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固定化酶纳升微反应器用于痕量蛋白质快速肽谱分析的研究 被引量：6
1
作者 郭忠 张清春 +3 位作者 雷政登 孔亮 毛希琴 邹汉法 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第7期1277-1280,共4页
利用毛细管作为酶固定化的载体 ,将酶直接键合到毛细管内壁 ,制成毛细管纳升反应器 ,结合质谱分析水解产物 ,获得了蛋白质的肽谱 .实验发现 ,以毛细管为反应器后 ,蛋白质肽谱分析所需量大大减少 ,只需 1 0 - 1 3mol,甚至几个 1 0 - 1
关键词 固定化酶 纳升微反应器 蛋白质 纳升反应器 肽谱分析 痕量分析 毛细管微柱
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pH-区带精制逆流色谱分离高F值寡肽新技术研究 被引量：6
2
作者 秦秋香 魏东 郭祀远 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2008年第5期866-869,883,共5页
高F值寡肽是一种由2～8个氨基酸组成的生理活性肽。本研究采用胃蛋白酶和O／一胰凝乳蛋白酶对草鱼蛋白进行了两步酶解，高效液相色谱对酶解液进行了肽谱分析，以制备改善肝性脑病的高F值寡肽。结果表明，草鱼蛋白酶解液中含有高支低芳... 高F值寡肽是一种由2～8个氨基酸组成的生理活性肽。本研究采用胃蛋白酶和O／一胰凝乳蛋白酶对草鱼蛋白进行了两步酶解，高效液相色谱对酶解液进行了肽谱分析，以制备改善肝性脑病的高F值寡肽。结果表明，草鱼蛋白酶解液中含有高支低芳氨基酸的寡肽组分，开发一种pH一区带精制逆流色谱分离新技术，所用体系为甲基叔丁基醚：正丁醇：乙腈：水（2：2：1：5，V／V／V／V），上相中加入20mM三乙胺和20％磷酸二（2-乙基己基）酯（DEHPA）作为固定相，下相分两部分，分别加入10mM HCl和20m MHCl作为流动相，进行梯度洗脱。成功地对酶解液中的混合组分进行了分离，得到了5个高F值（F〉20）的分离组分，估测其F值（F=OD214nm／OD280nm）高达24．7—36．4。该结果为利用低值鱼蛋白酶解制备功能性活性肽提供了新的制备方法。 展开更多
关键词 高F值寡肽 酶解 pH-区带精制逆流色谱 肽谱分析
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溶胶凝胶膜包埋的胰蛋白酶用于高通量蛋白质肽谱分析 被引量：3
3
作者 栾明明 邬建敏 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1707-1710,共4页
采用溶胶凝胶包埋法在96孔板中固定胰蛋白酶,制备高通量的酶解反应器。考察了四乙氧基硅烷(TEOS)与甲基三甲氧基硅烷(MTMS)的不同比例对凝胶膜的成胶速度、机械强度、透明度、固定酶的活性及稳定性的影响。以牛血清白蛋白(BSA)为目标蛋... 采用溶胶凝胶包埋法在96孔板中固定胰蛋白酶,制备高通量的酶解反应器。考察了四乙氧基硅烷(TEOS)与甲基三甲氧基硅烷(MTMS)的不同比例对凝胶膜的成胶速度、机械强度、透明度、固定酶的活性及稳定性的影响。以牛血清白蛋白(BSA)为目标蛋白,比较了溶胶凝胶固定化酶与溶液态酶的稳定性和催化活性,用HPLC对BSA的酶解产物进行了肽谱分析,比较了二者的酶解效率。结果表明,TEOS与MTMS比例为1∶1时,凝胶膜有很好的成胶速度、机械强度、透明度;包埋态酶有很高的活性和稳定性。HPLC对肽段的分析结果表明,固定化酶的酶解效率优于溶液态酶。 展开更多
关键词 溶胶凝胶 固定化胰蛋白酶 蛋白质酶解 肽谱分析
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pH值敏感相分离特性的蛋白质酶解试剂研究 被引量：1
4
作者 吴蓓蓓 商云岭 邬建敏 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第1期12-16,共5页
通过DEC/NHS偶联反应将胰蛋白酶(Trypsin)连接到具有pH值敏感性的壳聚糖(CS)链上。Trypsin-CS偶联物保留了CS的pH值敏感相分离特性及Trypsin的酶催化活性。浊度滴定实验表明,此偶联物的临界相分离pH值(CPSP)仍保持在偏中性范围内,并且... 通过DEC/NHS偶联反应将胰蛋白酶(Trypsin)连接到具有pH值敏感性的壳聚糖(CS)链上。Trypsin-CS偶联物保留了CS的pH值敏感相分离特性及Trypsin的酶催化活性。浊度滴定实验表明,此偶联物的临界相分离pH值(CPSP)仍保持在偏中性范围内,并且随CS的分子量降低而略有上升。这种偏中性的CPSP值有利于相分离循环过程中保持酶的催化活性。分子量为8×104的CS与Trypsin的偶联物在存放30d后可保留69%的初始酶活性。偶联物经过6次循环使用后的残余活性为初始活性的79%。Trypsin-CS偶联物可在低于CPSP值的条件下对蛋白质进行均相酶解,并在高于CPSP值时从催化体系中分离出来。HPLC肽谱分析表明,Trypsin-CS偶联物中Trypsin的自降解被显著抑制,因而有效消除了Trypsin自降解肽段对肽谱分析的干扰。 展开更多
关键词 pH值敏感高分子 胰蛋白酶 偶联 酶活性 肽谱分析
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重组DNA技术产品肽谱分析的进展
5
作者 杨海丽 曲德利 王建华 《黑龙江医药》 CAS 1997年第3期170-171,共2页
近年来,由于重组 DNA 技术产品的迅速发展,世界卫生组织(WHO)对这类产品已提出了严格的要求。随着我国新的生物工程产品不断涌现,我国卫生部也制定了“人用重组 DNA 制品质量控制要点。新的重组 DNA
关键词 重组DNA 肽谱分析 生物制品 鉴定
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蚯蚓中平喘蛋白组分的提取分离及其作用机制的初探 被引量：13
6
作者 王茵 徐德生 +2 位作者 冯怡 房泽海 谢强敏 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期189-193,共5页
目的初步研究蚯蚓平喘蛋白组分(Eisenia foetidaprotein,EP2)及其平喘活性。方法以新鲜赤子爱胜蚓为原料,通过蛋白质的硫酸铵沉淀和离子交换色谱法,分离得到一组平喘活性蛋白成分(EP2)。采用经典的肺阻力(RL)和动态肺顺应性(Cdyn)指标评... 目的初步研究蚯蚓平喘蛋白组分(Eisenia foetidaprotein,EP2)及其平喘活性。方法以新鲜赤子爱胜蚓为原料,通过蛋白质的硫酸铵沉淀和离子交换色谱法,分离得到一组平喘活性蛋白成分(EP2)。采用经典的肺阻力(RL)和动态肺顺应性(Cdyn)指标评价EP2对致敏豚鼠抗原攻击前后的肺功能变化;采用体外试验观察EP2拮抗白三烯D4引起豚鼠离体气管平滑肌的收缩反应;同时应用双向凝胶电泳-质谱技术对蛋白组分EP2进行了初步分析鉴定。结果在整体试验中,EP216.8mg.kg-1口含吞服预处理能明显抑制致敏豚鼠抗原攻击后引起的RL增加和Cdyn下降,作用稍弱于阳性对照药孟鲁司特;在离体试验中,EP2能明显拮抗白三烯D4收缩气管平滑肌的作用,作用强度与孟鲁司特接近;双向凝胶电泳-质谱技术分析证明蛋白组分EP2中含有蚯蚓种属中的蛋白F-I-0、F-I-1以及纤溶酶组分A,均为丝氨酸蛋白酶类胰蛋白酶家族成员。结论EP2具有平喘作用,作用靶点可能通过拮抗白三烯受体,提示EP2的有效成分可能是白三烯拮抗剂。 展开更多
关键词 平喘蛋白组分 提取分离 平喘活性 双向电泳 肽指纹图谱分析
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亲和层析结合生物质谱技术分析鉴定猕猴血清中的重组人内皮抑制素 被引量：6
7
作者 刘尚义 刘秀文 +6 位作者 蔡耘 宋海峰 应万涛 朱宝珍 李蕾 汤仲明 钱小红 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第3期277-282,共6页
建立了将固相亲和层析与生物质谱技术相结合 ,分离提取鉴定给药猕猴血清中含有 6×His序列的重组人内皮抑制素的方法。用固相免疫亲和层析和金属螯合层析两种方法分别提取并富集血清中的重组药物 ,采用基质辅助激光解吸 电离飞行时... 建立了将固相亲和层析与生物质谱技术相结合 ,分离提取鉴定给药猕猴血清中含有 6×His序列的重组人内皮抑制素的方法。用固相免疫亲和层析和金属螯合层析两种方法分别提取并富集血清中的重组药物 ,采用基质辅助激光解吸 电离飞行时间质谱的直接分析和肽质量指纹谱分析与数据库检索 ,分别对两种亲和提取方法得到的药物蛋白前体collagenXVIII[Homosapiens](IDofSWISS -PROT TrEMBL :Q8WXI5 ) 展开更多
关键词 分析 鉴定 猕猴 血清 人内皮抑制素 亲和层析 生物质谱 肽质量指纹谱分析 蛋白质药物 代谢 基因重组 分析
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抗日本血吸虫生殖抗原SIEA 26-28ku组分的质谱分析 被引量：3
8
作者 汪世平 刘立鹏 +4 位作者 钟飞 徐绍锐 彭先楚 李文凯 何卓 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第10期745-748,769,共5页
目的筛选确定抗日本血吸虫生殖功能抗原SIEA26-28 ku的编码基因。方法采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA),选择SIEA 26-28 ku免疫血清识别信号较强的SIEA-2D蛋白质斑点(65～73号)采样,消化处理后进行质... 目的筛选确定抗日本血吸虫生殖功能抗原SIEA26-28 ku的编码基因。方法采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA),选择SIEA 26-28 ku免疫血清识别信号较强的SIEA-2D蛋白质斑点(65～73号)采样,消化处理后进行质谱与生物学信息分析。结果从SIEA-2D图谱上共获得1037个蛋白质斑点;通过MALDI-TOF-MS对其进行肽指纹图谱分析后获得了7张肽指纹图谱。通过PeptIdent软件检索SWISS-PROT数据库,发现有意义的血吸虫同源蛋白质11个,这些同源蛋白质部分与细胞代谢或蛋白质合成代谢相关,部分与核苷酸代谢有关,其中编号为SIEA-2D66为日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT),SIEA-2D71为琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SDISP),SIEA-2D73为谷胱甘肽-S-转移酶(GST),其同源程度分别为37.2%、18.7%和22.9%。结论初步获得与抗日本血吸虫生殖功能抗原SIEAn 26～28 ku相关的编码基因HGPRT、SDISP和GST。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 未成熟卵可溶性抗原 SIEA 26-28 ku分子 肽指纹图谱分析
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