目的建立基于实时荧光PCR和环介导等温扩增检测肉制品中狗源性成分的检测方法并比较2种方法的检测效能。方法针对狗线粒体CYTB基因保守序列,采用Primer Explorer Version 4软件设计环介导等温扩增引物,Primer Express 3.0.1软件设计实...目的建立基于实时荧光PCR和环介导等温扩增检测肉制品中狗源性成分的检测方法并比较2种方法的检测效能。方法针对狗线粒体CYTB基因保守序列,采用Primer Explorer Version 4软件设计环介导等温扩增引物,Primer Express 3.0.1软件设计实时荧光PCR引物及探针。提取狗肉基因组DNA作为阳性模板,黄牛肉等20种基因组DNA作为阴性对照,分析扩增特异性;用含靶序列的人工质粒确定检测灵敏度及人工掺肉样确定最低检出限;用市售肉制品分析检出率。结果对于肉制品中狗源性成分检测,实时荧光PCR和环介导等温扩增检测均有较好的特异性,人工质粒分析灵敏度分别为0.1、1fg/μL。对10种市售狗肉制品的狗源性成分均检出阳性、10份不含狗肉制品均检出阴性,qPCR法和环介导等温扩增法的检测结果符合率均为100%。结论qPCR法和环介导等温扩增法在检测肉及肉制品中的狗源性成分时,在灵敏度、检出限和准确度上具有相当的效能。展开更多
文摘目的建立基于实时荧光PCR和环介导等温扩增检测肉制品中狗源性成分的检测方法并比较2种方法的检测效能。方法针对狗线粒体CYTB基因保守序列,采用Primer Explorer Version 4软件设计环介导等温扩增引物,Primer Express 3.0.1软件设计实时荧光PCR引物及探针。提取狗肉基因组DNA作为阳性模板,黄牛肉等20种基因组DNA作为阴性对照,分析扩增特异性;用含靶序列的人工质粒确定检测灵敏度及人工掺肉样确定最低检出限;用市售肉制品分析检出率。结果对于肉制品中狗源性成分检测,实时荧光PCR和环介导等温扩增检测均有较好的特异性,人工质粒分析灵敏度分别为0.1、1fg/μL。对10种市售狗肉制品的狗源性成分均检出阳性、10份不含狗肉制品均检出阴性,qPCR法和环介导等温扩增法的检测结果符合率均为100%。结论qPCR法和环介导等温扩增法在检测肉及肉制品中的狗源性成分时,在灵敏度、检出限和准确度上具有相当的效能。
