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幼畜大肠菌腹泻基因工程多价疫苗
被引量:
3
1
作者
陈添弥
黄翠芬
《中国科学基金》
CSCD
1997年第2期122-124,共3页
我国是畜牧业大国,猪、牛、羊等是主要经济家畜。腹泻是影响畜牧业发展的重要疫病,因肠毒素性大肠杆菌引起的新生幼畜腹泻发病率高达30%—80%,死亡率达10%—30%,严重影响幼畜的成活和发育,每年要为此蒙受巨大的经济损失。幼畜腹泻...
我国是畜牧业大国,猪、牛、羊等是主要经济家畜。腹泻是影响畜牧业发展的重要疫病,因肠毒素性大肠杆菌引起的新生幼畜腹泻发病率高达30%—80%,死亡率达10%—30%,严重影响幼畜的成活和发育,每年要为此蒙受巨大的经济损失。幼畜腹泻的药物治疗不但价格昂贵、费力费工,而且效果不好;更因致病菌抗药菌株日趋增多,用药往往无效,因而免疫预防是最佳选择。
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关键词
基因工程疫苗
肠
毒
索性
大肠杆菌
预防
仔猪
腹泻
犊牛
羔羊
幼畜
原文传递
ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立
被引量:
5
2
作者
张强
张雪寒
+1 位作者
何孔旺
王春凤
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期1312-1317,共6页
表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入...
表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入原核表达载体,表达重组蛋白His-F4-F5。以纯化的His-F4-F5蛋白作为检测抗原,建立检测ETEC抗体的间接EIISA方法。经酶切和DNA序列分析,成功构建重组菌BL21(pCold I-F4-F5),SDS-PAGE和Western blot分析,融合表达F4-F5相对分子质量为29 000,与ETEC高免血清发生特异性反应,条带单一。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度6ng/孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1∶15 000,5%脱脂奶封闭l h,底物作用时间15min。本研究建立F4-F5间接ELISA方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强的特点,是猪场ETEC感染和疫苗免疫效果检测的有效工具,进而指导疫苗使用和新型疫苗研发。
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关键词
产
肠
毒
索性
大肠杆菌
F4菌毛
F5菌毛
间接酶联免疫吸附试验
原文传递
大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建与表达
3
作者
杨冬梅
陈创夫
+3 位作者
王鹏雁
王远志
李有文
刘君
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期104-108,共5页
本研究为构建表达产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,从质粒pET-K88ac-STⅡ中扩增编码融合蛋白K88ac-STⅡ的基因并插入线性T载体pBS-T中,经酶切、PCR、测序鉴定正确后,再用限制性内切酶切下,插入含...
本研究为构建表达产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,从质粒pET-K88ac-STⅡ中扩增编码融合蛋白K88ac-STⅡ的基因并插入线性T载体pBS-T中,经酶切、PCR、测序鉴定正确后,再用限制性内切酶切下,插入含有asd基因的表达载体pYA3334,构建pYA-K88ac-STⅡ重组质粒。重组质粒鉴定正确后电穿孔转入缺失腺苷酸环化酶基因(△cya)、环腺苷酸受体蛋白基因(△crp)以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因(△asd)的鼠伤寒沙门菌(X4550)中,以获得重组菌株X4550(含pYA-K88ac-STⅡ)。结果显示该无抗药性的重组菌株在体外营养选择压力下,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖,口服该疫苗菌株无明显的毒性作用。通过本试验成功构建了表达K88ac-STⅡ融合基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4550(含pYA-K88ac-STⅡ)。为防治仔猪腹泻提供了口服活菌疫苗候选株。
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关键词
产
肠
毒
索性
大肠杆菌
融合基因
耐热
肠
毒
素
鼠伤寒沙门氏菌
重组
下载PDF
职称材料
题名
幼畜大肠菌腹泻基因工程多价疫苗
被引量:
3
1
作者
陈添弥
黄翠芬
机构
军事医学科学院生物工程研究所
中国工程院
出处
《中国科学基金》
CSCD
1997年第2期122-124,共3页
文摘
我国是畜牧业大国,猪、牛、羊等是主要经济家畜。腹泻是影响畜牧业发展的重要疫病,因肠毒素性大肠杆菌引起的新生幼畜腹泻发病率高达30%—80%,死亡率达10%—30%,严重影响幼畜的成活和发育,每年要为此蒙受巨大的经济损失。幼畜腹泻的药物治疗不但价格昂贵、费力费工,而且效果不好;更因致病菌抗药菌株日趋增多,用药往往无效,因而免疫预防是最佳选择。
关键词
基因工程疫苗
肠
毒
索性
大肠杆菌
预防
仔猪
腹泻
犊牛
羔羊
幼畜
Keywords
recombinant vaccine, ETEC, prevention of diarrhea in piglets, prevention of diarrhea in calves and lambs
分类号
S857.3 [农业科学—临床兽医学]
S855.12 [农业科学—兽医学]
原文传递
题名
ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立
被引量:
5
2
作者
张强
张雪寒
何孔旺
王春凤
机构
吉林农业大学动物科学技术学院
江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期1312-1317,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(31201919)
农业部"948"计划资助项目(2014-S17)
江苏省农业科技自主创新资金资助项目(CX(13)5033)
文摘
表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入原核表达载体,表达重组蛋白His-F4-F5。以纯化的His-F4-F5蛋白作为检测抗原,建立检测ETEC抗体的间接EIISA方法。经酶切和DNA序列分析,成功构建重组菌BL21(pCold I-F4-F5),SDS-PAGE和Western blot分析,融合表达F4-F5相对分子质量为29 000,与ETEC高免血清发生特异性反应,条带单一。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度6ng/孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1∶15 000,5%脱脂奶封闭l h,底物作用时间15min。本研究建立F4-F5间接ELISA方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强的特点,是猪场ETEC感染和疫苗免疫效果检测的有效工具,进而指导疫苗使用和新型疫苗研发。
关键词
产
肠
毒
索性
大肠杆菌
F4菌毛
F5菌毛
间接酶联免疫吸附试验
Keywords
enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC)
F4 pilus
F5 pilus
indirect ELISA
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建与表达
3
作者
杨冬梅
陈创夫
王鹏雁
王远志
李有文
刘君
机构
石河子大学新疆地方与民族高发病实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期104-108,共5页
基金
教育部"春晖计划"科研合作项目(Z2004-2-65054
2005-2007)
文摘
本研究为构建表达产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,从质粒pET-K88ac-STⅡ中扩增编码融合蛋白K88ac-STⅡ的基因并插入线性T载体pBS-T中,经酶切、PCR、测序鉴定正确后,再用限制性内切酶切下,插入含有asd基因的表达载体pYA3334,构建pYA-K88ac-STⅡ重组质粒。重组质粒鉴定正确后电穿孔转入缺失腺苷酸环化酶基因(△cya)、环腺苷酸受体蛋白基因(△crp)以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因(△asd)的鼠伤寒沙门菌(X4550)中,以获得重组菌株X4550(含pYA-K88ac-STⅡ)。结果显示该无抗药性的重组菌株在体外营养选择压力下,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖,口服该疫苗菌株无明显的毒性作用。通过本试验成功构建了表达K88ac-STⅡ融合基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4550(含pYA-K88ac-STⅡ)。为防治仔猪腹泻提供了口服活菌疫苗候选株。
关键词
产
肠
毒
索性
大肠杆菌
融合基因
耐热
肠
毒
素
鼠伤寒沙门氏菌
重组
Keywords
enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC)
fusion gene
heat-stable enterotoxin
salmonella typhimurium
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
幼畜大肠菌腹泻基因工程多价疫苗
陈添弥
黄翠芬
《中国科学基金》
CSCD
1997
3
原文传递
2
ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立
张强
张雪寒
何孔旺
王春凤
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
5
原文传递
3
大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建与表达
杨冬梅
陈创夫
王鹏雁
王远志
李有文
刘君
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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