法半定量分析肾组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:CRF+FPS治疗组大鼠24h尿蛋白均明显低于同期CRF模型组(P<0.05),白蛋白水平6周时明显高于CRF模型组(P<0.01),但两组间血肌酐水平无统计学差异(P>0.05)。CRF+FPS治疗组大鼠肾组织Masson染色间质纤维化指数评分也明显低于同期CRF模型组(P<0.01),该肾组织α-SMA蛋白表达2、4、6周均明显低于同期CRF模型组(P<0.05)。结论:FPS治疗可以减少腺嘌呤致肾衰竭大鼠的尿蛋白排泄,减轻肾间质纤维化程度,其机制可能与抑制肾小管上皮细胞-间充质细胞转化有关。 展开更多
关键词 褐藻多糖硫酸酯 慢性肾衰竭 腺嘌呤 肾小管上皮细胞-细胞转化
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肾间质纤维化中西医治疗进展 被引量:16
9
作者 朱青青 李雪玲 钟逸斐 《中医学报》 CAS 2019年第1期54-60,共7页
西医治疗肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)常用免疫抑制剂、血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、维生素D和促红细胞生成素等; MicroRNA调节和靶向药物可抑制肾小管上皮细胞-间充质转化(epithelialmesenchym... 西医治疗肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)常用免疫抑制剂、血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、维生素D和促红细胞生成素等; MicroRNA调节和靶向药物可抑制肾小管上皮细胞-间充质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)起到抗纤维化的作用。中药虫草素、芦丁、大黄素、姜黄素、肾气丸、黄芪汤和黄葵胶囊均有抑制EMT的作用。但目前RIF的诊断缺乏容易定量的新型生物标志物,需要进一步深入机制研究,确立有前景的特异性靶点;肾靶向治疗中抗纤维化通路的有效性也亟待提高,高内涵成像分析系统筛选抗肾纤维化中药化合物并探索其机制亦是研究重点。 展开更多
关键词 纤维化 肌成纤维细胞 肾小管上皮细胞-转化 中西医治疗
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低蛋白饮食加α-酮酸抑制CRF大鼠肾小管上皮间充质转化的作用及机制探讨 被引量:4
10
作者 刘燕萍 郑法雷 刘建春 《北京医学》 CAS 2011年第2期100-105,共6页
目的观察低蛋白饮食(low protein diet,LPD)以及LPD+α-酮酸(α-ketoacid,α-KA)对腺嘌呤致慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠模型肾小管上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)及相关细胞因子表达变化的... 目的观察低蛋白饮食(low protein diet,LPD)以及LPD+α-酮酸(α-ketoacid,α-KA)对腺嘌呤致慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠模型肾小管上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)及相关细胞因子表达变化的影响。方法 46只雄性Wistar大鼠分为对照组(n=10),CRF模型组(n=36)。CRF模型组予150mg/(kg·day)腺嘌呤灌胃,造模成功后随机分入NPD组(n=12)、LPD组(n=12)和LPD+α-KA组(n=12),分别于第10、14周末留取肾组织。免疫组化方法测定肾组织中E-钙粘蛋白(E-cadherin)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板反应蛋白-1(TSP-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,Western blot方法测定VEGF的表达,RT-PCR方法测定TSP-1及VEGF mRNA表达。结果 10周、14周时LPD、LPD+α-KA组E-cadherin表达比NPD组显著增强,LPD+α-KA这一作用更显著。10周时,LPD+α-KA组TGF-β1、TSP-1表达显著低于NPD组,LPD+α-KA组VEGF表达水平比NPD组及LPD组显著增强。结论在本实验条件下,LPD+α-KA及LPD均显示减缓腺嘌呤CRF大鼠肾间质EMT的作用,LPD+α-KA的作用更强。两种限蛋白饮食对CRF模型肾组织EMT的抑制作用可能与其下调TGF-β1、TSP-1的表达及上调VEGF的表达相关,但确切机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 慢性肾衰竭 低蛋白饮食 Α-酮酸 肾小管上皮转化 E-钙粘蛋白 转化生长因子Β1 血小板反应蛋白-1 血管内皮生长因子
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MCP-1诱导的肾小管上皮-间充质细胞转化与整合素连接激酶表达变化的关系 被引量:3
11
作者 赵班 李慧凛 +2 位作者 连耀国 吴华 郑法雷 《北京医学》 CAS 2009年第3期150-154,共5页
目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶(ILK)表达变化的关系。方法体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/mlTGF-β1处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1(0.1... 目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶(ILK)表达变化的关系。方法体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/mlTGF-β1处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1(0.1、1.0、10、100ng/ml)处理细胞,或以同一浓度的MCP-1(1ng/ml)在不同时间点(0h、12h、24h、36h、48h、72h)处理细胞。用半定量RT-PCR方法测定各组HKC细胞α-SMAmRNA的表达,Westernblot方法测定各组HKC细胞α-SMA及ILK表达。在上述实验基础上进一步观察MEK抑制剂(PD98059,10μmol/L),p38MAPK抑制剂(SB203580,5μmol/L)和ROCK抑制剂(Y27632,500μmol/L)对HKC细胞ILK表达的影响。结果MCP-1(0.1、1.0ng/ml)作用后HKC细胞α-SMAmRNA和α-SMA、ILK蛋白表达显著高于阴性对照组(P<0.01),但低于阳性对照组(P<0.01);其中以1.0ng/mlMCP-1组作用后α-SMAmRNA和α-SMA、ILK蛋白表达水平增高更为显著(P<0.001)。1.0ng/mlMCP-1作用后细胞α-SMAmR-NA和α-SMA、ILK蛋白表达在0~48h内逐渐增加,48h达最高峰(P<0.01),72h时呈下降趋势。分别加入阻断剂PD98059、SB203580和Y27632后,HKC细胞ILK蛋白表达水平与MCP-1单独作用无显著性差异(P>0.05)。结论MCP-1可诱导肾小管上皮细胞转分化并呈时间浓度依赖性,该作用可能与MCP-1上调ILK的表达有关;本研究未发现MCP-1上调ILK的信号传导途径与MEK1、p38MAPK、ROCK途径有关。 展开更多
关键词 肾小管上皮-细胞转化 转化生长因子-Β1 Α-平滑肌肌动蛋白 单核细胞趋化因子-1 整合素连接激酶
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褐藻多糖硫酸酯抑制大鼠肾间质纤维化的实验研究 被引量:3
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作者 刘建春 刘燕萍 郑法雷 《北京医学》 CAS 2010年第4期265-269,共5页
目的观察褐藻多糖硫酸酯(FPS)对慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化及肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用,并探讨该作用与肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、血小板反应蛋白1(TSP-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表... 目的观察褐藻多糖硫酸酯(FPS)对慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化及肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用,并探讨该作用与肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、血小板反应蛋白1(TSP-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达变化的关系。方法将6周龄Wistar雄性大鼠随机分为3组,即正常对照组(n=15),进食普通饲料;CRF模型组(n=24),进食含0.75%腺嘌呤的饲料;CRF+FPS组(n=24),进食含0.75%腺嘌呤饲料的同时,每天给予FPS200mg/kg灌胃。分别于第2、4、6周末处死大鼠,留取肾组织。采用免疫组化方法检测肾组织肌动蛋白α(α-SMA)的表达,分别采用免疫组化方法和逆转录酶PCR法(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1、MCP-1、TSP-1及VEGF的蛋白和mRNA表达情况。结果第2、4、6周时CRF+FPS组大鼠肾组织α-SMA蛋白表达均明显低于同期CRF模型组(P<0.05)。CRF+FPS组大鼠肾组织第2、4周时TGF-β1、MCP-1、TSP-1表达明显低于同期CRF模型组(P<0.05),而第2周时TGF-β1、MCP-1、TSP-1的mRNA表达明显低于同期CRF模型组(P<0.05),第4周时MCP-1的mRNA表达明显低于同期CRF模型组(P<0.05)。CRF+FPS组第2、4周时肾组织VEGF蛋白和mRNA表达明显高于同期CRF模型组(P<0.05)。结论FPS对慢性肾衰竭大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化具有抑制作用,该作用与肾组织TGF-β1、MCP-1及TSP-1的表达下调和VEGF表达上调有关,这可能部分解释FPS的肾保护作用机制。 展开更多
关键词 褐藻多糖硫酸酯 慢性肾衰竭 肾小管上皮-细胞转化 转化生长因子-Β1 单核细胞趋化蛋白-1 血小板反应蛋白-1 血管内皮生长因子
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肾小管上皮-间充质细胞转化过程中细胞迁移率的变化 被引量:2
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作者 张秀玲 匡新宇 +1 位作者 钮小玲 黄文彦 《中华实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期1302-1305,共4页
目的 了解肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)过程中肾小管上皮细胞迁移能力的动态变化及对细胞周期的影响.方法 通过体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),转化生长因子(TGF)-β1(5μg/L)诱导肾小管上皮细胞向间充质细胞转化,利用... 目的 了解肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)过程中肾小管上皮细胞迁移能力的动态变化及对细胞周期的影响.方法 通过体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),转化生长因子(TGF)-β1(5μg/L)诱导肾小管上皮细胞向间充质细胞转化,利用Transwell小室法以及采用流式细胞术分别观察EMT过程中细胞迁移能力的动态变化规律和细胞周期变化.结果 1.TGF-β1成功诱导EMT:TGF-β1(5μg/L)干预后,NRK-52E细胞发生形态学改变,表现为细胞排列松散,部分细胞胞体伸长,呈梭形改变;Western blot发现干预后的NRK-52E细胞上皮标志物E-cadherin表达明显下调(P<0.05),间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达增强(P<0.05),且两者均呈时间依赖性变化.2.TGF-β1体外诱导大鼠肾小管上皮细胞EMT过程中,TGF-β1干预后12 h细胞迁移能力明显增强,且随着时间的推移细胞迁移能力增强更为显著(与空白对照组比较,P<0.01).3.EMT过程中,细胞周期S期的比例随时间变化并未发生明显改变(与空白对照组比较,P>0.05).结论 TGF-β1体外诱导NRK-52E发生EMT过程中其细胞迁移能力不断增强,而细胞周期并未发生明显改变. 展开更多
关键词 肾小管上皮-细胞转化 纤维化 慢性肾脏疾病 转化生长因子-Β1 细胞周期
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红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化的抑制作用及其与VEGF和TSP-1表达变化的关系
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作者 赵班 吴华 郑法雷 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2012年第6期22-27,共6页
目的探讨红细胞生成素(EPO)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化的作用,以及这种作用与肾组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管形成抑制因子(TSP-1)表达变化的关系。方法将60只雄性Wistar大鼠分为假手术组(n=20)、... 目的探讨红细胞生成素(EPO)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化的作用,以及这种作用与肾组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管形成抑制因子(TSP-1)表达变化的关系。方法将60只雄性Wistar大鼠分为假手术组(n=20)、UUO对照组(n=20)及EPO治疗组(n=20),分别于手术后第3、7、14、21天处死动物留取肾组织标本。应用免疫组化方法和Western blot方法测定肾组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、VEGF和TSP-1的表达程度。结果手术后第3、7天EPO治疗组较UUO对照组α-SMA表达明显减少(P<0.05),E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。术后第3、7、14天,EPO治疗组TSP-1表达明显低于UUO对照组(P<0.05),而VEGF表达明显高于UUO对照组(P<0.05)。结论 EPO具有抑制UUO模型大鼠早期肾小管上皮-间充质细胞转化作用,该作用可能与EPO下调肾组织TSP-1表达,上调VEGF表达有关。 展开更多
关键词 输尿管梗阻 红细胞生成素 血管内皮生长因子类 凝血酶敏感蛋白类 肾小管上皮-细胞转化
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