从大豆基因组DNA中,通过PCR扩增获得Gm Gol S2-2启动子序列(Gm Gol S2-2P),长1 740 bp。预测分析结果显示,Gm Gol S2-2P中共含5种逆境相关顺式作用元件,包括2个水杨酸响应元件、1个茉莉酸甲酯响应元件、6个厌氧诱导元件、2个防御和胁迫...从大豆基因组DNA中,通过PCR扩增获得Gm Gol S2-2启动子序列(Gm Gol S2-2P),长1 740 bp。预测分析结果显示,Gm Gol S2-2P中共含5种逆境相关顺式作用元件,包括2个水杨酸响应元件、1个茉莉酸甲酯响应元件、6个厌氧诱导元件、2个防御和胁迫响应元件和1个MYB转录因子结合位点。构建植物表达载体p CAMBIA1301-GmGolS2-2P,通过叶盘法转化烟草。通过烟草基因组DNA PCR鉴定获得2棵T0代Gm Gol S2-2P转基因烟草植株。GUS组织化学染色和实时荧光定量RT-PCR结果表明,Gm Gol S2-2P在转基因烟草中能够激活GUS报告基因的表达,并且在干旱胁迫下Gm Gol S2-2P的启动活性增强。展开更多
肌醇半乳糖苷合成酶(galactinol synthase,简称GolS)是棉子糖系列寡糖(raffinose family oligosaccharides,简称RFOs)生物合成途径中的关键酶,在植物应对非生物胁迫的过程中发挥着重要作用。通过逆转录(RT)-PCR从大豆叶片cDNA中扩增得...肌醇半乳糖苷合成酶(galactinol synthase,简称GolS)是棉子糖系列寡糖(raffinose family oligosaccharides,简称RFOs)生物合成途径中的关键酶,在植物应对非生物胁迫的过程中发挥着重要作用。通过逆转录(RT)-PCR从大豆叶片cDNA中扩增得到编码肌醇半乳糖苷合成酶的基因GmGolS,再将GmGolS基因构建到原核表达载体pET28上,然后将载体导入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,对其进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalacto pyranoside,简称IPTG)诱导。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)结果表明,在诱导时间为3 h、IPTG浓度为0.1 mmol/L的条件下,可以获得大量重组蛋白,分子量约为40 ku。对表达GmGolS蛋白的大肠杆菌进行抗旱性分析的结果显示,GmGolS基因在大肠杆菌中的过表达降低了重组菌的生活力,使其对干旱胁迫更加敏感。展开更多
文摘从大豆基因组DNA中,通过PCR扩增获得Gm Gol S2-2启动子序列(Gm Gol S2-2P),长1 740 bp。预测分析结果显示,Gm Gol S2-2P中共含5种逆境相关顺式作用元件,包括2个水杨酸响应元件、1个茉莉酸甲酯响应元件、6个厌氧诱导元件、2个防御和胁迫响应元件和1个MYB转录因子结合位点。构建植物表达载体p CAMBIA1301-GmGolS2-2P,通过叶盘法转化烟草。通过烟草基因组DNA PCR鉴定获得2棵T0代Gm Gol S2-2P转基因烟草植株。GUS组织化学染色和实时荧光定量RT-PCR结果表明,Gm Gol S2-2P在转基因烟草中能够激活GUS报告基因的表达,并且在干旱胁迫下Gm Gol S2-2P的启动活性增强。
