液质联用(LC／MS)技术在单克隆抗体(曲妥珠单抗)结构表征上的应用 被引量：13

1

作者 Henry Shion Asish Chakraborty +5 位作者 YU Ying-qing 陈熙 孙庆龙 Scott Berger CHEN Wei-bin 宋兰坤 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期418-426,431,共10页

目的:应用LC/MS(液质联用)和LC/MSE方法(液相色谱/非数据依赖二级质谱数据采集方法,等频率切换高与低碰撞能量进行质谱数据扫描)对单克隆抗体(曲妥珠单抗,人源化单克隆免疫球蛋白IgG1)的结构进行深度表征。方法:先用LC/MS对曲妥珠单抗... 目的:应用LC/MS(液质联用)和LC/MSE方法(液相色谱/非数据依赖二级质谱数据采集方法,等频率切换高与低碰撞能量进行质谱数据扫描)对单克隆抗体(曲妥珠单抗,人源化单克隆免疫球蛋白IgG1)的结构进行深度表征。方法:先用LC/MS对曲妥珠单抗完整蛋白及其亚基(轻链和重链)的相对分子质量进行测定;然后用多种酶(胰蛋白酶和AspN)酶解蛋白并用LC/MSE肽图分析法对曲妥珠单抗的氨基酸全序列进行解析和确定,同时对可能发生的翻译后修饰(PTMs)进行定性和定量分析。再通过PNGase F酶来释放抗体上的糖链并应用LC/FLR/MS(液相色谱荧光检测与质谱联用)方法对其糖基化修饰进行结构分析及确认。结果:对曲妥珠单抗的完整蛋白及其亚基(轻链和重链)的相对分子质量测定得到良好的质量准确度,由此可判定特定蛋白修饰在轻链和重链上的分布。通过对曲妥珠单抗酶解后的氨基酸全序列确认,可对其翻译后修饰以及可能的错误氨基酸序列进行解析。该抗体肽图分析的氨基酸序列覆盖率是100%。糖基化分析是通过对游离的N-链接寡糖进行2-AB荧光标记后再用LC/FLR/MS(液相色谱荧光检测与质谱联用)方法来进行的。联合使用这些分析方法,能够有效地对不同批号和不同工艺的抗体药物进行常规质量检测和深度表征,控制药物质量,为患者提供安全可靠的生物治疗药品。结论:结合液质联用(LC/MS和LC/MSE)技术,通过完整蛋白相对分子质量的测量,肽图分析测定氨基酸序列以及翻译后修饰的定性和定量分析,结合游离N-链接寡糖的分析表征,对单克隆抗体曲妥珠单抗进行了全面的结构表征,并建立了一套单克隆抗体结构表征的平台化方案。 展开更多

关键词 曲妥珠单抗 单克隆抗体 序列变异 翻译后修饰 PTMS N-链接糖基化 寡糖 微观非均质特征 单克隆抗体表征 完整蛋白相对分子质量测量 肽图谱 肽图 序列覆盖率 糖链分析 2-AB标记 UPLC QTof MS LC MS LC MS E BiopharmaLynx 液相色谱荧光检测与质谱联用

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重组L-天门冬酰胺酶II的液相色谱/电喷雾离子化质谱法分析 被引量：9

2

作者 韩俊 盛龙生 +2 位作者 杨仲元 相秉仁 安登魁 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期46-50,共5页

目的　对基因重组L 天门冬酰胺酶II产品进行一级结构分析。方法　采用流动注射方式 ,电喷雾离子化质谱法测定分子量 ;三氯乙酸变性 ,胰蛋白酶水解后 ,HPLC测定肽图谱 ;结合质谱源内碰撞诱导解离技术 ,解析酶解肽段的氨基酸顺序。结果　... 目的　对基因重组L 天门冬酰胺酶II产品进行一级结构分析。方法　采用流动注射方式 ,电喷雾离子化质谱法测定分子量 ;三氯乙酸变性 ,胰蛋白酶水解后 ,HPLC测定肽图谱 ;结合质谱源内碰撞诱导解离技术 ,解析酶解肽段的氨基酸顺序。结果　分子量测定值与理论值不符 ,质谱解析表明样品中存在 3个氨基酸变异现象 ,由此计算的分子量与测定值吻合。结论　液相色谱 /电喷雾质谱法为基因重组蛋白质药物的一级结构分析和质量控制提供了新途径。 展开更多

关键词 液相色谱/电喷雾离子化质谱法 重组L-天门冬酰胺酶II 肽图谱 氨基酸变异

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HPLC用于重组L-天门冬酰胺酶Ⅱ的纯度分析与肽图谱测定 被引量：9

3

作者 韩俊 盛龙生 +2 位作者 杨仲元 相秉仁 安登魁 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期229-233,共5页

目的：为了对重组Ｌ－天门冬酰胺酶Ⅱ进行肽图谱测定，以比较不同来源产品间一级结构的一致性。方法：运用梯度洗脱／反相高效液相色谱法对样品进行纯度检查和肽图谱测定，并提出了简单的三氯乙酸变性方法，以解除蛋白质抗胰蛋白酶水解... 目的：为了对重组Ｌ－天门冬酰胺酶Ⅱ进行肽图谱测定，以比较不同来源产品间一级结构的一致性。方法：运用梯度洗脱／反相高效液相色谱法对样品进行纯度检查和肽图谱测定，并提出了简单的三氯乙酸变性方法，以解除蛋白质抗胰蛋白酶水解的能力。结果：建立了重组Ｌ－天门冬酰胺酶Ⅱ的三氯乙酸变性／胰蛋白酶水解测定肽图谱的ＨＰＬＣ方法，肽图谱的比较反映出不同样品间的一级结构间存在差异。结论：建立的肽图谱测定方法，过程简便，便于常规测定，样品间的结构差异值得进一步研究。 展开更多

关键词 天门冬酰胺酶Ⅱ HPLC 三氯乙酸变性 肽图谱

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胰岛素的HPLC肽图谱分析 被引量：4

4

作者 张培培 杨化新 徐康森 《药物生物技术》 CAS CSCD 1996年第2期91-93,共3页

本文采用Ｖ＿８蛋白酶水解不同种属的胰岛素并用ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ＿８）柱进行分离，得到胰岛素的肽图谱，该图谱可以鉴别仅相差一个氨基酸的人和猪胰岛素。通过比较重组人胰岛素与天然产物肽图谱，可以验证两者的同质性。

关键词 胰岛素 肽图谱 高效液相色谱法

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重组人生长激素胰蛋白酶肽图谱的微径LCMS研究 被引量：4

5

作者 韩俊 盛龙生 +2 位作者 杨仲元 相秉仁 安登魁 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期269-274,共6页

采用电喷雾离子化为接口的液相色谱 质谱联用技术测定了重组人生长激素（ｒｈ Ｇ Ｈ） 胰蛋白酶水解的肽图谱。以此为例，讨论了微径柱对质谱检测灵敏度的影响，运用柱后“ Ｔ Ｆ Ａｆｉｘ”修饰技术大大提高了质谱检测灵敏度。根... 采用电喷雾离子化为接口的液相色谱 质谱联用技术测定了重组人生长激素（ｒｈ Ｇ Ｈ） 胰蛋白酶水解的肽图谱。以此为例，讨论了微径柱对质谱检测灵敏度的影响，运用柱后“ Ｔ Ｆ Ａｆｉｘ”修饰技术大大提高了质谱检测灵敏度。根据肽图谱的分析结果，验证了ｒｈ Ｇ Ｈ 的一级结构，并区分了ｒｈ Ｇ Ｈ 及其甲硫氨酰化产物，综合肽段检出率１００ ％ 。 展开更多

关键词 液相色谱 ESI 重组人生长激素 肽图谱

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HPLC和MALDI-TOF-MS法分析重组人钙调磷酸酶B亚基的纯度和肽图谱 被引量：3

6

作者 高锦 王艳丽 魏群 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期114-119,共6页

用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法对重组人钙调磷酸酶B亚基 (rhCNB)的纯度和肽图谱进行了测定 ,以比较不同批次产品的纯度及其一级结构的一致性 ,对其进行质量控制 .并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)法进行验证 .结... 用反相高效液相色谱 (RP HPLC)法对重组人钙调磷酸酶B亚基 (rhCNB)的纯度和肽图谱进行了测定 ,以比较不同批次产品的纯度及其一级结构的一致性 ,对其进行质量控制 .并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)法进行验证 .结果表明 ,运用梯度洗脱RP HPLC法能对样品进行纯度检查和肽图谱分析 ,测得 3批样品纯度均达到 98%以上 ,肽图谱能达到批间一致 .同时用MALDI TOF MS法测定 ,纯度结果二者相符 ,质谱肽图经计算机辅助分析 ,确证rhCNB一级结构与天然CNB一致 .证明该方法灵敏、准确、可靠 . 展开更多

关键词 重组人钙调磷酸酶B亚基(rhCNB) 高效液相色谱法 基质辅肋激光解吸电离飞行时间质谱法 纯度 肽图谱

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聚乙二醇化学修饰超氧化物歧化酶的研究进展 被引量：3

7

作者 杨清媛 张相年 赵树进 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期4597-4599,共3页

超氧化物歧化酶（SOD）是生物体内重要的自由基清除剂，主要催化超氧阴离子（O2）的歧化反应，能缓解许多由自由基介导的炎症反应，减轻组织缺血性损伤，预防和治疗辐射损伤。在临床上SOD主要用于延缓人体衰老，防止色素沉着，消除局部... 超氧化物歧化酶（SOD）是生物体内重要的自由基清除剂，主要催化超氧阴离子（O2）的歧化反应，能缓解许多由自由基介导的炎症反应，减轻组织缺血性损伤，预防和治疗辐射损伤。在临床上SOD主要用于延缓人体衰老，防止色素沉着，消除局部炎症，特别是治疗风湿性关节炎、慢性多发性关节炎及辐射防护。但半衰期短、稳定性差、免疫原性等因素限制了SOD的临床应用。为解决这些问题．国内外用化学修饰、基因重组和SOD修饰物等改造方法来延长半衰期、增强酶的稳定性、降低酶的免疫原性，目前对SOD进行化学修饰是研究的热点，且取得了很大的进展。 展开更多

关键词 超氧化物歧化酶 聚乙二醇 修饰 肽图谱

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重组人胰岛素类似物的HPLC分析 被引量：3

8

作者 杨化新 张培培 徐康森 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期375-378,共4页

目的 :探讨HPLC分析在重组人胰岛素类似物鉴别和杂质检测中的适用性。方法 :采用反相色谱柱(C18) ,以硫酸钠 -磷酸缓冲液 (0 2mol·L-1,pH 2 3)和乙腈为流动相 ,流速 0 8或 1 0mL·min-1,柱温40℃ ,检测波长 2 14nm ;用分子... 目的 :探讨HPLC分析在重组人胰岛素类似物鉴别和杂质检测中的适用性。方法 :采用反相色谱柱(C18) ,以硫酸钠 -磷酸缓冲液 (0 2mol·L-1,pH 2 3)和乙腈为流动相 ,流速 0 8或 1 0mL·min-1,柱温40℃ ,检测波长 2 14nm ;用分子筛柱 (ZorbaxGF2 5 0 )以磷酸铵缓冲液 (0 1mol·L-1,pH 7 5 )和乙腈为流动相 ,流速 0 5mL·min-1,检测波长 2 14nm ;检测重组人胰岛素类似物及其酶解片段。结果 :获得胰岛素及其类似物的RP -HPLC图谱 ,肽图谱和高效体积排阻色谱 (HPSEC)图。结论 :本文方法能够有效地区别和检测胰岛素类似物及有关物质 ,为该类药物的质控提供了科学依据。 展开更多

关键词 重组人胰岛素类似物 肽图谱 HPSEC RP-HPLC

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重组人甲状旁腺素1-34胰蛋白酶切肽图谱分析 被引量：2

9

作者 曾文珊 刘景晶 +1 位作者 杨仲元 徐康森 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期86-89,共4页

目的 :对重组人甲状旁腺素 1- 34进行肽图谱测定 ,以确证一级结构和比较不同批产品间一级结构的一致性。方法 :运用梯度洗脱 /反相高效液相色谱法对样品进行纯度检查和肽图谱测定。结果 :建立了重组人甲状旁腺素 1 -34的胰蛋白酶水解肽... 目的 :对重组人甲状旁腺素 1- 34进行肽图谱测定 ,以确证一级结构和比较不同批产品间一级结构的一致性。方法 :运用梯度洗脱 /反相高效液相色谱法对样品进行纯度检查和肽图谱测定。结果 :建立了重组人甲状旁腺素 1 -34的胰蛋白酶水解肽图谱HPLC测定方法 ,3批样品的肽图谱均与对照品一致。结论 :建立的肽图测定方法简便、准确、重现性好 ,适用于产品的质量控制。 展开更多

关键词 重组人甲状旁腺素1-34 肽图谱 胰蛋白酶切 高效液相色谱法 一级结构

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高效液相色谱和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法分析天花粉蛋白胰酶肽图谱 被引量：3

10

作者 喻志强 唐辰虹 +2 位作者 施荣华 吴高 罗昭锋 《生命科学仪器》 2005年第6期34-37,共4页

目的:建立了检测天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)肽图谱方法。方法:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法对天花粉蛋白的肽图谱进行了测定,比较了不同批次产品一级结构的一致性,并用MALDI... 目的:建立了检测天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)肽图谱方法。方法:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法对天花粉蛋白的肽图谱进行了测定,比较了不同批次产品一级结构的一致性,并用MALDI-TOF-MS法进行了验证。结果:用RP-HPLC和MALDI-TOF-MS法检测天花粉蛋白胰酶裂解后的肽段,发现各批产品的一级结构具有一致性,此分析方法具有简单,灵敏度高,可靠等优点。结论:本法适应于天花粉蛋白药物的肽谱分析,同时也为分析PEG修饰天花粉蛋白药物肽图谱提供了可以借鉴定手段。 展开更多

关键词 反相高效液相色谱 天花粉蛋白 肽图谱 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱

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人不同程度疲劳状态唾液蛋白标志物的肽谱研究 被引量：2

11

作者 许岩丽 肖迪 +7 位作者 张慧芳 尹天露 何利华 高晓欢 顾一心 彭贤惠 刘志军 张建中 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2020年第36期4597-4603,共7页

目的利用目前比较成熟的唾液飞行时间质谱分析技术探索疲劳状态与非疲劳状态下有差异的大分子量肽段,为研究疲劳更加便捷稳定的标志物提供重要的理论基础。方法采集10名健康志愿者唾液样本,采用磁珠富集(MB)和原液直接检测两种样品处理... 目的利用目前比较成熟的唾液飞行时间质谱分析技术探索疲劳状态与非疲劳状态下有差异的大分子量肽段,为研究疲劳更加便捷稳定的标志物提供重要的理论基础。方法采集10名健康志愿者唾液样本,采用磁珠富集(MB)和原液直接检测两种样品处理方式进行飞行时间质谱分析,以MB的唾液质谱和离心后直接取上清液(原液)的唾液质谱建模。结果磁珠和直接采样均在2000~15000 Da具有很好的谱图,富集会丢失部分峰。每个人早、晚的谱图均有差异,由于样本份数有限,暂未行交叉验证,因此每个样本采两张谱图,早晚各用20张谱图进行建模分析:在原液样本两组间发现3个差异肽。MB模型的交叉效度为92.06%,原液模型的交叉效度为95.49%。结论人不同程度疲劳状态唾液蛋白标志物的肽谱在分子量2000~15000 Da范围内有差异峰,为进一步实现基于生物传感器技术等的便捷疲劳检测方法提供科学依据,具有重要的理论和现实意义。 展开更多

关键词 疲劳 磁珠 生物标志物 唾液 肽图谱

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重组人胰岛素V_8酶肽图谱的毛细管区带电泳分析 被引量：2

12

作者 廖海明 杨昭鹏 徐康森 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期375-377,共3页

目的： 建立重组人胰岛素Ｖ８ 酶肽图谱的毛细管电泳分析方法。方法： 利用毛细管区带电泳分离模式， 采用熔凝石英毛细管柱， 检测了重组人胰岛素经Ｖ８ 蛋白酶酶解所产生的５ 个肽片段；比较了重组与天然人胰岛素的Ｖ８ 蛋白酶肽图谱... 目的： 建立重组人胰岛素Ｖ８ 酶肽图谱的毛细管电泳分析方法。方法： 利用毛细管区带电泳分离模式， 采用熔凝石英毛细管柱， 检测了重组人胰岛素经Ｖ８ 蛋白酶酶解所产生的５ 个肽片段；比较了重组与天然人胰岛素的Ｖ８ 蛋白酶肽图谱； 鉴定了毛细管区带电泳和反相高效液相色谱的肽图谱中各峰的对应关系。结果： 重组人胰岛素与天然人胰岛素的分子结构具有同一性； 毛细管区带电泳和反相高效液相色谱２ 种方法具有不同的分离机理。结论： 毛细管区带电泳可以成为反相高效液相色谱的有效补充用于重组人胰岛素的常规鉴定。 展开更多

关键词 毛细管区带电泳 重组人胰岛素 肽图谱

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中华按蚊不同发育阶段蛋白质二维电泳图谱的比较研究 被引量：1

13

作者 朱昌亮 叶炳辉 姚民一 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1989年第1期59-61,共3页

本文比较分析了中华按蚊不同发育阶段蛋白质多肽图谱.结果卵,2龄、4龄幼虫,蛹和成分虫别显示多肽斑点172、291、306、268和240个。绝大部份多肽斑点分布在94kD以下范围,其中尤以30kD以下的小分子蛋白为多.它们大多数为酸性。本文对不向... 本文比较分析了中华按蚊不同发育阶段蛋白质多肽图谱.结果卵,2龄、4龄幼虫,蛹和成分虫别显示多肽斑点172、291、306、268和240个。绝大部份多肽斑点分布在94kD以下范围,其中尤以30kD以下的小分子蛋白为多.它们大多数为酸性。本文对不向发育阶段多肽斑点的演变特点进行了讨论. 展开更多

关键词 中华按蚊 二维电泳图谱 发育阶段 肽图谱 蚊种 小分子蛋白 演变特点 发育生理学 等电点聚焦 生理生化研究

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动物蓝舌病研究现状及生物技术展望 被引量：1

14

作者 张念祖 彭克高 《云南畜牧兽医》 1989年第4期61-65,71,共6页

生物技术作为生物科学的重要组成部分,对生物科学研究有巨大的推动力。在动物医学领域里,高技术疫苗如基因工程苗、合成肽疫苗、抗个体基因型疫苗等已经有了一些新的构思和尝试。在病原微生物的诊断与鉴定上,由于单克隆抗体、基因探针... 生物技术作为生物科学的重要组成部分,对生物科学研究有巨大的推动力。在动物医学领域里,高技术疫苗如基因工程苗、合成肽疫苗、抗个体基因型疫苗等已经有了一些新的构思和尝试。在病原微生物的诊断与鉴定上,由于单克隆抗体、基因探针、限制性内切酶图谱技术、寡核苷酸指纹图谱技术、肽图谱技术的建立,克服了传统诊断与鉴定方法的许多缺点。诊断微生物学将有重大的变革。 展开更多

关键词 个体基因型疫苗 诊断微生物学 肽图谱 指纹图谱技术 单克隆抗体 合成肽疫苗 舌病 基因探针 病毒基因组 疫苗株

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蛋白质氨基酸分析新技术在生化新药分析研究中的应用进展 被引量：1

15

作者 罗霞萍 陈执中 《海峡药学》 1994年第2期1-2,共2页

关键词 蛋白质氨基酸 肽图谱 技术制品 氨基酸成分 硼酸盐缓冲液 氨基酸分析 酪氨酸残基 等电点 离子交换色谱法 毛细管区带电泳

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液质连用分析重组胰高血糖素样肽-1受体激动剂肽图 被引量：1

16

作者 曹卫荣 张世光 +6 位作者 贾锴 解茹 宋新星 边子睿 周晓雷 李春雷 邹卫 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第25期4819-4822,4809,共5页

目的:建立高效液相系统肽图分析法,用于重组胰高血糖素样肽-1受体激动剂(rExendin-4)的质量控制。方法:应用高效液相系统摸索最佳胰蛋白酶切和色谱条件,并采用液质联用系统分析肽段的精确相对分子量和氨基酸序列。结果:根据酶切条件摸索... 目的:建立高效液相系统肽图分析法,用于重组胰高血糖素样肽-1受体激动剂(rExendin-4)的质量控制。方法:应用高效液相系统摸索最佳胰蛋白酶切和色谱条件,并采用液质联用系统分析肽段的精确相对分子量和氨基酸序列。结果:根据酶切条件摸索,确定酶切条件为:rExendin-4原液与胰蛋白酶按照质量比为100:1混匀,37℃酶切4小时,根据肽段的色谱保留时间、相对分子质量及对其碰撞诱导解离质谱的解析结果,归属出肽图中各肽段所在的色谱峰,与理论值完全一致。结论:本法精确度高、重复性好、自动化程度高,能够用于rExendin-4原液肽图分析。 展开更多

关键词 rExendin-4 肽图谱 液质联用

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重组人尿型纤溶酶原激活剂中试产品的肽图分析 被引量：1

17

作者 王菲 龙应国 +4 位作者 胥照平 张正光 郭志霞 胡显文 肖成祖 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2000年第4期265-267,共3页

目的 :证明重组人尿型纤溶酶原激活剂 (recombinanthumanurinarytypeplasminogenactivator,rhu PA)中试规模 3批产品在结构上的同一性 ,建立生物工程产品质量控制的一项指标。方法 :rhu PA 3批中试产品在非还原条件下经胰蛋白酶水解以... 目的 :证明重组人尿型纤溶酶原激活剂 (recombinanthumanurinarytypeplasminogenactivator,rhu PA)中试规模 3批产品在结构上的同一性 ,建立生物工程产品质量控制的一项指标。方法 :rhu PA 3批中试产品在非还原条件下经胰蛋白酶水解以后 ,进行RP HPLC肽图分析。结果 :rhu PA 3批中试产品的肽图完全一致 ,且检出峰数目与理论推测值相符。结论 :3批产品肽图一致性为rhu PA产品的结构同一性提供了有利证据 ,并建立了rhu PA产品质量控制的一项指标。 展开更多

关键词 尿型纤溶酶原激活剂 肽图谱 中试生产

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重组人促红细胞生成素的HPLC/ESI/MS肽图谱分析

18

作者 彭建和 盛龙生 +1 位作者 相秉仁 安登魁 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期438-442,共5页

重组人促红细胞生成素（rHuEPO）是一种复杂的糖蛋白药物，含有三个氮连接和一个氧连接的糖基化位点。肽图谱分析是糖蛋白分析的有效手段，可是由于糖基化的影响，不是所有理论酶解位点都酶解了，需要实验验证。本文采用谷氨酸内切酶(Gl... 重组人促红细胞生成素（rHuEPO）是一种复杂的糖蛋白药物，含有三个氮连接和一个氧连接的糖基化位点。肽图谱分析是糖蛋白分析的有效手段，可是由于糖基化的影响，不是所有理论酶解位点都酶解了，需要实验验证。本文采用谷氨酸内切酶(Glu-C)将rHuEPO所有糖基化位点酶解成含糖肽段，HPLC/ESI/MS肽图谱分析，并通过源内碰撞诱导解离（In-source CID）分析了氨基酸序列。理论肽段有7段，检出了6段，只有一个三肽未检出。实验得到了含双硫键的肽段，通过CID分析确证了小分子肽段的氨基酸序列。 展开更多

关键词 重组人促红细胞生成素 糖蛋白 肽图谱 液相色谱

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天花粉蛋白胰酶肽图谱的毛细管区带电泳法分析 被引量：1

19

作者 喻志强 唐辰虹 +2 位作者 施荣华 何海辉 罗昭锋 《生物技术通讯》 CAS 2006年第4期583-585,共3页

目的:以天花粉蛋白胰蛋白酶解肽段为测定对象,用毛细管区带电泳法(CZE)研究天花粉蛋白的肽图谱分离条件。方法:采用未涂层石英毛细管(长50cm,内径75μm,有效长度42cm),以50mmol/L磷酸盐和150mmol/L三氟乙酸溶液为运行缓冲液,在25℃、pH... 目的:以天花粉蛋白胰蛋白酶解肽段为测定对象,用毛细管区带电泳法(CZE)研究天花粉蛋白的肽图谱分离条件。方法:采用未涂层石英毛细管(长50cm,内径75μm,有效长度42cm),以50mmol/L磷酸盐和150mmol/L三氟乙酸溶液为运行缓冲液,在25℃、pH2.0和压力为3447.4Pa(×10s)的条件下进样,以12kV恒压电泳分离,检测波长214nm。结果:运用CZE也能较好地对天花粉蛋白进行肽图谱分离,在缓冲体系中加入离子对试剂三氟乙酸,可极大地改善多肽的峰形和分辨率;同时运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)技术,也很好地鉴定了部分肽段在CZE和RP-HPLC肽图谱中的对应关系。结论:与传统的RP-HPLC分析天然或重组蛋白肽图谱相比,CZE也不失为一种鉴定蛋白肽图谱的有效、快速和简单的方法。 展开更多

关键词 毛细管区带电泳 反相高效液相色谱 天花粉蛋白 肽图谱 离子对试剂

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重组人促红细胞生成素的HPLC与UPLC肽图谱分析

20

作者 王敏力 杨鹏云 沈琦 《中国预防医学杂志》 CAS 2008年第5期360-365,共6页

目的分析rHuEPO供试品及其对照品经胰酶酶解后分别在HPLC与UPLC上的肽图谱表现。方法rHuEPO供试品及对照品经透析、冻干、重新溶解和胰酶酶切后,以三氟醋酸/水,三氟醋酸/乙腈/水作为流动相梯度洗脱,分别以HPLC及UPLC连接反相色谱柱分析... 目的分析rHuEPO供试品及其对照品经胰酶酶解后分别在HPLC与UPLC上的肽图谱表现。方法rHuEPO供试品及对照品经透析、冻干、重新溶解和胰酶酶切后,以三氟醋酸/水,三氟醋酸/乙腈/水作为流动相梯度洗脱,分别以HPLC及UPLC连接反相色谱柱分析酶切后的肽段。结果rHuEPO供试品及其对照品经胰酶酶切后的肽段在HPLC上肽图谱表现一致,在UPLC上肽图谱也完全一致。UPLC分析rHuEPO肽图需要的进样量更少,且较传统HPLC的分析时间大为缩短,同时不损失分离度及灵敏度。结论UPLC与HPLC均能验证rHuEPO供试品及对照品肽图的一致性,相比于HPLC、UPLC分析肽图谱更方便快捷,更节省样品,更适合分析rHuEPO肽图。 展开更多

关键词 重组人促红细胞生成素 胰酶酶解 肽图谱 高效液相色谱 超高效液相色谱

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