慢病毒载体介导SHIP基因抑制K562细胞增殖及对PI3K/Akt信号通路的调控 被引量：2

1

作者 杨琳 罗建民 +3 位作者 刘小军 温树鹏 杜行严 姚丽 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第4期366-372,共7页

背景与目的:SHIP基因主要表达于造血细胞,通过降解PIP3抑制PI3K/Akt信号通路而在造血细胞增殖和存活中起重要负调控作用。本研究通过慢病毒载体介导SHIP基因转染K562细胞,探讨SHIP基因改变及功能丢失与白血病发病的关系。方法:将携带SHI... 背景与目的:SHIP基因主要表达于造血细胞,通过降解PIP3抑制PI3K/Akt信号通路而在造血细胞增殖和存活中起重要负调控作用。本研究通过慢病毒载体介导SHIP基因转染K562细胞,探讨SHIP基因改变及功能丢失与白血病发病的关系。方法:将携带SHIP基因的慢病毒感染K562细胞,FQ-PCR法检测SHIP转录水平,Westernblot法检测转染后SHIP蛋白表达及Akt磷酸化水平的变化;比较SHIP基因表达前后细胞增殖、形态的变化。结果:K562细胞中SHIP蛋白阴性。以携带SHIP基因的慢病毒载体转染K562细胞后,细胞增殖抑制率升高,K562-wtSHIP-FIV-G细胞的增殖抑制率由转染第3天的(9.9±1.5)%升到第5天的(40.6±2.3)%;伴有Akt磷酸化水平明显减弱;转染后,K562-wtSHIP-FIV-G组细胞p-Akt的表达水平由0.533降低到0.245(P<0.01),细胞增殖明显被抑制。此外,SHIP蛋白还能使K562细胞出现凋亡特征,Hoechst33342染色结果转染wtSHIP基因组K562细胞第5天早期凋亡率[(38.3±4.3)%]明显高于K562-FIV-G组细胞[(8.2±0.9)%]和未转染组K562细胞[(7.7±0.8)%]。结论:SHIP基因具有重要的抑制细胞增殖和促进凋亡的能力,SHIP基因缺失导致K562细胞PI3K/Akt信号途径失调,促进K562细胞增殖。 展开更多

关键词 基因 肌醇5’磷酸酶 慢病毒载体 细胞增殖 磷酸化蛋白激酶B 细胞凋亡

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外源性肌醇5′磷酸酶对K562细胞增殖及凋亡的影响

2

作者 杨琳 罗建民 +4 位作者 杜行严 杨敬慈 刘晓军 温树鹏 成志勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第15期1467-1470,共4页

目的通过慢病毒载体介导外源性5′肌醇磷酸酶(SH2domain contaihing inositol5′-phosphatase,SHIP)基因转染K562细胞,探讨ship基因对K562细胞生长增殖的影响。方法以白血病细胞株K562为研究对象,将携带ship基因的慢病毒感染K562细胞,FQ... 目的通过慢病毒载体介导外源性5′肌醇磷酸酶(SH2domain contaihing inositol5′-phosphatase,SHIP)基因转染K562细胞,探讨ship基因对K562细胞生长增殖的影响。方法以白血病细胞株K562为研究对象,将携带ship基因的慢病毒感染K562细胞,FQ-PCR方法检测ship转录水平,Western blot方法检测转染后SHIP蛋白表达变化;比较ship基因表达前后细胞增殖、形态的变化。结果FQ-PCR和Western blot结果显示,携带ship基因的慢病毒载体pReceiver-Lv31能高效转染K562细胞,阳性率(74.6±5.8)%;细胞生长曲线显示SHIP可显著抑制K562细胞生长,抑制率(35.0±3.1)%;集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[K562/SHIP组集落形成率(36.7±7.1)%,K562/FIV组为(77.7±6.3)%,(P<0.05)];细胞形态观察发现凋亡增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡。结论外源性ship基因表达抑制白血病细胞系K562的增殖活性,并促进其凋亡。 展开更多

关键词 基因 肌醇5’磷酸酶 慢病毒载体 细胞增殖 细胞凋亡

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外源性SHIP基因表达抑制生长因子介导的K562细胞增殖及Akt磷酸化

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作者 杨琳 罗建民 +4 位作者 温树鹏 刘小军 姚丽 杨敬慈 杜行严 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期269-274,共6页

【目的】探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用,阐明SHIP对K562细胞作用的机制。【方法】将慢病毒质粒pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞;转染细胞与IL-3共培养,Western blot法检测K562细胞Akt磷酸化;观... 【目的】探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用,阐明SHIP对K562细胞作用的机制。【方法】将慢病毒质粒pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞;转染细胞与IL-3共培养,Western blot法检测K562细胞Akt磷酸化;观察转染野生型SHIP基因对K562细胞增殖的影响;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺失末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡。【结果】重组慢病毒载体pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞,GFP阳性率为74.6%。野生型SHIP基因阻断了IL-3对K562细胞的增殖作用,对照组(K562/FIV)细胞增殖抑制率(3.26%)明显低于转染SHIP基因组细胞增殖抑制率(26.42%,P<0.05);集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[IL-3作用组K562/SHIP细胞形成集落为60.3±6.6,明显低于IL-3诱导的K562/FIV组(91.7±4.2)](P<0.01)。细胞形态观察发现凋亡增加,Western blot检测发现转染SHIP基因组前凋亡酶pro-caspase-3降解增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡。IL-3作用不同时间段(3h,6h,12h),转染野生型SHIP组细胞增殖明显减弱,且Akt磷酸化水平均低于对照组(P<0.05)。【结论】SHIP基因负调控生长因子(IL-3)介导的K562细胞增殖及其蛋白激酶活化。 展开更多

关键词 基因 肌醇5’磷酸酶 慢病毒载体 细胞增殖 磷酸化蛋白激酶B 生长因子

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附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖和miR-155表达的影响 被引量：10

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作者 覃万莉 徐玉洁 +6 位作者 潘真真 李小翚 王振华 宋健平 徐勤 黄新安 李常青 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第14期29-35,共7页

目的:观察附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖的影响,研究附子汤对miR-155表达的影响并进一步探讨其抗类风湿性关节炎的作用机制。方法:体外培养MH7A细胞,设空白组、附子汤高剂量组(25 g·L^(-1))、低剂量组(12.5 g·... 目的:观察附子汤对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞MH7A增殖的影响,研究附子汤对miR-155表达的影响并进一步探讨其抗类风湿性关节炎的作用机制。方法:体外培养MH7A细胞,设空白组、附子汤高剂量组(25 g·L^(-1))、低剂量组(12.5 g·L^(-1))和硫酸羟氯喹阳性药组(0.00625 g·L^(-1)),采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)试剂盒法检测细胞增殖,流式细胞术检测MH7A细胞周期的改变;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测药物处理后miR-155及其下游基因含SH2结构域的肌醇5-磷酸酶-1(SHIP-1)、蛋白激酶B3(Akt3)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt3和mTOR的蛋白表达。结果:附子汤体外在质量浓度6.25 g·L^(-1)以上时,能明显抑制MH7A增殖,且呈明显的量-效关系和时-效关系。与空白组比较,附子汤高、低剂量组G2/M期细胞比例均明显增加(P<0.05),高剂量组G0/G1期细胞比例明显降低(P<0.05),其细胞周期的阻滞作用呈明显的量效关系。与空白组比较,附子汤高、低剂量组miR-155的表达均明显下调(P<0.05);附子汤高剂量组SHIP1 mRNA表达明显上调、Akt3 mRNA表达明显下调(P<0.05),附子汤高、低剂量组mTOR mRNA表达均明显下调(P<0.05)。与空白组比较,附子汤高、低剂量组的PI3K、Akt3和mTOR的蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论:附子汤对MH7A细胞增殖具有显著的抑制作用,作用机制与下调miR-155的表达,从而促进SHIP-1的表达,抑制其下游PI3K/Akt3/mTOR信号通路的基因表达有关。 展开更多

关键词 附子汤 类风湿性关节炎 MH7A细胞 MIR-155 肌醇5-磷酸酶-1(SHIP-1) 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B3(Akt3)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路

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SHIP1调控STAT3信号通路对白血病Jurkat细胞活力和凋亡的影响 被引量：6

5

作者 方鹏 张诺芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期87-93,共7页

目的:探讨含SH2结构域的肌醇5-磷酸酶1(SHIP1)通过调控信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路对人白血病细胞活力和凋亡的影响。方法:以白血病Jurkat细胞为研究对象,将转染空载体和SHIP1过表达载体的细胞分别记为阴性对照(NC)组和SHIP... 目的:探讨含SH2结构域的肌醇5-磷酸酶1(SHIP1)通过调控信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路对人白血病细胞活力和凋亡的影响。方法:以白血病Jurkat细胞为研究对象,将转染空载体和SHIP1过表达载体的细胞分别记为阴性对照(NC)组和SHIP1组,同时以不作处理的细胞为空白对照(control)组,用real-time PCR和Western blot检测转染效果,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化的caspase-3(cleaved caspase-3)、STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白水平。同时,用STAT3信号通路抑制剂AG490作用于control组和SHIP1组细胞,分别记为control+AG490组和SHIP1+AG490组,再观测上述指标的变化。结果:分别与control组和NC组比较,SHIP1组SHIP1的mRNA表达水平和蛋白水平均显著升高(P<0.05);细胞存活率显著降低(P<0.05);细胞凋亡率显著升高(P<0.05);cleaved caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05);p-STAT3蛋白水平显著降低(P<0.05)。分别与control组和control+AG490组比较,SHIP1+AG490组的细胞存活率显著降低(P<0.05);cleaved caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05);p-STAT3蛋白水平显著降低(P<0.05);细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:SHIP1能够通过抑制STAT3信号通路抑制人白血病细胞生长,促进白血病细胞凋亡。 展开更多

关键词 白血病 含SH2结构域的肌醇5-磷酸酶1 细胞活力 细胞凋亡 STAT3信号通路

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磷脂酰肌醇-4-磷酸酯代谢酶及抑制剂研究进展

6

作者 李艳平 李晨 《中国药业》 CAS 2022年第19期117-123,共7页

目的了解磷脂酰肌醇-4-磷酸酯(PI4P)代谢酶及抑制剂的研究进展,为PI4P信号通路相关靶点药物的研发提供参考。方法对作用于PI4P的6种代谢酶的基本情况、对疾病的影响及典型抑制剂的应用进行总结,并分析现有研究中仍待解决的问题,探讨PI4... 目的了解磷脂酰肌醇-4-磷酸酯(PI4P)代谢酶及抑制剂的研究进展,为PI4P信号通路相关靶点药物的研发提供参考。方法对作用于PI4P的6种代谢酶的基本情况、对疾病的影响及典型抑制剂的应用进行总结,并分析现有研究中仍待解决的问题,探讨PI4P代谢酶及抑制剂作为相关疾病治疗靶点的可能性。结果PI4P是一种膜甘油磷脂,由磷脂酰肌醇(PtdIns)4位羟基磷酸化生成;是高尔基体膜的关键功能成分,在囊泡运输和信号传导中不可或缺。尽管对PI4P的生理作用已有深入研究,但对PI4P的代谢调控知之甚少。PI4P代谢酶在肿瘤方面的研究较多,发现磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)高表达与多种肿瘤的恶化有关,目前已有4种PI3K抑制剂作为抗肿瘤药物被批准上市。结论PI4P代谢酶除了能调控肿瘤的进展外,还参与炎症激活、病毒及疟疾感染、阿尔茨海默病等临床常见疾病的发生与发展,但相关研究多停留在基础实验阶段,相关抑制剂可能是治疗上述疾病的有效方法。 展开更多

关键词 磷脂酰肌醇-4-磷酸酯 磷脂酰肌醇-4-激酶 磷脂酰肌醇磷酸酶1 磷脂酰肌醇-4-磷酸-5-激酶 磷酸肌醇5-磷酸酶 磷脂酰肌醇-3-激酶 磷酸酶和张力蛋白同源物

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藜磷酸肌醇5-磷酸酶基因(CaP5P)的表达分析和胁迫响应检测

7

作者 贺转转 谷丽丽 +1 位作者 李秀明 兰海燕 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期731-737,共7页

植物通过多种信号途径感知外界环境变化,从而引发一系列的信号级联反应,其中磷脂信号途径起着重要的作用。本研究从藜盐胁迫差减文库中获得了一个EST05序列,利用RT-PCR检测了其在非生物胁迫下表达趋势,显示EST05序列在非生物胁迫下的表... 植物通过多种信号途径感知外界环境变化,从而引发一系列的信号级联反应,其中磷脂信号途径起着重要的作用。本研究从藜盐胁迫差减文库中获得了一个EST05序列,利用RT-PCR检测了其在非生物胁迫下表达趋势,显示EST05序列在非生物胁迫下的表达有升高。随后利用RACE技术获得其全长编码序列,测序结果显示其与蓖麻(Ricinus communis)的磷酸肌醇5-磷酸酶基因(P5P)的同源性达56%,遂将其命名为CaP5P。最后过量表达CaP5P在拟南芥中初步验证了功能,转基因植株表现对盐胁迫耐受性降低的趋势,呈现负调控的特征。本研究对磷酸肌醇5-磷酸酶基因功能的初步研究为磷脂信号途径中负调控组分的分析提供了参考依据。 展开更多

关键词 藜 磷酸肌醇5-磷酸酶 胁迫响应 负调控 表达分析

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SHIP在炎症性肠病结肠组织中的表达及其临床意义

8

作者 蒋巍亮 曾悦 +5 位作者 卢战军 肖军华 郑萍 万荣 王兴鹏 杨丽娟 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第21期4045-4048,4066,共5页

目的:观察SHIP在溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)患者结肠组织标本中的表达情况,探讨其在炎症性肠病发生过程中所起的作用及意义。方法:收集活动期UC患者,活动期CD患者,及结直肠癌旁正常粘膜组织(NC组)标本各20例。将活检标本进行苏木精... 目的:观察SHIP在溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)患者结肠组织标本中的表达情况,探讨其在炎症性肠病发生过程中所起的作用及意义。方法:收集活动期UC患者,活动期CD患者,及结直肠癌旁正常粘膜组织(NC组)标本各20例。将活检标本进行苏木精-伊红染色及SHIP免疫组化染色观察;利用Western blot半定量比较分析SHIP蛋白表达及组间差异;Real-time RT-PCR分析SHIP在RNA水平的表达情况和组间差异。统计学处理采用Student's t检验。结果:免疫组化染色示UC组SHIP阳性表达积分为(7.20±2.53),CD组积分为(6.50±2.76),对照组积分为(1.10±0.74)。t检验组间比较UC组和CD组无统计学差异(t=0.59,P>0.05);而UC组与NC组(t=7.32,P<0.05),CD组与NC组(t=5.98,P<0.05),差异均有统计学意义。Western blot检测结肠组织SHIP表达,UC组SHIP相对表达量为(0.314±0.021),CD组(0.301±0.019),NC组(0.163±0.027)。UC和CD组表达无差异(t=1.44,P>0.05),而UC组,CD组与NC组相比表达明显升高(t=13.88、13.16,P均<0.05)。Real-time RT PCR检测UC组结肠粘膜SHIP m RNA相对表达量为(0.649±0.028),CD组为(0.645±0.021),NC组为(0.140±0.015)。同样,UC组与CD组没有统计学差异,而其相较对照组表达均升高(P<0.05)。结论:炎症性肠病患者结肠组织SHIP表达明显高于正常结肠组织,但其在溃疡性结肠炎和克罗恩病间没有明显差异;提示SHIP可能在炎症性肠病的发病中发挥重要作用。 展开更多

关键词 炎症性肠病 溃疡性结肠炎 克罗恩病 SHIP(含SH2结构域的肌醇5’磷酸酶)

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黄瓜的一个中短果突变体基因的初步定位 被引量：4

9

作者 程凤 宋蒙飞 +4 位作者 曹蕾 张孟茹 杨志歌 陈劲枫 娄群峰 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1359-1370,共12页

中短果(medium short-fruit)突变体msf黄瓜为种植‘长春密刺’黄瓜自交系的过程中发现的1株自然突变材料,表现为果实长度以及果把长度相对野生型偏短,还表现出植株偏矮,侧枝发育异常,以及主茎脆弱等表型。通过石蜡切片和扫描电镜观察发... 中短果(medium short-fruit)突变体msf黄瓜为种植‘长春密刺’黄瓜自交系的过程中发现的1株自然突变材料,表现为果实长度以及果把长度相对野生型偏短,还表现出植株偏矮,侧枝发育异常,以及主茎脆弱等表型。通过石蜡切片和扫描电镜观察发现突变体果实长度的差异是由于细胞变小引起的。遗传分析发现F 2分离群体中野生型表型长果与突变体表型中短果的分离比符合孟德尔3:1遗传定律,表明msf突变性状为单基因控制的隐性性状。BSA-seq(Bulked Segregant Analysis Coupled with Whole-Genome Sequencing)分析将候选基因定位于黄瓜基因组1号染色体26.7~30.9 Mb区域内。利用437株中短果和‘hazerd’(欧洲温室型短果)杂交的F 2群体将基因定位在28.4~29.8 Mb之间的1.4 Mb区间内。结合dCAPS标记验证将CsaV3_1G044310作为候选基因,该基因编码拟南芥Ⅱ形肌醇多磷酸5–磷酸酶(Ⅱ型5PTase)同源蛋白。通过基因定量表达和内源激素生长素和赤霉素的测定进一步表明该突变体中Ⅱ型肌醇多磷酸5–磷酸酶表达缺陷可能引起激素水平的变化从而影响植株的生长发育。 展开更多

关键词 黄瓜 果实长度 突变体 基因定位 Ⅱ型肌醇多磷酸5–磷酸酶

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人脑胶质瘤组织中多磷酸肌醇-5-磷酸酶B的表达及临床意义 被引量：2

10

作者 姚开场 胡致远 +2 位作者 杨力权 高尚锋 于如同 《中国医药》 2022年第10期1505-1509,共5页

目的探讨多磷酸肌醇-5-磷酸酶B(INPP5B)在人脑胶质瘤组织中的表达情况及临床意义。方法收集2016年2月至2021年8月徐州医科大学附属医院手术切除的脑胶质瘤组织标本,另选取同一时期颅脑外伤患者切除的新鲜脑组织作为非瘤脑组织标本,共收... 目的探讨多磷酸肌醇-5-磷酸酶B(INPP5B)在人脑胶质瘤组织中的表达情况及临床意义。方法收集2016年2月至2021年8月徐州医科大学附属医院手术切除的脑胶质瘤组织标本,另选取同一时期颅脑外伤患者切除的新鲜脑组织作为非瘤脑组织标本,共收集冷冻标本24例(非瘤脑组织6例、脑胶质瘤组织18例)、石蜡标本50例(非瘤脑组织10例、脑胶质瘤组织40例)。收集并分析美国肿瘤基因组图谱数据(TCGA)、中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)和GSE16011数据库胶质瘤数据集中正常脑组织和不同世界卫生组织(WHO)分级胶质瘤组织INPP5B mRNA表达情况以及不同异柠檬酸脱氢酶(IDH)分型胶质瘤组织INPP5B mRNA表达情况。采用蛋白质印迹法检测本院冷冻标本INPP5B蛋白表达量,免疫组织化学法检测石蜡标本INPP5B阳性细胞率。分析CGGA中脑胶质瘤患者及本院石蜡标本脑胶质瘤患者的生存情况。结果TCGA和CGGA中,WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级脑胶质瘤组织INPP5B mRNA表达量呈递增趋势(均P<0.01);GSE16011数据库中,WHOⅢ级、Ⅳ级脑胶质瘤组织INPP5B mRNA表达量均高于WHOⅡ级(均P<0.05)。TCGA及CGGA中,IDH突变型胶质瘤组织INPP5B mRNA表达量均低于IDH野生型(均P<0.001)。本院收集的冷冻标本中,WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级脑胶质瘤INPP5B蛋白表达量逐渐上升,但非瘤脑组织及各WHO分级脑胶质瘤组织组间比较差异无统计学意义(P=0.494)。本院收集的石蜡标本中,WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级脑胶质瘤组织INPP5B阳性细胞率呈递增趋势[(24±13)%、(39±20)%、(53±23)%],且均高于非瘤脑组织[(23±10)%](均P<0.01);IDH突变型脑胶质瘤组织INPP5B阳性细胞率低于IDH野生型,但差异无统计学意义(P=0.321)。CGGA中,INPP5B mRNA高表达WHOⅡ级、Ⅲ级脑胶质瘤患者累积生存率低于低表达患者(P<0.001、P=0.001);本院收集的石蜡标本中,INPP5B高表达WHOⅡ~Ⅳ级患者累积生存率低于低表达患者,但差 展开更多

关键词 脑胶质瘤 多磷酸肌醇-5-磷酸酶B 世界卫生组织分级 生存分析

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SHIP2在喉鳞状细胞癌中的表达及意义 被引量：2

11

作者 周小娟 张俊杰 +1 位作者 谭国林 刘勇 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 2011年第5期321-326,共6页

目的探讨含SH2结构域的Ⅱ型5’肌醇磷酸酶2(SH2 domain containing 5’-inosi-tol phosphatase-2,SHIP 2)蛋白在喉鳞状细胞癌(喉鳞癌)组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法应用免疫组织化学技术检测SHIP2蛋白在54例喉鳞癌组... 目的探讨含SH2结构域的Ⅱ型5’肌醇磷酸酶2(SH2 domain containing 5’-inosi-tol phosphatase-2,SHIP 2)蛋白在喉鳞状细胞癌(喉鳞癌)组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法应用免疫组织化学技术检测SHIP2蛋白在54例喉鳞癌组织及16例喉癌旁黏膜组织中的表达。结果 SHIP2蛋白在喉鳞癌组织中表达显著升高,其表达与喉鳞癌T分期、临床分期、转移及复发密切相关(P<0.05);生存分析表明SHIP2高表达组与低表达组患者5年无瘤生存率分别为19.2%和64.3%,5年总生存率分别为26.9%和85.7%,两组差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析示SHIP2表达水平为喉鳞癌预后的独立影响因素。结论 SHIP 2蛋白可能在喉鳞癌的发生、发展中发挥了重要作用,且具有预后评估价值。 展开更多

关键词 喉肿瘤 癌 含SH2结构域的Ⅱ型肌醇5’-磷酸酶2 转移 免疫组化

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FLAG-PIPP^(H557A)在小鼠1-细胞期受精卵中对PKB/Akt表达的调节作用 被引量：2

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作者 邓欣 潘学风 +1 位作者 李亘松 于秉治 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期359-363,408,共6页

目的:研究富含脯氨酸的肌醇多磷酸5-磷酸酶(proline-rich inositol polyphosphate 5-phosphatase,PIPP)在组氨酸557位点突变为丙氨酸(FLAG-PIPPH557A)时对小鼠受精卵中磷酸化苏氨酸蛋白激酶(pAkt)的影响。方法:将FLAG-PIPPH557A、FLAG-P... 目的:研究富含脯氨酸的肌醇多磷酸5-磷酸酶(proline-rich inositol polyphosphate 5-phosphatase,PIPP)在组氨酸557位点突变为丙氨酸(FLAG-PIPPH557A)时对小鼠受精卵中磷酸化苏氨酸蛋白激酶(pAkt)的影响。方法:将FLAG-PIPPH557A、FLAG-PIPP以及FLAG vector重组质粒转染到小鼠受精卵,用蛋白印记、免疫荧光染色以及活性检测方法分析FLAG-PIPPH557A对小鼠受精卵中丝氨酸(Ser)473位点磷酸化的苏氨酸蛋白激酶(pAkt Ser473)表达、定位以及活性的影响。结果:FLAG-PIPPH557A在小鼠受精卵中对pAkt Ser473的表达和活性的调节作用明显低于FLAG-PIPP的作用,两者间有显著差异(P<0.001);而且在小鼠受精卵中FLAG-PIPPH557A不能调节pAktSer473在细胞膜的定位。结论:PIPPH557A在小鼠1-细胞期受精卵中可以通过改变PIPP的活性,影响pAkt Ser473的表达、定位以及活性。 展开更多

关键词 组氨酸557位点突变为丙氨酸的富含脯氨酸的肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPPH557A) 小鼠受精卵 丝氨酸(Ser)473位点磷酸化的苏氨酸蛋白激酶(pAktSer473)

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SHIP1基因过表达非小细胞肺癌细胞系的建立及其对细胞增殖能力的影响 被引量：1

13

作者 陶星宇 付桥粉 +1 位作者 王莹 宋鑫 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期680-686,共7页

目的:观察SHIP1对NSCLC细胞增殖的影响。方法:由NCBI Gene数据库查询获得人SHIP1基因CDS区,插至载体p TSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP,构建SHIP1真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1和PC-9细胞... 目的:观察SHIP1对NSCLC细胞增殖的影响。方法:由NCBI Gene数据库查询获得人SHIP1基因CDS区,插至载体p TSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP,构建SHIP1真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1和PC-9细胞株,获得SHIP1稳定过表达NSCLC细胞系。Western blotting和q RT-PCR分别从蛋白水平和m RNA水平检测SHIP1的表达变化。采用MTT法和克隆形成实验检测过表达SHIP1的PC-9细胞增殖活力和克隆形成能力。Western blotting检测AP-1蛋白复合体各组分的表达。结果:SHIP1真核过表达质粒经测序证实构建成功。稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与阴性对照组比较,细胞中SHIP1在m RNA(P<0.01)及蛋白水平均明显升高。在PC-9细胞中,过表达SHIP1使细胞增殖、克隆形成能力降低(均P<0.01),p-c-Jun、Fos B等表达降低。结论:成功构建了稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞模型;过表达SHIP1可通过抑制AP-1家族蛋白抑制NSCLC细胞增殖能力。 展开更多

关键词 多磷酸肌醇-5-磷酸酶 非小细胞肺癌 基因重组 稳定过表达 细胞增殖

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SHIP2、EGFL7表达与肺癌患者临床病理参数及预后的关系

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作者 陈慧芬 谢艳萍 +1 位作者 梁亦贤 朱文娟 《现代实用医学》 2023年第8期1015-1018,共4页

目的探讨肺癌组织含SH2结构域的Ⅱ型肌醇5’-磷酸酶(SHIP2)、类表皮生长因子域7(EGFL7)表达与肺癌患者临床病理参数及预后的关系。方法回顾性收集湖州市第一人民医院2019年1-12月收治的76例肺癌患者,均以免疫组织化学SP法检测组织中SHIP... 目的探讨肺癌组织含SH2结构域的Ⅱ型肌醇5’-磷酸酶(SHIP2)、类表皮生长因子域7(EGFL7)表达与肺癌患者临床病理参数及预后的关系。方法回顾性收集湖州市第一人民医院2019年1-12月收治的76例肺癌患者,均以免疫组织化学SP法检测组织中SHIP2、EGFL7蛋白的表达情况,采用Kaplan-Meier法和多变量Cox回归分析SHIP2、EGFL7与肺癌患者预后的关系。结果肺癌组织中SHIP2、EGFL7蛋白高表达率均高于癌旁组织(均P<0.05);SHIP2、EGFL7高表达与低表达组TNM分期、淋巴结转移差异均有统计学意义(均P<0.05);SHIP2、EGFL7高表达组3年生存率均低于低表达组(均P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、SHIP2及EGFL7高表达均为影响肺癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论肺癌患者癌组织中SHIP2、EGFL7均为高表达,并与TNM分期及淋巴结转移有关,是影响预后的独立危险因素。 展开更多

关键词 肺癌 含SH2结构域的Ⅱ型肌醇5'-磷酸酶 类表皮生长因子域7 预后

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应用酵母双杂交系统筛选人胃黏膜上皮组织SHIP2的相互作用蛋白 被引量：1

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作者 徐良 钱学艺 +3 位作者 任林 邵玉玲 李允允 叶艳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1000-1007,共8页

目的通过酵母双杂交系统筛选人胃黏膜上皮组织标准均一化cDNA文库,寻找与含Src同源蛋白2肌醇-5-磷酸酶2(SHIP2)相互作用的蛋白。方法利用酵母双杂交系统,以SHIP2的P1(SH2+5-Ptase)和P2(PRD+SAM)段作为诱饵蛋白,筛选出人胃黏膜上皮组织... 目的通过酵母双杂交系统筛选人胃黏膜上皮组织标准均一化cDNA文库,寻找与含Src同源蛋白2肌醇-5-磷酸酶2(SHIP2)相互作用的蛋白。方法利用酵母双杂交系统,以SHIP2的P1(SH2+5-Ptase)和P2(PRD+SAM)段作为诱饵蛋白,筛选出人胃黏膜上皮组织均一化cDNA文库中与SHIP2相互作用的蛋白,并通过免疫共沉淀法进行验证。结果挑选出39个阳性克隆,经测序比对分析,回复性杂交,免疫共沉淀试验验证,最终确定一个与SHIP2相互作用的蛋白抗增殖蛋白1(prohibitin1/PHB)。结论酵母双杂交系统筛选人胃黏膜上皮组织SHIP2的相互作用蛋白PHB。 展开更多

关键词 酵母双杂交系统 胃癌 含Src同源蛋白2肌醇-5-磷酸酶2(SHIP2) 抗增殖蛋白1(prohibitin1/PHB)

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肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP)在人下咽癌组织的表达及临床意义

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作者 王佐周 孙雪霏 +7 位作者 卢敏 刘艳春 关超 刁尧 由源 李亘松 于秉治 邓欣 《解剖科学进展》 CAS 2014年第1期46-48,共3页

目的研究肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP)在人下咽癌中的表达,探讨其临床意义。方法对15例人下咽癌组织学标本和15例正常的癌旁组织进行免疫荧光和免疫印迹检测。结果 PIPP的表达量及荧光强度在下咽癌组织中明显低于正常组织。结论 PIPP在下... 目的研究肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP)在人下咽癌中的表达,探讨其临床意义。方法对15例人下咽癌组织学标本和15例正常的癌旁组织进行免疫荧光和免疫印迹检测。结果 PIPP的表达量及荧光强度在下咽癌组织中明显低于正常组织。结论 PIPP在下咽癌组织中低表达可能为临床提供新的诊断指标。 展开更多

关键词 肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP) 蛋白激酶B(PKB Akt) 人下咽癌

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PIPP^(H557A)对小鼠受精卵有丝分裂期的调节作用

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作者 邓欣 李亘松 +1 位作者 胡庆哲 于秉治 《解剖科学进展》 CAS 2011年第4期378-380,384,共4页

目的研究脯氨酸丰富的肌醇多磷酸5-磷酸酶(proline-rich inositol polyphosphate 5-phosphatase,PIPP)组氨酸557位点突变为丙氨酸时PIPPH557A在小鼠1-细胞期受精卵中对有丝分裂促进因子(MPF)的调节作用。方法将HA-PIPPH557A、HA-PIPP和/... 目的研究脯氨酸丰富的肌醇多磷酸5-磷酸酶(proline-rich inositol polyphosphate 5-phosphatase,PIPP)组氨酸557位点突变为丙氨酸时PIPPH557A在小鼠1-细胞期受精卵中对有丝分裂促进因子(MPF)的调节作用。方法将HA-PIPPH557A、HA-PIPP和/或HAvector转染到小鼠1-细胞期受精卵中,用激酶活性分析法和WesternBlotting方法检测小鼠受精卵中MPF活性以及pCdc2 Tyr15表达的变化。结果 HA-PIPPH557A对小鼠受精卵MPF活性影响较小,但可以降低pCdc2Tyr15的表达,与HA-PIPP的作用不同。结论 HA-PIPPH557A在小鼠受精卵中通过失活PIPP降低pCdc2 Tyr15的表达调节小鼠受精卵的有丝分裂。 展开更多

关键词 组氨酸557位点失活的肌醇多磷酸5-磷酸酶(HA-PIPPH557A) 受精卵 有丝分裂促进因子(Mitosis-Promotion Factor) 小鼠

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HA-PIPP^(H557A)对小鼠受精卵卵裂的影响

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作者 邓欣 张帆 +2 位作者 张国利 李亘松 于秉治 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第5期806-808,共3页

目的研究脯氨酸丰富的肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP)在组氨酸557位点突变为丙氨酸时PIPPH557A对小鼠受精卵卵裂的调节作用。方法将HA-PIPPH557A重组质粒转染到小鼠受精卵中,用免疫荧光染色法检测HA-PIPPH557A对小鼠受精卵卵裂的影响。然后... 目的研究脯氨酸丰富的肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP)在组氨酸557位点突变为丙氨酸时PIPPH557A对小鼠受精卵卵裂的调节作用。方法将HA-PIPPH557A重组质粒转染到小鼠受精卵中,用免疫荧光染色法检测HA-PIPPH557A对小鼠受精卵卵裂的影响。然后使用相差显微镜观察并计数HA-PIPPH557A对受精卵卵裂率的影响。结果 HA-PIPPH557A在小鼠受精卵的有丝分裂过程中对卵裂的调节与PIPP的作用相反。并且他们之间的比较具有显著意义(P<0.001)。结论 PIPPH557A在小鼠受精卵中通过调节PIPP的活性作用干扰受精卵卵裂。 展开更多

关键词 组氨酸557位点突变为丙氨酸的肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPPH557A) 小鼠受精卵 卵裂

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SHIP2通过抑制PI3-K/Akt信号通路降低胰岛素敏感性 被引量：4

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作者 邹力 李法琦 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期62-64,共3页

含SH2结构域的肌醇多磷酸5'-磷酸酶-2(Srchomology 2 domain containing insitol polyphos-phate5'-phosphatase2,SHIP2)负向调节磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B依赖的胰岛素信号通路,降低胰岛素敏感性。SHIP2基因的变异能显著改... 含SH2结构域的肌醇多磷酸5'-磷酸酶-2(Srchomology 2 domain containing insitol polyphos-phate5'-phosphatase2,SHIP2)负向调节磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B依赖的胰岛素信号通路,降低胰岛素敏感性。SHIP2基因的变异能显著改变胰岛素敏感性。抑制内源性SHIP2蛋白或其基因表达,能够提高胰岛素敏感性,从而改善胰岛素抵抗,有可能成为研究胰岛素抵抗相关疾病发病机制和治疗药物开发的新途径。 展开更多

关键词 肌醇多磷酸5’-磷酸酶 基因表达 胰岛素敏感性

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肌醇多磷酸5磷酸酶PIPP在小鼠受精卵内对细胞周期蛋白Cdc2的影响 被引量：2

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作者 李森 王洋 +6 位作者 郑晓娇 刘玲玲 冯晨 俞航 李亘松 曹宇 邓欣 《解剖科学进展》 2018年第4期397-400,共4页

目的研究脯氨酸丰富的肌醇多磷酸5磷酸酶(PIPP)在小鼠1-细胞期胚胎中的定位以及它对Cdc2在Tyr15位点磷酸化的调节作用。方法提取质粒、酶切鉴定并转染PEFBOS PIPP质粒以及空载体PEFBOS vector到小鼠受精卵,用免疫荧光染色检测PIPP的定位... 目的研究脯氨酸丰富的肌醇多磷酸5磷酸酶(PIPP)在小鼠1-细胞期胚胎中的定位以及它对Cdc2在Tyr15位点磷酸化的调节作用。方法提取质粒、酶切鉴定并转染PEFBOS PIPP质粒以及空载体PEFBOS vector到小鼠受精卵,用免疫荧光染色检测PIPP的定位,Western blot检测PIPP对Cdc2在Tyr15位点磷酸化的影响。结果PIPP的定位在小鼠受精卵有丝分裂过程中不断变化,并且PIPP在小鼠受精卵中的过度表达增加了Cdc2在Tyr15位点的磷酸化。结论 PIPP存在于小鼠受精卵中并通过调节Cdc2的磷酸化参与小鼠受精卵的有丝分裂过程。 展开更多

关键词 肌醇多磷酸5磷酸酶(PIPP) 小鼠受精卵 细胞分裂周期2(Cdc2)

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