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腺相关病毒介导心肌肌浆网钙离子ATP酶2a基因转导对慢性心力衰竭大鼠的短期治疗作用 被引量：3
1
作者 惠海鹏 李小鹰 +3 位作者 刘秀华 鲁晓春 孙胜 刘涛 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期485-488,共4页
目的研究腺相关病毒为载体的心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭(CHF)大鼠的短期治疗作用。方法将大鼠分为4个组:对照组,CHF组,CHF+eGFP组和CHF+SERCA2a组。采用腹主动脉缩窄术建立慢性心力衰竭大鼠模型,应用经腹... 目的研究腺相关病毒为载体的心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭(CHF)大鼠的短期治疗作用。方法将大鼠分为4个组:对照组,CHF组,CHF+eGFP组和CHF+SERCA2a组。采用腹主动脉缩窄术建立慢性心力衰竭大鼠模型,应用经腹心包腔内注射术分别将生理盐水、携带eGFP基因的重组腺相关病毒和携带SERCA2a基因的重组腺相关病毒导入CHF组、CHF+eGFP组和CHF+SERCA2a组大鼠心脏。于导入后10天检测各组大鼠的心脏收缩和舒张功能、SERCA2a蛋白表达水平和活性。结果慢性心力衰竭大鼠心脏内转导入SERCA2a基因10天后,CHF+eGFP组SERCA2a蛋白表达水平和活性较CHF组大鼠明显增加(SERCA2a蛋白表达增加80.7%,活性增加89.9%),但低于对照组大鼠蛋白表达水平(约为对照组的67.6%)和活性水平(约为对照组的77.7%);大鼠的心脏功能随着SERCA2a功能的增强而改善,左室收缩压峰值和左室内压最大下降速率已达到对照组水平,左室舒张末压力和左室内压最大上升速率虽未达到对照组水平,但较CHF组明显改善。结论CHF大鼠心脏SERCA2a蛋白表达水平及活性较对照大鼠明显下降;SERCA2a基因转导对慢性心力衰竭具有良好的短期治疗作用。 展开更多
关键词 慢性心力衰竭 肌浆网钙离子atp酶2a 腺相关病毒 基因治疗
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益心舒胶囊对心力衰竭大鼠心肌细胞钙调控蛋白的影响 被引量：9
2
作者 项昌培 周瑞 +1 位作者 张晶晶 杨洪军 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第20期4984-4990,共7页
在确定益心舒胶囊(Yixinshu Capsules,YXS)治疗心力衰竭(heart failure,HF)的基础上,从心肌细胞钙调控蛋白的角度探究YXS促进心衰大鼠心脏功能恢复的分子机制。将SD大鼠的左冠状动脉前降支结扎4周制备心肌缺血所致的心力衰竭动物模型,... 在确定益心舒胶囊(Yixinshu Capsules,YXS)治疗心力衰竭(heart failure,HF)的基础上,从心肌细胞钙调控蛋白的角度探究YXS促进心衰大鼠心脏功能恢复的分子机制。将SD大鼠的左冠状动脉前降支结扎4周制备心肌缺血所致的心力衰竭动物模型,将大鼠随机分为假手术组(Sham,生理盐水)、模型组(HF,生理盐水)、益心舒胶囊高剂量组(HF+YXS-H,1 600 mg·kg-1·d-1)、益心舒胶囊低剂量组(HF+YXS-L,800 mg·kg-1·d-1)和阳性药缬沙坦组(HF+VST,8 mg·kg-1·d-1),连续灌胃6周后,处死大鼠,取心肌组织,采用实时定量PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹(Western blot)法测定与心肌细胞钙调控相关基因及蛋白的表达。结果显示,与模型组相比,YXS治疗后增强心肌钙调控相关基因Atp2a2,Ryr2,CACNA1C和PRKACA转录水平,并提高p-Ryr2,CACNA1C及SERCA2a蛋白水平,而降低NCX1水平。另一方面,YXS治疗明显降低RIP3及其底物CaMKⅡ蛋白磷酸化水平,并增强了PLB磷酸化表达。综上所述,YXS治疗调节心肌钙调控相关基因及蛋白的表达,同时通过抑制RIP3及其底物CaMKⅡ蛋白磷酸化的水平,并促进PLB上的Ser16残基磷酸化,增加了SERCA2a蛋白表达,表明YXS可能通过CaMKⅡ/PLB/SERCA2a通路调节心肌钙稳态,提高肌浆网钙泵摄钙能力,使细胞内游离Ca2+趋于稳定,从而促进心衰大鼠心脏功能的恢复。该研究揭示了YXS在心力衰竭治疗中可能的作用机制,特别是从干预钙调控蛋白的角度,促进了YXS的临床应用。 展开更多
关键词 心力衰竭 益心舒胶囊 钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ) 心肌肌浆网钙离子atp酶2a(SERCA2a)
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应用Ad Easy腺病毒载体系统构建人肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a) 被引量：1
3
作者 吕茜 魏翠 +2 位作者 张清林 王洁 宫海滨 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第13期2409-2412,共4页
目的:利用Adeasy腺病毒表达系统构建含人肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒。方法:将人SERCA2a基因全长cDNA(3700bp)插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,成功构建pAd-TrackCMVSERCA2a重组... 目的:利用Adeasy腺病毒表达系统构建含人肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒。方法:将人SERCA2a基因全长cDNA(3700bp)插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,成功构建pAd-TrackCMVSERCA2a重组质粒,经PmeI酶切线性化,采用电击法转入到已含Adeasy质粒的电感受态菌BJ5183进行重组。挑选同源重组质粒,PacI酶切线性化转染HEK293细胞包装成重组腺病毒颗粒,荧光检测有绿色荧光蛋白表达。将重组病毒和SD大鼠心肌细胞共培养,western-blot检测SERCA2a可以在大鼠心肌细胞过表达且影响了胞内SERCA2a的活性。结果:成功包装含人SERCA2a基因的重组腺病毒,并可以有效感染SD大鼠心肌细胞。结论:利用新型腺病毒载体在短时间内成功构建了携带有人SERCA2a基因的腺病毒,为以后进一步研究人SERCA2a基因治疗提供了新途径。 展开更多
关键词 AdEasy腺病毒 人肌浆网钙离子atp酶2a(SERCA2a) 转染
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