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家蝇Actin-5 C基因启动子的生物信息学分析及载体构建
1
作者 王蓝晨 王昱 +2 位作者 王颖 杨仕赛 朱贵明 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第3期263-268,274,共7页
目的运用生物信息学分析家蝇(Musca domestica L.)肌动蛋白5 C(Actin-5 C)基因,构建Actin-5 C启动子双荧光素酶报告基因表达载体。方法使用伯克利果蝇基因组计划(BDGP)在线分析软件、Promoter 2.0和在线比对启动子网站(FPROM)等多种启... 目的运用生物信息学分析家蝇(Musca domestica L.)肌动蛋白5 C(Actin-5 C)基因,构建Actin-5 C启动子双荧光素酶报告基因表达载体。方法使用伯克利果蝇基因组计划(BDGP)在线分析软件、Promoter 2.0和在线比对启动子网站(FPROM)等多种启动子预测工具,分析、预测家蝇肌动蛋白Actin-5 C基因5′端上游非编码区,根据预测结果构建截短式启动子萤火虫荧光素酶报告基因重组质粒,转染草地贪夜蛾卵巢细胞系sf9细胞,并使用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行萤火虫荧光素酶报告基因的检测。结果Actin-5 C基因5′端上游的-2609~-94 bp,预测有启动活性,且分值达0.8分以上,其中-2198~-2148 bp分值最高、达0.98分;在-220 bp和-1444 bp处分别检测到CAAT和TATA盒信号,经比较取最有可能的1156 bp(-1236~-80 bp)、1745 bp(-1825~-80 bp)及2059 bp(-2139~-80 bp)截断启动子片段,构建pGL 3-1156、pGL 3-1745及pGL 3-2059质粒,RT-PCR检测到3种重组质粒中的萤火虫荧光素酶报告基因转录成功。结论生物信息学预测工具研究家蝇Actin-5 C基因启动子可以简化认知基因的过程,根据预测结果构建了家蝇Actin-5 C基因萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。 展开更多
关键词 家蝇 计算生物学 逆转录聚合酶链反应 肌动蛋白5 C基因 启动子 重组质粒
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拟南芥肌动蛋白相关蛋白基因AtARP5和AtARP6共同参与DNA复制
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作者 吴迪 安增选 +1 位作者 樊天谊 朱炎 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期752-758,共7页
染色质重塑因子是一类利用ATP水解的能量主动重塑染色质结构的蛋白质,其中的INO80亚家族包括两个在进化中高度保守的重要成员,INO80和SWR1.两者通过结合包括肌动蛋白相关蛋白(Actin-Related Protein,ARP)在内的多个亚基,以复合物的形式... 染色质重塑因子是一类利用ATP水解的能量主动重塑染色质结构的蛋白质,其中的INO80亚家族包括两个在进化中高度保守的重要成员,INO80和SWR1.两者通过结合包括肌动蛋白相关蛋白(Actin-Related Protein,ARP)在内的多个亚基,以复合物的形式对染色质结构动态调控,在真核生物的多个表观遗传调控途径中发挥重要的功能.尽管都属于ARP成员,ARP5是INO80重塑复合物的特异性成员,而ARP6是SWR1重塑复合物的特异性成员.在模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)中,AtINO80和AtPIE1(拟南芥SWR1)基因缺失的双突变体致死.我们构建了AtARP5和AtARP6缺失突变体的双突变体atarp5-2 atarp6-1,用以研究两者在植物生长发育中的功能互作.我们发现,相对于野生型植物和各自的单突变体,双突变体atarp5-2 atarp6-1植物生长明显受抑制.细致的细胞观察显示,双突变体植物叶肉栅栏细胞大小和数量都减小,植物细胞核倍性下降,细胞周期和DNA复制相关基因的转录水平异常上调.Pull-down实验和BiFC实验证实,AtARP5和AtARP6都能够与DNA解旋酶RVB1结合.由于RVB1对于细胞增殖和植物生长至关重要,因此两个不同的肌动蛋白相关蛋白可能依赖于RVB1协同调控DNA复制以及相关细胞周期进程. 展开更多
关键词 拟南芥肌动蛋白相关蛋白5 拟南芥肌动蛋白相关蛋白6 细胞增殖 细胞内复制
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