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转聚磷激酶大肠杆菌诱导表达条件及磷浓度对其除磷能力的影响 被引量：4
1
作者 任晶 肖琳 +1 位作者 郑小红 杨柳燕 《环境保护科学》 CAS 2008年第6期1-3,22,共4页
在优化转聚磷激酶基因的大肠杆菌(BL-PPK)诱导表达条件基础上探讨了外界磷浓度对其除磷能力的影响,发现37℃细胞对数生长早期添加1.5mmol/L IPTG时聚磷激酶的表达活性和细胞除磷效率最高,同时BL-PPK对高达35mg/L的磷酸盐在6.5h内的去除... 在优化转聚磷激酶基因的大肠杆菌(BL-PPK)诱导表达条件基础上探讨了外界磷浓度对其除磷能力的影响,发现37℃细胞对数生长早期添加1.5mmol/L IPTG时聚磷激酶的表达活性和细胞除磷效率最高,同时BL-PPK对高达35mg/L的磷酸盐在6.5h内的去除效果达到99%以上,并以聚磷的形式积累在细胞内。 展开更多
关键词 生物除磷 聚磷激酶 诱导条件
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聚磷激酶基因克隆及其植物表达载体构建
2
作者 曹访 杨志红 +2 位作者 韩志萍 李慧慧 费佳玲 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第7期26-27,共2页
利用试剂盒法提取E.coli DH5α基因组DNA,根据GenBank中登录的大肠杆菌聚磷激酶(PPK)基因序列(L03719)设计引物,通过PCR扩增得PPK基因,然后将其克隆到pMD20-T Vector上并测序,测序结果与GenBank登录的序列相比对,同源性达99.9%。用限制... 利用试剂盒法提取E.coli DH5α基因组DNA,根据GenBank中登录的大肠杆菌聚磷激酶(PPK)基因序列(L03719)设计引物,通过PCR扩增得PPK基因,然后将其克隆到pMD20-T Vector上并测序,测序结果与GenBank登录的序列相比对,同源性达99.9%。用限制性内切酶XbaⅠ、BamHⅠ将目的片段和植物表达载体pBI121进行双酶切,T4连接酶连接,然后转化到E.coli BL21感受态细胞,获重组植物表达载体pBI21-PPK,从而为研究转PPK基因植物的聚磷能力奠定基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 聚磷激酶 植物表达载体
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聚磷激酶基因在假单胞菌中的整合和表达 被引量：12
3
作者 杜宏伟 武俊 +3 位作者 肖琳 杨柳燕 蒋丽娟 王晓琳 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第10期3011-3015,共5页
为了构建高效除磷的微生物,将来源于大肠杆菌的聚磷激酶基因(ppk)插入广宿主载体pBBR1MCS-2多克隆位点区,得到质粒pBBR1MCS-2-ppk.以该质粒为模板,通过PCR扩增出携带有载体启动子和终止子序列的ppk基因,插入自杀型质粒pUTmini-Tn5中得... 为了构建高效除磷的微生物,将来源于大肠杆菌的聚磷激酶基因(ppk)插入广宿主载体pBBR1MCS-2多克隆位点区,得到质粒pBBR1MCS-2-ppk.以该质粒为模板,通过PCR扩增出携带有载体启动子和终止子序列的ppk基因,插入自杀型质粒pUTmini-Tn5中得到重组质粒pUTmini-Tn5-ppk.pUTmini-Tn5-ppk经三亲接合作用进入Pseudomonas putidaKT2440,同时mini-Tn5通过转座作用将ppk整合到宿主菌株的染色体DNA中,获得基因工程菌Pseudomonas putidaKT2440-PPK,用于表达ppk.RT-PCR结果显示,ppk基因在KT2440-PPK中得到较高量的表达,而在原始菌株KT2440中表达微弱.人工模拟污水实验结果表明,接种1 h时KT2440-PPK中聚磷含量达到最大,为3.05 mg/g,约是对照菌株KT2440的15倍.测定模拟污水中磷酸盐的含量表明,KT2440-PPK可以去除该模拟污水中90%以上的磷酸盐. 展开更多
关键词 聚磷 聚磷激酶(PPK) 三亲接合 恶臭假单胞菌
原文传递
转聚磷激酶基因的大肠杆菌去除水体中的磷 被引量：10
4
作者 王勤 赵庆顺 +3 位作者 肖琳 蒋丽娟 杨柳燕 尹大强 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期742-745,共4页
为探索有效的生物除磷方法,构建了聚磷激酶基因(ppk)的表达载体pET28a(+),并转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21,获得了可过表达ppk基因的工程菌BL-PPK.RT-PCR结果表明,ppk基因在转化的大肠杆菌中得到了高效表达.聚磷试验结果表明,培养... 为探索有效的生物除磷方法,构建了聚磷激酶基因(ppk)的表达载体pET28a(+),并转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21,获得了可过表达ppk基因的工程菌BL-PPK.RT-PCR结果表明,ppk基因在转化的大肠杆菌中得到了高效表达.聚磷试验结果表明,培养10h后,转化了ppk基因的大肠杆菌细胞内聚磷含量比对照菌株高20倍,而培养液中可溶性磷浓度为对照菌株的约1/9. 展开更多
关键词 聚磷激酶(PPK) 聚磷 转基因 大肠杆菌
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