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三氯乙烯诱发L-02肝细胞毒的双向电泳分析及质谱鉴定 被引量：13
1
作者 黄海燕 刘建军 +4 位作者 庄志雄 李习艺 徐新云 卫秦芝 杨晓华 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期175-178,共4页
目的分析三氯乙烯对L02肝细胞蛋白质表达的影响。方法利用噻唑蓝比色法和锥虫蓝拒染法,确定三氯乙烯的剂量反应关系,建立L02肝细胞染毒模型,提取细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质组成分,找出三氯乙烯处理后表达有差别的蛋白斑点,用基质辅... 目的分析三氯乙烯对L02肝细胞蛋白质表达的影响。方法利用噻唑蓝比色法和锥虫蓝拒染法,确定三氯乙烯的剂量反应关系,建立L02肝细胞染毒模型,提取细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质组成分,找出三氯乙烯处理后表达有差别的蛋白斑点,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱进行鉴定。结果当三氯乙烯浓度达到30μmol/L时,L02肝细胞增殖抑制率明显升高。选用40μmol/L三氯乙烯染毒的L02肝细胞及其对照细胞进行双向电泳,获得分辨率高、重复性好的电泳图谱。结果表明,三氯乙烯染毒的L02肝细胞蛋白点表达量升高2倍以上的有37个,蛋白点减少至1/2以下的有15个。利用质谱技术对差异蛋白点进行鉴定,肽质量指纹图谱初步鉴定了4个蛋白,肽质量指纹图谱和串联质谱进一步确定了11个蛋白。结论三氯乙烯能引起L02肝细胞蛋白表达改变。 展开更多
关键词 三氯乙烯 L-02 肝细胞毒 双向电泳分析 质谱鉴定 肽质量
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亚洲璃眼蜱唾液腺一新基因(GP_(29))的原核表达及产物鉴定
2
作者 程天印 周金林 +2 位作者 周勇志 施启顺 林矫矫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1194-1197,共4页
将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1,转化BL21,表达出一相对质量为53 ku的蛋白,其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381.7511”肽段序列两方面的结果证明,SDS-PAGE胶板上相对质量为53... 将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1,转化BL21,表达出一相对质量为53 ku的蛋白,其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381.7511”肽段序列两方面的结果证明,SDS-PAGE胶板上相对质量为53 ku的蛋白就是由目的基因表达的GST融合蛋白。该蛋白与SwissPROT库中的任何蛋白均有较大差别,可能是一个新功能分子。 展开更多
关键词 亚洲璃眼蜱 GP29基因 GST-融合蛋白 肽质量 肽序列
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双向电泳和肽质量指纹谱技术鉴定支气管上皮细胞恶性转化相关蛋白质ANX1-human 被引量：21
3
作者 谢玲 应万涛 +4 位作者 张开泰 项小琼 钱小红 王玉芝 吴德昌 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第5期569-573,共5页
采用 2 - D PAGE及质谱技术对α粒子照射诱发人支气管上皮恶性转化细胞的不同阶段进行了比较蛋白组分析与鉴定 .2 - D电泳后在分子量 1 4.4～ 94k D,等电点 3～ 1 0范围内分离出约 1 1 0 0个不同蛋白质斑点 .对等电点约 7,分子量约 40 ... 采用 2 - D PAGE及质谱技术对α粒子照射诱发人支气管上皮恶性转化细胞的不同阶段进行了比较蛋白组分析与鉴定 .2 - D电泳后在分子量 1 4.4～ 94k D,等电点 3～ 1 0范围内分离出约 1 1 0 0个不同蛋白质斑点 .对等电点约 7,分子量约 40 k D的蛋白质点进行了质谱分析 .鉴定出分子量为38.58k D、等电点 6.64的蛋白质 ANX1 - human(脂皮质蛋白 ,lipocortin ) ,并且发现该蛋白质在BEP2 D细胞恶性转化过程的不同时期存在差异表达 .提示蛋白质 ANX1 - human参与了支气管上皮细胞恶性转化过程 ,与细胞恶性转化相关 . 展开更多
关键词 双向电泳 肽质量指纹谱 BEP2D细胞 蛋白质 肺癌
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中药治疗激素性骨坏死的蛋白质组学分析 被引量：17
4
作者 刘建仁 樊粤光 +5 位作者 王海彬 史风雷 熊莉华 何伟 彭宣宪 王三英 《中国中医骨伤科杂志》 CAS 2005年第5期4-10,共7页
目的:用蛋白质组学的研究方法进行激素性骨坏死的病理和中药作用机理的研究,有利于临床治激素性骨坏死。方法:按照常用激素性骨坏死的造模方法,建立大鼠坏死模型,并设立中药治疗组及空白对照组,经过6周处理后经骨形态学检查,确定骨坏死... 目的:用蛋白质组学的研究方法进行激素性骨坏死的病理和中药作用机理的研究,有利于临床治激素性骨坏死。方法:按照常用激素性骨坏死的造模方法,建立大鼠坏死模型,并设立中药治疗组及空白对照组,经过6周处理后经骨形态学检查,确定骨坏死造模成功,处死动物取股骨和肱骨,提取骨组织蛋白质样品,双向电泳分离,得到各组骨组织总蛋白质分子解剖图谱,用图像分析软件,找到各组间差异蛋白质点,进一步行胶内酶切,M AD ITOF/M S质谱分析,得到各差异点的蛋白质肽指纹图谱,结合蛋白质生物信息库(M atrix sc ience L td database),对各蛋白质进行初步鉴定。结论:初步鉴定了3个差异蛋白,分别为阻凝蛋白重链ⅡB、磷脂谷胱甘肽过氧分酶及泛素化酶E 2(MW:17 kd),初步认为这三种蛋白质在激素性骨坏死的发病及中药治疗过程中发挥着重要调控作用。 展开更多
关键词 双向电泳 肽质量指纹谱 基质辅助激光解吸/飞行时间质谱 骨坏死 激素 蛋白质组学 中药 激素性骨坏死 蛋白质组学 中药治疗 学分 中药作用机理 造模方法 形态学检查 蛋白质分子 结合蛋白质
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果梅完全花与不完全花的差异蛋白分析 被引量：18
5
作者 王珊 蔡斌华 +3 位作者 章镇 侯计华 徐军霞 高志红 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 2008年第4期465-468,共4页
应用双向电泳技术对果梅完全花与不完全花的蛋白质组分进行了比较分析。经专业分析软件(PDQuest)对电泳图谱分析表明两者的蛋白分布相似,在完全花中发现了1个特异蛋白、1个上调蛋白、21个下调蛋白,在不完全花中发现2个特异蛋白,这些蛋... 应用双向电泳技术对果梅完全花与不完全花的蛋白质组分进行了比较分析。经专业分析软件(PDQuest)对电泳图谱分析表明两者的蛋白分布相似,在完全花中发现了1个特异蛋白、1个上调蛋白、21个下调蛋白,在不完全花中发现2个特异蛋白,这些蛋白差异点可能与雌蕊的败育有关。应用质谱技术对3个特异点及5个差异大的蛋白点进行分析,得到的肽段数据与蛋白质数据库比对发现其中一个蛋白(28.2kD,pI 4.53)与光敏色素B有关。 展开更多
关键词 果梅 完全花 不完全花 差异蛋白 肽质量指纹谱
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中国对虾主要过敏原的鉴定及理化性质 被引量：18
6
作者 王晓斐 李振兴 +1 位作者 林洪 杜亚楠 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期273-278,共6页
以中国对虾为研究对象,旨在获得有关中国对虾过敏原的基础数据,为水产品中过敏原的控制提供依据。首先利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对中国对虾过敏原组分进行分析,经免疫印迹鉴定其主要过敏原。然后利用高效液相色谱法纯化中国对虾的主要过敏... 以中国对虾为研究对象,旨在获得有关中国对虾过敏原的基础数据,为水产品中过敏原的控制提供依据。首先利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对中国对虾过敏原组分进行分析,经免疫印迹鉴定其主要过敏原。然后利用高效液相色谱法纯化中国对虾的主要过敏原,并用β消去、紫外扫描、肽质量指纹图谱和红外光谱等方法对其理化性质进行研究。表明中国对虾主要过敏原为分子量36ku的糖蛋白,糖含量为4.4%,存在O-型糖肽键,其二级结构主要为α-螺旋,与其他甲壳类过敏原之间存在很高的同源性。 展开更多
关键词 中国对虾 过敏原 鉴定 肽质量指纹图谱
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小鼠肝癌细胞H（22）源exosomes的制备及其免疫相关蛋白的初步研究 被引量：17
7
作者 李静 沈宜 +2 位作者 汤为学 陈黎 段红 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期437-440,共4页
目的 分离提取和电镜观察小鼠肝癌细胞H22分泌的exosomes,并检测其含有的蛋白成分,为exosomes作为肿瘤疫苗提供理论依据。方法 超速分级离心和蔗糖密度梯度离心纯化得到exosomes,并经透射电镜观察鉴定,运用肽质量指纹谱质谱分析和Wester... 目的 分离提取和电镜观察小鼠肝癌细胞H22分泌的exosomes,并检测其含有的蛋白成分,为exosomes作为肿瘤疫苗提供理论依据。方法 超速分级离心和蔗糖密度梯度离心纯化得到exosomes,并经透射电镜观察鉴定,运用肽质量指纹谱质谱分析和Western blot检测exosomes含有的蛋白成分。结果 从小鼠肝癌细胞H22中提取出exosomes,直径约为20-90 nm的膜性囊泡,呈圆形或椭圆形。该exosomes含有热休克蛋白（HSP）70、ICAM-1、延伸因子G2、动力蛋白轻链A、C-myc和Vav-2蛋白。结论 超速分级离心和蔗糖密度梯度离心提取纯化exosomes的方法具有可行性,小鼠肝癌细胞H22源exosomes表达有与抗原呈递相关蛋白（HSP70、ICAM-1）,迁移相关蛋白（动力蛋白轻链A）,粘附相关蛋白（ICAM-1）,细胞骨架相关蛋白（延伸因子G2）,肿瘤相关蛋白（C-myC蛋白、Vav-2蛋白）,具有免疫原性。 展开更多
关键词 癌 肝细胞 肿瘤治疗 肽质量指纹谱 EXOSOMES
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苹果花芽孕育蛋白质组学初步分析 被引量：17
8
作者 曹尚银 张秋明 +3 位作者 朱志勇 郭俊英 陈玉玲 薛华柏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期2281-2288,共8页
【目的】苹果为中国乃至世界最主要果树之一,但由于童期长、其育种工作一直落后于其它作物。本研究旨在揭示苹果花芽分化机理,缩短苹果童期,加速苹果育种进程。【方法】运用蛋白质组学研究技术(双向电泳技术、生物质谱技术、生物信息学... 【目的】苹果为中国乃至世界最主要果树之一,但由于童期长、其育种工作一直落后于其它作物。本研究旨在揭示苹果花芽分化机理,缩短苹果童期,加速苹果育种进程。【方法】运用蛋白质组学研究技术(双向电泳技术、生物质谱技术、生物信息学技术)对富士苹果树短枝停长后3～9周的花芽、叶芽进行蛋白质分析研究。【结果】短枝停长后第7周花芽形态分化开始,第7周花芽较叶芽的2-DE图谱有283个蛋白点在表达上有明显的质和量的变化。4个蛋白点(16.4、30.2、40.3、65.1kD)为花芽形态分化开始时初前(花序原始体出现)花芽2-DE图谱所特有;3个蛋白点(39.3、60.2、66.3kD)为初后(侧花出现)花芽2-DE图谱所特有,1个蛋白点(77.1kD)为萼片期花芽2-DE图谱所特有。对富士苹果花芽形态分化开始时的4个特异蛋白点用基质辅助激光解吸P电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)进行肽质量指纹谱分析,并通过检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测,初步认为第256号(16.4kD)、298号(30.2kD)蛋白点是未知蛋白,第327号(40.3kD)蛋白点是与合成酶有关的蛋白,第367号蛋白点(65.1kD)是一个与转录有关的RNA结合蛋白。【结论】富士苹果花芽形态分化开始时有16.4、30.2、40.3、65.1kD4个特异蛋白、侧花出现时有39.3、60.2、66.3kD3个特异蛋白、萼片出现时有77.1kD1个特异蛋白出现。16.4、30.2kD是未知蛋白,40.3kD是与合成酶有关的蛋白,65.1kD是一个与转录有关的RNA结合蛋白。 展开更多
关键词 苹果 花芽 蛋白质组学 特异蛋白 双向电泳 肽质量指纹谱
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小鼠小肠上皮细胞经γ射线照射后蛋白质组差异分析 被引量：13
9
作者 章波 粟永萍 +5 位作者 刘晓宏 艾国平 冉新泽 魏永江 王军平 程天民 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期234-237,共4页
目的　分析γ射线照射后 ,在辐射损伤期和修复期小鼠肠上皮细胞蛋白质组的改变 ,以探讨肠上皮细胞损伤与修复的分子机理。方法　采用 9Gy全身照射BALB c小鼠 ,分别于照射后3h和 72h取小肠制备卷肠切片 ,染色并观察小肠形态。分离未照射... 目的　分析γ射线照射后 ,在辐射损伤期和修复期小鼠肠上皮细胞蛋白质组的改变 ,以探讨肠上皮细胞损伤与修复的分子机理。方法　采用 9Gy全身照射BALB c小鼠 ,分别于照射后3h和 72h取小肠制备卷肠切片 ,染色并观察小肠形态。分离未照射小鼠及照射后 3h和 72h小鼠的肠上皮细胞 ,制备蛋白样品 ,采用双向电泳技术分离样品 ,PDQuest软件处理双向电泳图谱 ;并对差异的蛋白质点进行肽质量指纹分析。结果　小鼠肠上皮在照射后 3h以损伤性改变为主 ,72h后出现明显再生修复。采用双向电泳技术在正常对照组、照射后 3h组以及照射后 72h组分别检测到(6 38± 39)、(5 6 6± 32 )和 (5 91± 2 9)个蛋白质点。对其中 2 8个差异蛋白质点进行了肽质量指纹分析 ,经数据库检索 ,初步鉴定为一些与代谢、过氧化应急、信号转导相关的蛋白质。结论　电离辐射能诱导小鼠肠上皮细胞蛋白表达的改变 ,双向电泳技术对从整体方面揭示辐射损伤的分子机理有重要价值。 展开更多
关键词 小鼠 小肠 上皮细胞 Γ射线照射 蛋白质组 差异 分析 双向电泳 肽质量指纹谱
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改进的质谱兼容的胶内酶切方法 被引量：14
10
作者 王鸿丽 刘炳玉 +4 位作者 谷苗 刘锋 吴胜明 张学敏 魏开华 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第2期168-172,共5页
目的:改善胶内酶切的肽段回收率,提高蛋白质的有效鉴定率。方法:将改进的胶内酶切“四步提取法”,应用到96个双向电泳蛋白质斑点分析。结果:该方法提高了胶内蛋白质酶切肽段的回收率,改善了质谱图谱的质量。蛋白质的有效鉴定率达89.6%,... 目的:改善胶内酶切的肽段回收率,提高蛋白质的有效鉴定率。方法:将改进的胶内酶切“四步提取法”,应用到96个双向电泳蛋白质斑点分析。结果:该方法提高了胶内蛋白质酶切肽段的回收率,改善了质谱图谱的质量。蛋白质的有效鉴定率达89.6%,其中,数据库检索得分80分以上者达82%。另外,证实了酶解原液直接用于质谱分析可获得较好信噪比的谱图。结论:应用“四步提取法”使得酶解肽段提取率和蛋白质的有效鉴定率明显提高。 展开更多
关键词 胶内酶切 四步提取法 肽质量指纹图谱 蛋白质组学 光谱分析 质量 内肽酶类
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天麻蛋白质的双向电泳和肽质量指纹谱分析与鉴定 被引量：12
11
作者 张晓勤 胡金勇 +1 位作者 曾英 刘小烛 《云南植物研究》 CSCD 北大核心 2004年第1期89-95,共7页
采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱技术对天麻染菌球茎皮层和不染菌的新生球茎皮层进行了比较蛋白质组分析与鉴定。双向电泳后在分子量 1 2～97kD、等电点 3～ 1 0范围内 ,每块胶分离到约 90 0个蛋白质点。对新生球茎中表达量明显增加... 采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱技术对天麻染菌球茎皮层和不染菌的新生球茎皮层进行了比较蛋白质组分析与鉴定。双向电泳后在分子量 1 2～97kD、等电点 3～ 1 0范围内 ,每块胶分离到约 90 0个蛋白质点。对新生球茎中表达量明显增加的 5个蛋白质点用基质辅助激光解吸 电离飞行时间质谱 (MALDI TOFMS)进行肽质量指纹谱的分析 ,并通过检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测 ,初步认为第 4号蛋白点是一个与转录有关的RNA结合蛋白。同时本文在天麻蛋白质组样品制备、数据库检索策略以及蛋白质鉴定成功率等方面进行了探讨。 展开更多
关键词 天麻 蛋白质组 双向电泳 肽质量指纹谱 兰科
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一种适用于质谱分析的简化胶内酶解方法 被引量：13
12
作者 王旭初 范鹏祥 李银心 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期449-455,共7页
在常规方法的基础上,设计了一种适于质谱分析的简化胶内酶解方法。改进的步骤包括:(1)通过加大洗涤所用超纯水量、延长涡混时间来强化凝胶洗涤的环节;(2)加入酸化处理来提高胰蛋白酶的活性;(3)在预酶解时不加CaCl_2,减少了酶的自切作用;... 在常规方法的基础上,设计了一种适于质谱分析的简化胶内酶解方法。改进的步骤包括:(1)通过加大洗涤所用超纯水量、延长涡混时间来强化凝胶洗涤的环节;(2)加入酸化处理来提高胰蛋白酶的活性;(3)在预酶解时不加CaCl_2,减少了酶的自切作用;(4)省略了蛋白质样品脱盐、脱SDS的步骤;(5)直接吸取酶解液进行质谱分析。系统比较该简化酶解法和最新报道的一种酶解方法的质谱鉴定效果,简化法能有效减少酶解后肽段的损失,增加质谱数据库搜索的信息量,得到更可靠的蛋白质鉴定结果。 展开更多
关键词 蛋白质组 胶内酶解方法 双向电泳 肽质量指纹图谱 质谱分析
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顺铂作用卵巢癌细胞株的蛋白质组学研究 被引量：8
13
作者 李征宇 赵霞 +1 位作者 杨金亮 魏于全 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2005年第3期254-261,共8页
应用蛋白质组学技术观察顺铂作用于人卵巢癌SKOV3细胞株后蛋白质分子的表达差异, 探讨蛋白质组学方法在化疗药物抗肿瘤作用机制研究方面的应用. 用顺铂(6 mg/mL)作用人卵巢癌SKOV3细胞6 h, 分别收集实验组与对照组细胞, 裂解并提取细胞... 应用蛋白质组学技术观察顺铂作用于人卵巢癌SKOV3细胞株后蛋白质分子的表达差异, 探讨蛋白质组学方法在化疗药物抗肿瘤作用机制研究方面的应用. 用顺铂(6 mg/mL)作用人卵巢癌SKOV3细胞6 h, 分别收集实验组与对照组细胞, 裂解并提取细胞内总蛋白; 以固相IPG胶条(17 cm, pH4～7)为载体, 进行第一向等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳, 得到实验组与对照组双向电泳凝胶图; 经考马斯亮蓝染色后, 在PDQuest软件的辅助下进行实验组与对照组蛋白质表达的比较, 选择并切取明显差异点共11个, 经肽质量指纹谱(PMF)和串级质谱(MS/MS)分析, 检测出差异点中包含的主要蛋白. 通过质谱分析显示, 顺铂处理后表达明显上调的有原肌球蛋白家族、肌动蛋白家族、热休克蛋白60(HSP60)、磷酸丙糖异构酶(TIM)家族等; 表达下调的有烯醇酶家族等. 这几类蛋白质多参与细胞内能量代谢、细胞形态维持、细胞转化凋亡等生理过程, 提示顺铂的抗肿瘤机制可能与此有关. 展开更多
关键词 蛋白质组学 卵巢癌 细胞株 顺铂 考马斯亮蓝染色 PAGE电泳 肽质量指纹谱 蛋白质分子 抗肿瘤作用 蛋白质表达 原肌球蛋白 热休克蛋白 表达差异 机制研究 化疗药物 等电聚焦 双向电泳 质谱分析 肌动蛋白 磷酸丙糖 能量代谢
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应用双向电泳和质谱技术筛选口腔扁平苔藓差异蛋白 被引量：13
14
作者 王文梅 蒋文晖 +1 位作者 胡勤刚 郑春兰 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期120-123,共4页
目的:筛选口腔扁平苔藓及正常黏膜组织的差异表达蛋白,为口腔扁平苔藓的发病机制及诊断治疗的研究提供实验室依据。方法:收集口腔扁平苔藓组织及正常口腔黏膜组织,提取组织蛋白,蛋白定量,进行双向电泳,图象分析寻找差异点,基质辅助激光... 目的:筛选口腔扁平苔藓及正常黏膜组织的差异表达蛋白,为口腔扁平苔藓的发病机制及诊断治疗的研究提供实验室依据。方法:收集口腔扁平苔藓组织及正常口腔黏膜组织,提取组织蛋白,蛋白定量,进行双向电泳,图象分析寻找差异点,基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定表达差异量较大的蛋白质点,确定所分析的蛋白质类型和功能。结果:(1)人口腔扁平苔藓及正常黏膜组织的双向电泳图谱的平均蛋白质点数分别为1576±67和1608±73,同一组织凝胶在蛋白质点位置上重复性较好。(2)通过比较人口腔扁平苔藓与正常黏膜组织的双向凝胶电泳图谱,得到差异表达蛋白质点数为13个,其中7个点在口腔扁平苔藓中为高表达,6个点在口腔扁平苔藓中为低表达。选择10个表达差异量较大的蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定了其中的4个点,包括有锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD),膜联蛋白I,波形蛋白,未知蛋白等。结论:锰超氧化物歧化酶,膜联蛋白I,波形蛋白,未知蛋白可能参与了口腔扁平苔藓的发生和发展,其相关机制尚待进一步阐明。双向电泳-质谱分析技术为口腔扁平苔藓发生发展过程中差异表达蛋白的研究提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 口腔 扁平苔藓 双向凝胶电泳 蛋白质组 肽质量指纹图谱 锰超氧化物歧化酶 膜联蛋白I 波形蛋白 未知蛋白
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液相色谱/电喷雾质谱(LC/ESI/MS)在蛋白质分析鉴定中的应用 被引量：1
15
作者 郭寅龙 刘晗青 余翀天 《分析测试技术与仪器》 CAS 2001年第3期129-133,共5页
对液相色谱 /电喷雾质谱 (LC/ESI/MS)在蛋白质分子量测定、一级结构的分析、蛋白质和多肽纯度的鉴定、肽质量酶谱、蛋白质分子内二硫键的定量和定位、磷酰化位置的测定以及在蛋白质组中的应用等方面进行了综述和讨论 .
关键词 液相色谱 电喷雾质谱 肽质量指纹图谱法 分子内二硫键 分析 鉴定 糖基化位置 磷酸化位置 蛋白质
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氧化苦参碱脂质体对大鼠肝星状细胞作用的差异蛋白电泳分析 被引量：12
16
作者 柴宁莉 常青 +2 位作者 徐世平 万军 吴本俨 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期679-685,共7页
目的应用比较蛋白质组学的方法分析氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)脂质体作用于体外培养的肝纤维化大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)后,其蛋白表达的差异,以进一步阐明OMT脂质体对肝纤维化治疗作用的分子机制。方法建立四氯化... 目的应用比较蛋白质组学的方法分析氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)脂质体作用于体外培养的肝纤维化大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)后,其蛋白表达的差异,以进一步阐明OMT脂质体对肝纤维化治疗作用的分子机制。方法建立四氯化碳(CCl4)致慢性肝损伤纤维化的大鼠研究模型,灌流法分离获得大鼠HSCs,将P2代细胞分为A(模型组)、B(OMT脂质体处理组)、C(脂质体对照组)3组进行实验,以正常大鼠来源的HSCs作为正常对照组,作用7天后,分别提取实验组和正常对照组细胞的总蛋白质,进行等电聚焦双向电泳,建立应用OMT脂质体作用前后HSCs双向电泳差异表达谱;选取两个差异最明显的蛋白点,经肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting,PMF)测定,确定差异蛋白结构和功能。结果 (1)总蛋白质点在OMT脂质体作用前后有所减少,分别为864和756个,匹配率为63%;(2)局部区域图像进行放大可得10种蛋白质在正常对照组和实验组之间具有表达差异;(3)经PMF分析和SWISS-PROT蛋白数据库检索可获得两个差异最显著蛋白点为分子量46.236kD的ATM和54.051kD的Miz1。结论 OMT脂质体作用于HSCs会造成其蛋白质表达的差异性,可能参与诱导其凋亡的信号途径。 展开更多
关键词 氧化苦参碱脂质体 肝星状细胞 双向电泳 肽质量指纹图谱分析
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一种基于肽质量指纹谱技术鉴定蓖麻毒素的新方法 被引量：9
17
作者 闫妍 张淑珍 +3 位作者 唐吉军 顾明松 冯建林 谢剑炜 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第2期187-190,共4页
应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TOF/MS)法实现了对蓖麻毒素(R ic in)的鉴定。测定蓖麻毒素的分子量为62925Da,实现了蓖麻粗毒的凝胶电泳分离,并通过胶内酶切获得了蓖麻毒素的肽质量指纹谱(PMF);经过数据库检索,在输入检... 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TOF/MS)法实现了对蓖麻毒素(R ic in)的鉴定。测定蓖麻毒素的分子量为62925Da,实现了蓖麻粗毒的凝胶电泳分离,并通过胶内酶切获得了蓖麻毒素的肽质量指纹谱(PMF);经过数据库检索,在输入检索的22条肽段中有17条获得了匹配。检索结果显示,利用生物质谱技术是鉴定蓖麻毒素的最有效的新方法之一。 展开更多
关键词 蓖麻毒素 肽质量指纹谱 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 生物质谱
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热胁迫下月季叶片蛋白双向电泳分析 被引量：10
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作者 姜蕊 胡永红 +3 位作者 蒋昌华 赵宏伟 胡尚连 明凤 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期91-94,90,共5页
采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和肽质量指纹谱,对耐热性不同的月季品种热激处理后进行蛋白质组分析与鉴定。双向电泳后,差异蛋白质点主要集中在分子量10-30kDa、等电点5-6范围内, 对耐热品种在高温下特异表达的蛋白质点中选取3个进行肽质... 采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和肽质量指纹谱,对耐热性不同的月季品种热激处理后进行蛋白质组分析与鉴定。双向电泳后,差异蛋白质点主要集中在分子量10-30kDa、等电点5-6范围内, 对耐热品种在高温下特异表达的蛋白质点中选取3个进行肽质量指纹谱的分析,并检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测,初步认为这些蛋白质点分别是eIF-5A、LEA蛋白和Hsp17．5。同时结合已报道其他植物中这3种蛋白的功能,对月季耐高温生理机制进行初步探讨。 展开更多
关键词 月季 热胁迫双向聚丙烯酰胺凝胶电泳肽质量指纹谱
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基质辅助激光解吸附电离-飞行时间串联质谱研究重组人促红细胞生成素一级结构 被引量：9
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作者 卢庄 王杉 +7 位作者 代景泉 王京兰 张养军 应万涛 徐友宣 钱小红 吴侔天 蔡耘 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期591-597,共7页
建立了生物质谱研究rhEPO一级结构的系列方法,包括分子量、唾液酸含量以及N-糖含量等糖基化性质的测定方法,并用于4种国产rhEPO样品的分析;在此基础上优化酶切条件,使测定的肽质量指纹谱(PMF)的覆盖率均达到98%,成功鉴定了4个样品中的全... 建立了生物质谱研究rhEPO一级结构的系列方法,包括分子量、唾液酸含量以及N-糖含量等糖基化性质的测定方法,并用于4种国产rhEPO样品的分析;在此基础上优化酶切条件,使测定的肽质量指纹谱(PMF)的覆盖率均达到98%,成功鉴定了4个样品中的全部N-糖基化位点以及对分子中两对二硫键进行了结构确证,测定4个样品分子量分别为27754.1±27.4Da、27941.4±23.2Da、27682.5±22.0Da和27914.7±22.5Da;唾液酸含量分别为5.0%、4.8%、5.6%和5.4%;糖含量分别为34.3%、34.7%、34.1%和34·6%。此外还对4种产品在O-连接糖型及N-连接糖型上的区别做了初步探讨。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸附电离-飞行时间串联质谱 重组人促红细胞生成素 肽质量指纹谱 二硫键 N-连接糖基化位点 糖型结构
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乙酰唑胺对大鼠肾脏近曲小管上皮细胞作用的差异蛋白分析及其与AQP1抑制的关系 被引量：7
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作者 母生梅 暨荀鹤 +2 位作者 马兵 于和鸣 李学军 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期169-172,共4页
目的　研究乙酰唑胺抑制大鼠肾脏近曲小管上皮细胞水孔蛋白 1(aquaporin 1,AQP1)表达的内源性机制。方法　将原代培养的大鼠肾脏近曲小管上皮细胞分为两组 ,一组给予 1× 10 - 5mol·L- 1 乙酰唑胺 ,另一组为阴性对照。待细胞... 目的　研究乙酰唑胺抑制大鼠肾脏近曲小管上皮细胞水孔蛋白 1(aquaporin 1,AQP1)表达的内源性机制。方法　将原代培养的大鼠肾脏近曲小管上皮细胞分为两组 ,一组给予 1× 10 - 5mol·L- 1 乙酰唑胺 ,另一组为阴性对照。待细胞长至亚融合状态时裂解细胞 ,用等电聚焦电泳对裂解物进行差异蛋白筛选 ,并对差异蛋白作肽质量指纹谱鉴定。结果　给乙酰唑胺后细胞中出现两个差异蛋白 ,其中等电点 (pI)为 3 8的蛋白给药后的表达减少 ,数据库检索发现其氨基酸序列与来源于大鼠肝脏和睾丸的刷状缘肌球蛋白有 2 1 4 %的相似性 ;而与来源于大鼠脑的糖原磷酸化酶有 2 7%相似性。另外一条pI为 5 5的蛋白被诱导增多 ,它与来源于大鼠肺脏的α亚型磷脂酰肌醇转移蛋白的相似性为 2 0 %。结论　乙酰唑胺可能通过影响pI 3 8蛋白或pI5 展开更多
关键词 乙酰唑胺 水孔蛋白 肾脏近曲小管上皮细胞 肽质量指纹谱
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