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CENPK基因过表达载体的构建及鉴定 被引量：2
1
作者 吴伟刚 刘妙娜 +4 位作者 刘利平 刘琢冰 刘威龙 陈心春 周伯平 《中国肿瘤》 CAS 2015年第6期505-509,共5页
[目的]构建着丝粒蛋白K(cetromere protein K,CENPK)基因过表达载体,并对其在肝癌FOCUS细胞中的表达进行鉴定。[方法]1从人肝癌组织中扩增出CENPK目的基因并将其克隆到p CMV-3Tag-3载体上,构建真核表达载体p CMV-CENPK;2利用脂质体法将... [目的]构建着丝粒蛋白K(cetromere protein K,CENPK)基因过表达载体,并对其在肝癌FOCUS细胞中的表达进行鉴定。[方法]1从人肝癌组织中扩增出CENPK目的基因并将其克隆到p CMV-3Tag-3载体上,构建真核表达载体p CMV-CENPK;2利用脂质体法将构建好的p CMV-CENPK真核表达载体转染肝癌FOCUS细胞,并用G418筛选出CENPK基因稳定过表达的肝癌FOCUS细胞株;3通过Real-time PCR及Western Blot的方法对筛选出来的细胞进行鉴定。[结果]1经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体p CMV-CENPK。2通过Real-time PCR及Western blot的方法鉴定,CENPK基因在筛选出来的肝癌FOCUS细胞株中成功过表达。[结论]成功构建真核表达载体p CMV-CENPK并使其在肝癌FOCUS细胞中稳定过表达,为进一步研究CENPK基因在肝癌发生发展中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 CENPK基因 过表达 真核表达载体 肝癌focus细胞
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