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PCR技术检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因 被引量：19
1
作者 邱阳 王刚 卢行安 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期115-116,共2页
目的 :金黄色葡萄球菌B型肠毒素是污染食品引起食物中毒的主要原因之一 ,针对进出口食品卫生监测的需要 ,研究一种简便、快速、准确的实验方法。方法 :利用聚合酶链反应技术 (PCR)采用特异的模板探针引物进行杂交 ,最后通过电泳技术与... 目的 :金黄色葡萄球菌B型肠毒素是污染食品引起食物中毒的主要原因之一 ,针对进出口食品卫生监测的需要 ,研究一种简便、快速、准确的实验方法。方法 :利用聚合酶链反应技术 (PCR)采用特异的模板探针引物进行杂交 ,最后通过电泳技术与阳性对照进行比对 ,来判断阴阳性结果。结果 :本方法检出率高 ,每克样品中有 4个金黄色葡萄球菌即可检出 ,2 4小时即可报告结果。结论 :PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因快速、准确 ,检测周期短 ,既可提高检出率 ,又可节省检测时间。 展开更多
关键词 PCR技术 食品 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 基因 食物中毒
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金黄色葡萄球菌肠毒素B基因的克隆和在大肠杆菌中高效表达 被引量：8
2
作者 杨立泉 吴文芳 +3 位作者 时成波 吕安国 冯家勋 柏学亮 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期597-600,共4页
利用PCR方法从金黄色葡萄球菌TSTw基因组DNA中扩增出约 70 0bp的DNA片段 ,将之克隆到pGEM 7Zf(+)载体上并转化大肠杆菌DH5α菌株。重组质粒的测序结果表明克隆到了seb基因 ,它含有 717bp(不包括N端81bp的信号肽编码区 ) ,其核苷酸序列... 利用PCR方法从金黄色葡萄球菌TSTw基因组DNA中扩增出约 70 0bp的DNA片段 ,将之克隆到pGEM 7Zf(+)载体上并转化大肠杆菌DH5α菌株。重组质粒的测序结果表明克隆到了seb基因 ,它含有 717bp(不包括N端81bp的信号肽编码区 ) ,其核苷酸序列与文献报道完全一致。将其连接于表达载体 7ZTS上 ,转化到大肠杆菌JM10 9(DE3)内。表达的SEB占总蛋白 33.5 %。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 基因克隆 大肠杆菌 高效表达 超抗原
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金黄色葡萄球菌肠毒素B单克隆抗体对烫伤脓毒症大鼠急性肺损伤的影响 被引量：7
3
作者 李红云 姚咏明 +4 位作者 施志国 董宁 于燕 陆连荣 盛志勇 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期228-230,共3页
目的　探讨金黄色葡萄球菌 (简称金葡菌 )肠毒素B(SEB)单克隆抗体 (单抗 )对烫伤脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用。方法　雄性Wistar大鼠 5 6只随机分为正常对照组 (n =10 )、烫伤对照组 (n =10 )、烫伤后金葡菌感染组 (n =2 0 )和SEB... 目的　探讨金黄色葡萄球菌 (简称金葡菌 )肠毒素B(SEB)单克隆抗体 (单抗 )对烫伤脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用。方法　雄性Wistar大鼠 5 6只随机分为正常对照组 (n =10 )、烫伤对照组 (n =10 )、烫伤后金葡菌感染组 (n =2 0 )和SEB单克隆抗体 (单抗 )拮抗组 (n =16)。测定肺组织SEB水平、髓过氧化物酶 (MPO )活性、肿瘤坏死因子 (TNF) α和干扰素 (IFN) γ表达的改变。结果　烫伤后金葡菌脓毒症动物肺脏SEB含量明显升高 ,伤后 2、6h分别为 66.85ng/g组织和 92 .46ng/g组织 ,与正常对照组 (14 .2 6ng/g组织 )和烫伤对照组 (17.3 2ng/g组织 )相比均为P <0 .0 1;同时 ,肺组织MPO活性显著增强 ,峰值可达 7.3 9U /g组织 ,与正常对照组 (2 .0 9U /g组织 )相比 P <0 .0 5。与之相应 ,肺组织MPO活性显著增强 (P <0 .0 5 )。同时 ,局部组织IFN γ和TNF α基因及其蛋白质表达明显上调 (P <0 .0 5 ) ,并与肺脏SEB含量呈高度正相关 (分别为 r=0 .92 0 7、P =0 .0 0 3 3和 r=0 .814 2、P =0 .0 2 5 8)。SEB单抗早期干预可有效降低肺组织中SEB含量 ,并显著抑制IFN γ和TNF α的产生 ,肺脏病理改变亦明显减轻。结论　SEB单抗干预可抑制IFN γ和TNF α等炎症介质的产生 。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 单克隆抗体 脓毒症 烫伤 肺损伤
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慢性荨麻疹患者血清金黄色葡萄球菌超抗原特异性IgE检测及其意义 被引量：4
4
作者 张磊 张理涛 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》 CAS 2016年第4期201-204,共4页
目的检测慢性荨麻疹(CU)患者血清金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)超抗原肠毒素A(SEA)、肠毒素B(SEB)和中毒性休克综合征毒素(TssT-1)的特异性IgE(sIgE),分析该超抗原sIgE与慢性荨麻疹相关性,探讨其发病机制。方法采用酶联免疫吸附试验(Enzym... 目的检测慢性荨麻疹(CU)患者血清金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)超抗原肠毒素A(SEA)、肠毒素B(SEB)和中毒性休克综合征毒素(TssT-1)的特异性IgE(sIgE),分析该超抗原sIgE与慢性荨麻疹相关性,探讨其发病机制。方法采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测63例慢性荨麻疹患者和60例正常对照组血清金葡菌超抗原SEA、SEB和TssT-1的sIgE水平,分别进行金葡菌超抗原(SEA、SEB、TssT-1和SEA/SEB/TssT-1)sIgE比较,并将其浓度与病情程度评分(UAS)进行相关性分析。结果 CU患者血清中金葡菌超抗原(SEB、TssT-1和SEA/SEB/TssT-1)sIgE水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);金葡菌超抗原(SEA、SEB和SEA/SEB/TssT-1)sIgE水平分别与CU病情轻中重度和荨麻疹活动评分(Urticaria activity score,UAS)呈正相关(P<0.05)。结论慢性荨麻疹患者血清中金葡菌肠毒素A、肠毒素B和TssT-1 sIgE水平升高,可能与其慢性病程及严重程度有关。 展开更多
关键词 慢性荨麻疹 金葡菌超抗原 超抗原肠毒素A 肠毒素b 中毒性休克综合征毒素-1 特异性IGE
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金黄色葡萄球菌肠毒素B基因在大肠杆菌中的克隆及表达 被引量：5
5
作者 李飞 周帅 +8 位作者 董慧 黄艳梅 梁秉绍 李娟 龙燕 王洁琳 谢永强 杨镒宇 周珍文 《检验医学与临床》 CAS 2016年第18期2553-2555,共3页
目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩... 目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增后,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切,并与做相应酶切的pET-28α(+)连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序,用IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot印迹鉴定表达产物。结果成功扩增出SEB基因,基因大小为801bp,重组PET-28α(+)-SEB双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEB在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99%。经IPTG诱导后,pET-28α(+)-SEB/BL21在相应的相对分子质量(35×103)可见融合蛋白以包涵体形式表达,免疫印迹在相应分子量检测到目的蛋白。结论克隆了SEB基因,并成功在大肠杆菌BL21中以包涵体形式表达,为肠毒素B应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 克隆 表达
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红细胞在葡萄球菌肠毒素B刺激人PBMC增殖中的辅佐作用 被引量：5
6
作者 欧阳笑梅 张红毅 +3 位作者 金伯泉 董帮权 李恩善 刘雪松 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期229-231,共3页
通过葡萄球菌肠毒素B(SEB)刺激人外周血淋巴细胞增殖,对完整红细胞及红细胞膜能否在提呈抗原中起辅佐作用进行了研究,并与单核细胞的辅佐作用进行了对比。结果显示,在SEB刺激去除单核细胞的人外周血淋巴细胞中,分别加入红细胞、红细胞... 通过葡萄球菌肠毒素B(SEB)刺激人外周血淋巴细胞增殖,对完整红细胞及红细胞膜能否在提呈抗原中起辅佐作用进行了研究,并与单核细胞的辅佐作用进行了对比。结果显示,在SEB刺激去除单核细胞的人外周血淋巴细胞中,分别加入红细胞、红细胞膜碎片或单核细胞后,淋巴细胞增殖均有明显升高(P<0.01)。当同时加入红细胞和单核细胞时,淋巴细胞增殖的幅度略高于单独加入红细胞或单核细胞组。提示红细胞具有与单核细胞作用类似而机理不同的辅佐作用。 展开更多
关键词 葡萄球菌 肠毒素b 红细胞 增殖
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McAb-ELISA夹心法检测葡萄球菌B型肠毒素 被引量：2
7
作者 董邦全 李恩善 刘苏燕 《第四军医大学学报》 1991年第4期285-287,共3页
作者用兔抗葡萄球菌肠毒素B(SEB)多克隆抗体作为包被抗体,以HRP标记的抗SEB McAb作为第2抗体,建立了一种McAb-ELISA夹心法,用于检测人工污染食物体本敏感性的下限为1.5μg/L.并比较了吐温20,BSA,低脂牛奶及8种正常血清等作为抑制剂消除... 作者用兔抗葡萄球菌肠毒素B(SEB)多克隆抗体作为包被抗体,以HRP标记的抗SEB McAb作为第2抗体,建立了一种McAb-ELISA夹心法,用于检测人工污染食物体本敏感性的下限为1.5μg/L.并比较了吐温20,BSA,低脂牛奶及8种正常血清等作为抑制剂消除试验中非特异性反应的效果.结果表明,羊或兔血清和吐温20的使用浓度分别以2％ 10％和0.05％-0.15％为佳,且发现血清与吐温20还具有协同抑制作用. 展开更多
关键词 葡萄球菌 肠毒素b ELISA 抗体
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金黄色葡萄球菌肠毒素B用于肿瘤治疗的研究现状 被引量：2
8
作者 杨立泉 时成波 吴文芳 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期52-55,共4页
自从 195 4年发现肠毒素B(SEB)以来 ,人们对它的研究就一直没有停止。随着对治疗恶性肿瘤药物研究的进展 ,肠毒素B逐渐成为人们注意的焦点。肠毒素B作为超抗原 ,激活T淋巴细胞 ,致使其释放细胞因子 ,从而达到杀伤肿瘤细胞的目的。不同... 自从 195 4年发现肠毒素B(SEB)以来 ,人们对它的研究就一直没有停止。随着对治疗恶性肿瘤药物研究的进展 ,肠毒素B逐渐成为人们注意的焦点。肠毒素B作为超抗原 ,激活T淋巴细胞 ,致使其释放细胞因子 ,从而达到杀伤肿瘤细胞的目的。不同细胞周期的T细胞对作为超抗原的肠毒素B的反应不同。AtsuoOchi等将肠毒素B和一功能蛋白Id通过化学方法连接在一起 ,在小鼠体内建立淋巴瘤系 38C13模型中应用 ,达到了很好的治疗效果。SEB 抗 Id结合物能够活化体内Vβ 8+T细胞、阻止体内Id +B淋巴瘤的过度增殖。LewisE等用黑色素瘤细胞在小鼠体内建立肿瘤模型 ,并用SEB和双特异性抗体bsAb研究了抗活体肿瘤的效果。BethA .Pulaski建立了缺少免疫原性鼠 4T1乳腺癌术后动物模型 ,研究了SEB和MHCⅡ ,CD80联合细胞免疫对乳腺癌的治疗。KyojiOka da等同时将SEB和西法安生应用于抗鼠骨肉瘤研究 ,发现抑瘤效果良好 ,而且会在转移病灶处引发细胞凋亡。 展开更多
关键词 肠毒素b 肿瘤 治疗
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金黄色葡萄球菌超抗原与人耳部瘢痕疙瘩形成的相关性研究 被引量：1
9
作者 蔡云鹏 吴晓琰 陈晓栋 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期257-262,共6页
目的探讨金黄色葡萄球菌超抗原与人耳部瘢痕疙瘩形成的相关性。方法采用回顾性病例对照研究方法。2017年6月—2018年3月,取南通大学附属医院收治的10例(女9例、男1例,年龄19~59岁)耳部瘢痕疙瘩患者行耳部瘢痕疙瘩核心切除术后弃用瘢痕... 目的探讨金黄色葡萄球菌超抗原与人耳部瘢痕疙瘩形成的相关性。方法采用回顾性病例对照研究方法。2017年6月—2018年3月,取南通大学附属医院收治的10例(女9例、男1例,年龄19~59岁)耳部瘢痕疙瘩患者行耳部瘢痕疙瘩核心切除术后弃用瘢痕组织及3例(均为女性,年龄20~24岁)色素痣患者手术后弃用正常皮肤组织。取耳部瘢痕疙瘩表面分泌物,培养细菌并进行鉴定。取瘢痕疙瘩和正常皮肤组织,采用蛋白质印迹法检测金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+毒性休克综合征毒素1(TSST-1)的蛋白表达,并根据蛋白表达情况将瘢痕疙瘩分为超抗原阳性组和超抗原阴性组。蛋白质印迹法检测2组瘢痕疙瘩T细胞受体(TCR)Vβ蛋白表达。Masson、苏木精-伊红(HE)染色观察2组瘢痕疙瘩真皮内胶原纤维形成和炎症细胞浸润情况。酶联免疫吸附测定法检测超抗原阳性瘢痕疙瘩中金黄色葡萄球菌肠毒素A、肠毒素B、TSST-1表达。对数据行配对样本t检验。结果耳部瘢痕疙瘩表面分泌物培养出细菌,优势菌培养24 h可见细菌周围出现溶血现象,菌落呈白色或金黄色,鉴定为金黄色葡萄球菌。3例患者正常皮肤肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达阴性,蛋白表达量为0.267±0.016。4例患者瘢痕疙瘩金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达阳性,蛋白表达量为0.472±0.016,纳入超抗原阳性组;6例患者瘢痕疙瘩金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达阴性,蛋白表达量为0.255±0.004,纳入超抗原阴性组。超抗原阳性组瘢痕疙瘩金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达量明显高于超抗原阴性组瘢痕疙瘩和正常皮肤(t=15.22、8.63,P<0.01)。超抗原阳性组瘢痕疙瘩TCR Vβ蛋白表达量为0.389±0.023,明显高于超抗原阴性组的0.169±0.014(t=8.62,P<0.01)。Masson染色显示,2组瘢痕疙瘩真皮内均见大量胶原纤维增生。HE染色显示,超抗� 展开更多
关键词 葡萄球菌 金黄色 瘢痕疙瘩 超抗原 耳 肠毒素A 肠毒素b 毒性休克综合征毒素1
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金黄色葡萄球菌SEB基因的克隆及其系统发生分析 被引量：2
10
作者 高世同 张仁利 +3 位作者 刘会娟 李晓恒 耿艺介 黄达娜 《中国热带医学》 CAS 2012年第10期1179-1181,共3页
目的克隆和测定金黄色葡萄球菌深圳分离株S4070肠毒素B(SEB)基因序列,并作系统发生分析。方法采用PCR法从金黄色葡萄球菌S4070基因组中扩增出SEB基因片段,纯化后与pMD-18T载体连接构建重组子pMD-18T-SEB,并转化E.coli DH5α;阳性克隆质... 目的克隆和测定金黄色葡萄球菌深圳分离株S4070肠毒素B(SEB)基因序列,并作系统发生分析。方法采用PCR法从金黄色葡萄球菌S4070基因组中扩增出SEB基因片段,纯化后与pMD-18T载体连接构建重组子pMD-18T-SEB,并转化E.coli DH5α;阳性克隆质粒经双酶切法鉴定后,采用双脱氧末端终止法作序列测定,并以BLAST和MEGA4软件分析其分子特征。结果从金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出约704bp的基因片段,阳性克隆质粒鉴定结果与预期一致;序列测定结果显示,所克隆的SEB基因片段含704个碱基,与GenBank中17株金黄色葡萄球菌SEB基因序列比对,无碱基的插入或缺失,同源性均为98%以上;基于SEB基因序列,采用邻位连接法(Neigh bor-joining)构建系统发生树,深圳S4070株与日本分离株NN35、NN37、NN41-F1D、NN41-F1F和NN41-F1G以及印度分离株DQ535901、DQ535902的遗传距离小,同处在一个分支群上。结论实验成功克隆了金葡菌深圳株S4070 SEB基因,不同分离株间SEB基因序列相对保守,本分离株与日本和印度分离株遗传关系较近。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 克隆 系统发生分析
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金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达及纯化 被引量：2
11
作者 张亮 张国利 +6 位作者 陈萍 朱平 岳玉环 吴广谋 田园 刘雪 冯越 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第6期804-806,812,共4页
目的原核表达并纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal entertoxin B,SEB)。方法以合成的SEB全基因序列为模板,PCR扩增SEB基因片段,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-SEB,转化E.coil BL21(DE3),IPTG诱导表达。表... 目的原核表达并纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal entertoxin B,SEB)。方法以合成的SEB全基因序列为模板,PCR扩增SEB基因片段,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-SEB,转化E.coil BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经硫酸铵盐析、SP阳离子层析柱、Chelating金属鳌合层析铜(Cu2+)柱纯化后,用Thrombin切除组氨酸标签,再经Chelating金属鳌合层析铜(Cu2+)柱和DEAE阴离子层析柱纯化。结果重组原核表达质粒pET-28a-SEB经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为31 000,主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%。最终纯化后的重组SEB蛋白纯度可达90%以上。结论成功构建了SEB基因重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了重组SEB蛋白,为进一步研究其致病机理及防控方法奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄球菌 金黄色 肠毒素b 原核细胞 基因表达 纯化
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金黄色葡萄球菌肠毒素B功能表位及中和抗体研究进展 被引量：2
12
作者 胡乃静 罗龙龙 +1 位作者 乔春霞 张景海 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期45-51,共7页
金黄色葡萄球菌(金葡菌)肠毒素B(SEB),是造成食物中毒乃至中毒性休克综合征的主要病因。SEB也是一种超级抗原,可以刺激T细胞,能够同时与抗原呈递细胞上的主要组织相容性复合物Ⅱ类分子和T细胞受体上的Vβ结合。随着SEB的结构逐步得到解... 金黄色葡萄球菌(金葡菌)肠毒素B(SEB),是造成食物中毒乃至中毒性休克综合征的主要病因。SEB也是一种超级抗原,可以刺激T细胞,能够同时与抗原呈递细胞上的主要组织相容性复合物Ⅱ类分子和T细胞受体上的Vβ结合。随着SEB的结构逐步得到解析,揭示了SEB结构与功能的关键表位。临床上尚无针对SEB中毒的有效疫苗和药物。SEB中和抗体因其高特异性和低毒副作用,成为研究者们的研究首选和重点,从鼠源抗体、人鼠嵌合抗体到人源抗体等均有报道。本文对SEB功能表位及其中和抗体的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 金葡菌 肠毒素b 表位 中和抗体
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金葡菌野生株肠毒素B基因克隆及分子特征 被引量：2
13
作者 高世同 刘会娟 +4 位作者 张仁利 秦莉 耿艺介 黄达娜 吴少庭 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期72-73,共2页
目的克隆金黄色葡萄球菌野生株S407030肠毒素B(SEB)基因,并分析其分子特征。方法根据Genebank中金黄色葡萄球菌S6株肠毒素B基因设计1对引物,采用PCR法从金黄色葡萄球菌野生株S407030基因组中扩增目的基因,将目的片段与pMD-18T载体连接... 目的克隆金黄色葡萄球菌野生株S407030肠毒素B(SEB)基因,并分析其分子特征。方法根据Genebank中金黄色葡萄球菌S6株肠毒素B基因设计1对引物,采用PCR法从金黄色葡萄球菌野生株S407030基因组中扩增目的基因,将目的片段与pMD-18T载体连接构建重组子pMD-18T-SEB,并转化E.coli DH5a;阳性克隆以双酶切鉴定后,双脱氧末端终止法作序列测定分析,并以ExPasy Proteoic Tools蛋白分析软件预测其编码SEB蛋白的二级结构。结果从金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出约705bp的基因片段,所构建的阳性克隆重组子PCR及双酶切鉴定与预期结果一致;测序结果表明,克隆的SEB基因含705个碱基,与S6株序列相比无碱基的插入或缺失,同源性为98.4%;存在11个碱基变异,其中7个为无义突变,4个为有义突变(突变位点位于第364,699,899,988位,编码氨基酸变化分别为:Ser→Ala、Gln→His、Asn→Ser、Met→Leu);所预测的2菌株SEB蛋白的二级结构基本相同。结论本实验成功克隆了金葡菌野生株S407030SEB基因,其在不同菌株间相对保守;由SEB基因点突变引起的个别氨基酸的改变对SEB生物活性与毒力的影响有待进一步研究。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 克隆 分子特征
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超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B诱导小鼠免疫细胞凋亡 被引量：1
14
作者 肖雪媛 杨贵贞 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期393-395,I011,共4页
为探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ｓｔａｐｈｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎＢ，ＳＥＢ）对小鼠免疫细胞凋亡的影响，采用形态学观察及ＤＮＡ断裂指标检测了ＳＥＢ诱导小鼠免疫细胞凋亡的剂量和效应关系。结... 为探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ｓｔａｐｈｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎＢ，ＳＥＢ）对小鼠免疫细胞凋亡的影响，采用形态学观察及ＤＮＡ断裂指标检测了ＳＥＢ诱导小鼠免疫细胞凋亡的剂量和效应关系。结果表明，１２．５μｇ、２５μｇ和５０μｇＳＥＢ均可引起部分胸腺细胞、脾细胞和肠系膜淋巴结细胞出现核固缩、核断裂及凋亡小体形成等形态学变化。上述免疫细胞ＤＮＡ琼脂糖电泳可见典型的“梯状”带。而对照组免疫细胞未见上述明显变化。本实验结果表明超抗原ＳＥＢ可诱导小鼠免疫细胞凋亡。 展开更多
关键词 葡萄球菌 肠毒素b 免疫细胞 细胞凋亡 SEb
全文增补中
人转铁蛋白—葡萄球菌肠毒素B偶联蛋白的抗肿瘤活性 被引量：1
15
作者 张国驰 陶箭 +3 位作者 朱佑明 童善庆 陆德源 赵任 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第3期256-258,267,共4页
目的研究人转铁蛋白（HuTf）与金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）偶联后，其Tf－SEB偶合蛋白的抗肿瘤活性，探讨Tf作为载体用于肿瘤导向免疫治疗的可能性。方法利用凋亡细胞指数检测和超抗原依赖的细胞介导的细胞毒（SDCC）效应，观察该偶... 目的研究人转铁蛋白（HuTf）与金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）偶联后，其Tf－SEB偶合蛋白的抗肿瘤活性，探讨Tf作为载体用于肿瘤导向免疫治疗的可能性。方法利用凋亡细胞指数检测和超抗原依赖的细胞介导的细胞毒（SDCC）效应，观察该偶合蛋白的起抗原活性和激活T细胞杀伤肿瘤细胞的作用。结果Tf－SEB偶合蛋白比单体SEB能更有效地激活T细胞的杀伤肿瘤细胞活性，并对MHC－Ⅱ类分子阴性的肿瘤靶细胞也具有较强的杀伤效果。结论Tf作为载体应用于肿瘤的导向治疗具有可行性。 展开更多
关键词 转铁蛋白 肠毒素b 载体 SEb 肿瘤 免疫疗法
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金黄葡萄球菌野生株肠毒素B重组蛋白的表达及纯化 被引量：1
16
作者 高世同 张仁利 +4 位作者 刘会娟 秦莉 耿艺介 黄达娜 吴少庭 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第10期865-868,共4页
目的在大肠埃希菌中表达金黄葡萄球菌野生株肠毒素B(SEB)重组蛋白,并进行纯化。方法采用PCR方法从金黄葡萄球菌基因组中扩增出SEB基因片段,与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMD18-T/SEB,测序分析后,亚克隆入表达载体pGEX-4T-2,转化感受态... 目的在大肠埃希菌中表达金黄葡萄球菌野生株肠毒素B(SEB)重组蛋白,并进行纯化。方法采用PCR方法从金黄葡萄球菌基因组中扩增出SEB基因片段,与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMD18-T/SEB,测序分析后,亚克隆入表达载体pGEX-4T-2,转化感受态E.coliJM109,IPTG诱导表达。表达产物采用B-PER GST Fusion Protein Purification Kit纯化后进行Western blot鉴定。结果SEB基因扩增片段大小为705bp,测序结果显示与金黄葡萄球菌S6株序列相比无碱基的插入或缺失,同源性为98.4%,存在11个碱基变异,其中7个为无义突变,4个为有义突变(突变位点位于第364、699、899和988位,编码氨基酸变化分别为:Ser→Ala、Gln→His、Asn→Ser和Met→Leu);表达的含GST的融合蛋白相对分子质量约53000,纯化后经SDS-PAGE分析,可见单一条带。Western blot显示表达产物可被兔抗SEB抗体所识别。结论已成功表达并纯化了金黄葡萄球菌野生株SEB重组蛋白,为开发SEB免疫诊断试剂提供了材料。 展开更多
关键词 金黄葡萄球菌 肠毒素b 表达 纯化
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环孢菌素对超抗原SEB致小鼠肝损伤的保护作用 被引量：1
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作者 印彤 童善庆 +2 位作者 胡宝瑜 肖家祁 陆德源 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1998年第1期12-14,共3页
用超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)、D-氨基半乳糖(D-GalN)混合腹腔注射Balb/c/小鼠及预先注射过环孢菌素(CSA)的小鼠,动态观察小鼠肝细胞变化和血清TNF,IFN-γ水平及小鼠死亡率。结果发现SEB+D-GalN注射后2h、6h时出现肝细胞凋亡,12h后出... 用超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)、D-氨基半乳糖(D-GalN)混合腹腔注射Balb/c/小鼠及预先注射过环孢菌素(CSA)的小鼠,动态观察小鼠肝细胞变化和血清TNF,IFN-γ水平及小鼠死亡率。结果发现SEB+D-GalN注射后2h、6h时出现肝细胞凋亡,12h后出现肝坏死,小鼠24小时死亡率达 50％。小鼠血清 TNF2h升到最高,IFN-γ在 6～12h较高。而预注CSA的小鼠上述指标正常。推测SEB+D-GalN对肝细胞的作用是由T细胞介导的,可被CSA抑制。 展开更多
关键词 环孢菌素 超抗原 葡萄球菌 肠毒素b 肝坏死
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金黄色葡萄球菌肠毒素B的分离纯化 被引量：1
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作者 朱俊友 李玉锋 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期136-138,共3页
为了分离纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB),在离心、浓缩后,将浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32和葡聚糖凝胶G-75两步柱层析,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得了电泳纯的金黄色葡萄球菌肠毒素B。实验证明,该简化的二步柱层... 为了分离纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB),在离心、浓缩后,将浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32和葡聚糖凝胶G-75两步柱层析,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得了电泳纯的金黄色葡萄球菌肠毒素B。实验证明,该简化的二步柱层析分离得到的SEB纯度高,方法简便易行,一般实验室均可采用。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 分离纯化
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金黄色葡萄球菌肠毒素B对脐静脉内皮细胞凋亡的影响 被引量：1
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作者 刘婷婷 朱琍燕 +3 位作者 管俊昌 马丽娜 闵宏林 李凤云 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第4期607-609,共3页
目的观察金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导脐静脉内皮细胞的凋亡效应。方法用不同浓度SEB感染脐静脉内皮细胞(HUVEC)2、4、8与12h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果SEB各浓度均可诱导HUVEC发生凋亡,与对照组比较差异有高度统计学意义(... 目的观察金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导脐静脉内皮细胞的凋亡效应。方法用不同浓度SEB感染脐静脉内皮细胞(HUVEC)2、4、8与12h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果SEB各浓度均可诱导HUVEC发生凋亡,与对照组比较差异有高度统计学意义(P<0.01)。当SEB浓度为5μg/ml时诱导细胞凋亡的能力最强;5μg/mlSEB作用HUVEC细胞2h后,即可诱导细胞产生明显的凋亡,且随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加(P<0.01)。结论SEB可以诱导脐静脉内皮细胞凋亡,并表现出明显的时间、剂量效应关系,这可能与金葡菌L型垂直感染影响宫内胎儿发育的机制有关。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素b 脐静脉内皮细胞 凋亡
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金葡菌肠毒素B对家兔脏器功能的影响 被引量：1
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作者 施志国 于勇 +4 位作者 姚咏明 于燕 陆连荣 常国友 马诺山 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期189-190,共2页
金葡菌肠毒素Ｂ对家兔脏器功能的影响施志国于勇姚咏明于燕陆连荣常国友马诺山（解放军三零四医院创伤外科中心，北京１０００３７）革兰氏阳性菌感染引起的脓毒性休克在临床上时有发生，革兰氏阳性菌外毒素，如金葡菌中毒性休克毒素Ⅰ... 金葡菌肠毒素Ｂ对家兔脏器功能的影响施志国于勇姚咏明于燕陆连荣常国友马诺山（解放军三零四医院创伤外科中心，北京１０００３７）革兰氏阳性菌感染引起的脓毒性休克在临床上时有发生，革兰氏阳性菌外毒素，如金葡菌中毒性休克毒素Ⅰ和肠毒素等都可以引起这类严重的休克... 展开更多
关键词 脏器功能 肠毒素b 金葡菌 革兰氏阳性菌感染 外毒素 家兔 中毒性休克毒素 一氧化氮 血浆内毒素 脓毒症
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