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HEPN1过表达慢病毒的构建及对人泌乳素型垂体瘤细胞的影响 被引量：4
1
作者 冯杰 夏祥国 +4 位作者 陈礼刚 陈锐 江勇 张彪 宋志富 《东南大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2017年第3期409-416,共8页
目的:构建肝细胞癌下调蛋白-1(HEPN1)过表达慢病毒,观察其对人泌乳素型垂体瘤细胞HPAs HEPN1、caspase-3、Bax和Bcl-2表达以及细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:构建p CHD-HEPN1重组质粒,转染HEK293T细胞进行病毒包装,再感染HPA... 目的:构建肝细胞癌下调蛋白-1(HEPN1)过表达慢病毒,观察其对人泌乳素型垂体瘤细胞HPAs HEPN1、caspase-3、Bax和Bcl-2表达以及细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:构建p CHD-HEPN1重组质粒,转染HEK293T细胞进行病毒包装,再感染HPAs细胞,实验分HEPN1组、空质粒组和空白组3组,采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹法检测HEPN1、caspase-3、Bax和Bcl-2表达,噻唑蓝比色法、流式细胞术、细胞侵袭和划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移。结果:HEPN1组和空质粒组感染效率分别为90.3%和92.5%。与空质粒组及空白组比较,HEPN1组HEPN1、caspase-3和Bax的mRNA表达上调(P<0.05),Bcl-2的mRNA表达下调(P<0.05);HEPN1、caspase-3和Bax蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05);细胞总凋亡率增加(P<0.05),穿膜细胞数目减少(P<0.05),细胞迁移距离缩短(P<0.05)。结论:HEPN1过表达慢病毒可上调HPAs细胞HEPN1、Bax和caspase-3表达,下调Bcl-2表达,抑制细胞增殖,促进其凋亡,降低其侵袭和迁移能力。 展开更多
关键词 肝细胞癌下调蛋白-1 慢病毒 垂体瘤
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微小RNA-18a-3p靶向调控HEPN1及对骨肉瘤细胞迁移侵袭的影响 被引量：3
2
作者 李涛 李娜 +1 位作者 李佳 王磊 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2020年第5期412-417,共6页
目的探讨微小RNA-18a-3p(miR-18a-3p)对肝细胞癌下调蛋白1(HEPN1)的靶向调控作用及对骨肉瘤(OS)细胞侵袭迁移的影响。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)的GEO数据库中下载基因表达谱OS样本数据集GSE65071的series matrix数据,分析O... 目的探讨微小RNA-18a-3p(miR-18a-3p)对肝细胞癌下调蛋白1(HEPN1)的靶向调控作用及对骨肉瘤(OS)细胞侵袭迁移的影响。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)的GEO数据库中下载基因表达谱OS样本数据集GSE65071的series matrix数据,分析OS患者和健康对照的血浆miR-18a-3p水平;采用实时定量PCR检测OS细胞MG63和成骨细胞hFOB 1.19的miR-18a-3p和HEPN1 mRNA水平,Western blotting检测HEPN1蛋白水平;脂质体介导miR-18a-3p抑制物转染MG63细胞(Inhibitor组),同时设NC组(转染阴性对照序列)和对照组(仅予脂质体处理而未行转染),活细胞计数(CCK-8)法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数以评估增殖和迁移侵袭能力,构建pmirGLO载体并借助双荧光素酶报告检测系统验证miR-18a-3p与HEPN1间的靶向关系。结果GSE65071数据集显示,20例OS患者的血浆miR-18a-3p水平为7.262±0.494,高于15例健康对照的6.005±0.081(P<0.05)。与hFOB 1.19细胞相比,MG63细胞的miR-18a-3p水平升高至3.361±0.257,而HEPN1 mRNA水平降低至0.571±0.068,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组和NC组相比,Inhibitor组的miR-18a-3p水平降低,而HEPN1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-18a-3p模拟物可抑制转染野生型HEPN13′端非翻译区质粒的细胞相对荧光素酶活性(P<0.05),但对转染突变型质粒的细胞无影响(P>0.05)。与对照组和NC组相比,Inhibitor组转染后24 h的增殖活力有降低趋势(P>0.05),而转染48~96 h的增殖活力降低(P<0.05);Inhibitor组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(22.339±4.172)%和(153.673±7.570)个,均低于对照组的(63.007±3.841)%和(365.336±10.772)个及NC组的(65.670±3.101)%和(366.335±13.596)个(P<0.05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-18a-3p在OS中高表达且发挥促癌的作用,下调其表达可抑制OS细胞的增殖和迁移侵袭能力,可� 展开更多
关键词 骨肉瘤 微小RNA-18a-3p 迁移 侵袭 肝细胞癌下调蛋白1
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