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聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法用于检定川贝母掺伪情况的研究 被引量:29
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作者 张文娟 刘薇 +1 位作者 魏锋 马双成 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1830-1835,共6页
目的:探讨聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法在检定川贝母掺伪中的应用。方法:将川贝母药材DNA与伊贝母药材DNA按不同比例混合,进行PCR扩增,限制性内切酶SmaI作用及琼脂糖凝胶电泳。通过这些实验,可以知道混合样品中伪... 目的:探讨聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法在检定川贝母掺伪中的应用。方法:将川贝母药材DNA与伊贝母药材DNA按不同比例混合,进行PCR扩增,限制性内切酶SmaI作用及琼脂糖凝胶电泳。通过这些实验,可以知道混合样品中伪品的检出限。接着,为了探究本实验中条带灰度与掺伪比例之间的关系,用Image J软件分析凝胶电泳图上的条带,根据未切割条带与切割条带的灰度比,得到标准化值。通过标准化值和掺伪比例2个参数,得到标准曲线,并进行准确性验证。结果:低至0.5%的掺伪比例即可通过该方法被检测。随着掺伪比例增加,未切割条带逐渐增强,切割条带逐渐减弱,两者条带的灰度比值也逐渐增加,到掺伪50%时,几乎没有肉眼可见的切割条带。根据不同掺伪比例对应的标准化值做出标准曲线,经验证该标准曲线的误差率约为0.94%。结论:PCR-RFLP法用于川贝母掺伪检测的检出限为0.5%,灵敏度高;且可通过条带灰度定量的方法反应掺伪比例大小。本研究为改变川贝母PCR-RFLP检验的取样方式和确定取样量提供了实验依据。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(pcr-rflp) 川贝母 伪品检测 伊贝母 检出限
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基于ITS序列分析鉴别冬虫夏草与古尼虫草 被引量:12
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作者 张文娟 康帅 +1 位作者 魏锋 马双成 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1551-1555,共5页
目的:冬虫夏草与古尼虫草在外观上相似度高,最易混淆,本研究将从基因水平对两者进行准确鉴别。方法:通过聚合酶链式反应扩增,得到样品的内转录间隔区(ITS)序列,同时从Gen Bank下载2种虫草的ITS序列;利用Codon Code Aligner和MEGA软件对... 目的:冬虫夏草与古尼虫草在外观上相似度高,最易混淆,本研究将从基因水平对两者进行准确鉴别。方法:通过聚合酶链式反应扩增,得到样品的内转录间隔区(ITS)序列,同时从Gen Bank下载2种虫草的ITS序列;利用Codon Code Aligner和MEGA软件对ITS序列进行分析,找到2种虫草差异的酶切位点;通过聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCRRFLP)实验进行验证。结果:在ITS序列上,冬虫夏草存在1个SacⅡ酶切位点,而古尼虫草不具有该位点。PCR-RFLP的实验结果表明,冬虫夏草ITS序列的PCR产物可被限制性内切酶SacⅡ切割为2个片段,大小分别约为488 bp和128 bp,古尼虫草不能被SacⅡ切割,所以酶切前后其PCR产物在琼脂糖凝胶图上的位置没有变化。从子实体取样和从虫体取样得到一致的结果。结论:PCR-RFLP法可以将冬虫夏草与古尼虫草明确区分,取样部位不同对本方法的结果没有影响。 展开更多
关键词 冬虫夏草 古尼虫草 DNA分子鉴定 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(pcr-rflp) 内转录间隔区(ITS)
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幽门螺杆菌临床分离株尿素酶基因及活性多样性 被引量:6
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作者 谭昌成 施理 《现代消化及介入诊疗》 2008年第1期18-21,共4页
目的研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)临床分离株的尿素酶基因及活性的多样性。方法应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)结合快速尿... 目的研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)临床分离株的尿素酶基因及活性的多样性。方法应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)结合快速尿素酶实验,对H.pylori临床分离株进行分型。结果按照H.pylori尿素酶基因PCR-RFLP及尿素酶活性结果,大致可将H.pylori临床株分为4型:Ⅰ型,PCR-RFLP只产生一条1.7kb带,尿素酶活性较高,H.pylori多分离自胃溃疡患者;Ⅱ型,PCR-RFLP产生1.3、0.4kb二条带,尿素酶活性最弱,H.pylori多分离自十二指肠球部溃疡患者;Ⅲ型,PCR-RFLP产生0.4、0.17kb二条带,伴有或不伴有(0.23或0.37kb)一条带,H.pylori多分离自胃炎患者,尿素酶活性最强;Ⅳ型,PCR-RFLP产生1.5、0.2kb二条带,尿素酶活性较弱,H.pylori多分离自胃溃疡及十二指肠球部溃疡患者。结论H.pylori临床分离株尿素酶基因的差异决定其尿素酶活性不同,与H.pylori相关性疾病的关系也不同。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(pcr-rflp)
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Bioleaching of Pb-Zn-Sn chalcopyrite concentrate in tank bioreactor and microbial community succession analysis 被引量:5
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作者 王军 赵红波 +3 位作者 庄田 覃文庆 朱珊 邱冠周 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2013年第12期3758-3762,共5页
The variation of microbial community structure was investigated for the tank bioleaching process of Pb-Zn-Sn chalcopyrite concentrate in the presence of mixed moderately thermophilic bacteria. The parameters, such as ... The variation of microbial community structure was investigated for the tank bioleaching process of Pb-Zn-Sn chalcopyrite concentrate in the presence of mixed moderately thermophilic bacteria. The parameters, such as pH value, solution potential and concentrations of metal ions, were determined by the method of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) to analyze the succession of microbial community. The results showed that a final copper extraction rate of 85.6% could be obtained after tank bioleaching for 30 d. The Acidithiobacillus caldus was the dominant population with abundance of about 73.80%in the initial stage, then Sulfobacillus thermosulfidooxidans dominated from the 18th day to the end of bioleaching, while the abundance of Leptospirillum ferriphilum changed slightly. A higher solution potential within a certain range and appropriate concentration of ferric ions were essential for this tank bioleaching of chalcopyrite. 展开更多
关键词 CHALCOPYRITE tank bioleaching microbial community pcr-rflp technique
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IL-10基因启动子多态性与强迫症关系 被引量:1
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作者 刘延辉 张立霞 +1 位作者 刘世国 张心华 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期569-572,共4页
目的探讨白细胞介素-10(IL-10)基因启动子多态性与强迫症(OCD)的关系。方法381例OCD患者和485名健康对照为研究对象,通过聚合酶链式反应与限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)基因分型技术对IL-10基因标签单核酸多态性(SYP)位点5... 目的探讨白细胞介素-10(IL-10)基因启动子多态性与强迫症(OCD)的关系。方法381例OCD患者和485名健康对照为研究对象,通过聚合酶链式反应与限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)基因分型技术对IL-10基因标签单核酸多态性(SYP)位点592A/C(rs1800872)、1082A/G(rs1800896)、819T/C(rs1800871)进行基因分型;以耶鲁一布朗强迫量表(Y-BOCS)评定OCD患者的病情。结果OCD组和对照组IL-10基因rs1800872、rs1800896、rs1800871位点在基因型频率分布与等位基因频率分布差异均无统计学意义(P〉0.05);不同发病年龄女性3个SNPsOCD组与对照组人群基因型与等位基因频率分布无明显差异(P〉0.05);男性rs1800896基因型(X2=6.51,P=0.039)和等位基因(X2=6.59,P=0.01,OR=1.84,95%CI=1.15—2.95)频率分布在OCD组与对照组之间存在差异;OCD组男女性别之间rs1800896基因型(矿=8.08,P=0.02)和等位基因(X2==6.97,P=0.008,OR:1.95,95%CI:1.18—3.23)频率分布也存在差异。结论IL-10基因(rs1800896)可能与男性OCD易感性有关。 展开更多
关键词 强迫症(OCD) 白介素10(IL-10) 单核苷酸多态性 聚合酶链式反应限制性片段长度多态性(pcr-rflp)
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PCR-RFLP在细粒棘球绦虫种株鉴定中的应用 被引量:9
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作者 马秀敏 吾拉木.马木提 +5 位作者 丁剑冰 林仁勇 张亚楼 刘素辉 伊藤亮 温浩 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第4期281-283,287,共4页
目的根据细粒棘球绦虫线粒体DNA rrnL区段基因特征,建立一种新的细粒棘球绦虫种株(基因型)鉴定技术。方法应用PCR-RFLP方法,对新疆不同地区44个囊型包虫病(CE)病人分离株标本提取DNA,用特异性引物对mtDNA rrnL基因片段进行PCR扩增,将扩... 目的根据细粒棘球绦虫线粒体DNA rrnL区段基因特征,建立一种新的细粒棘球绦虫种株(基因型)鉴定技术。方法应用PCR-RFLP方法,对新疆不同地区44个囊型包虫病(CE)病人分离株标本提取DNA,用特异性引物对mtDNA rrnL基因片段进行PCR扩增,将扩增产物用限制性内切酶SspI和Bg1Ⅱ消化,再用琼脂糖凝胶电泳分析片段大小,进行基因型鉴别。结果CE病人分离株PCR扩增产物均不能被限制性内切酶SspI酶切,为细粒棘球绦虫;其中43个病人分离株的PCR扩增产物不能被限制性内切酶Bg1Ⅱ酶切,为细粒棘球绦虫G1基因型;1个病人分离株的PCR扩增产物被Bg1Ⅱ切成158 bp和403 bp 2条DNA片段,为细粒棘球绦虫G6基因型。结论根据细粒棘球绦虫线粒体DNA rrnL区段基因特征建立的PCR-RFLP技术可用于细粒棘球绦虫的基因型鉴别。 展开更多
关键词 新疆 细粒棘球绦虫 基因型 聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性(pcr-rflp)
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基于ITS2序列的紫草PCR-RFLP鉴别研究 被引量:8
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作者 李谦 刘杰 +2 位作者 过立农 郑健 马双成 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1611-1617,共7页
目的:通过对市面大量流通的非中国药典收载紫草基原的所谓紫草进行分析,建立紫草正品与非中国药典品的鉴别方法。方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对紫草的ITS2序列进行扩增,通过与Gen Bank数据库进行Blast比对,确定非中国药典品的科属;利... 目的:通过对市面大量流通的非中国药典收载紫草基原的所谓紫草进行分析,建立紫草正品与非中国药典品的鉴别方法。方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对紫草的ITS2序列进行扩增,通过与Gen Bank数据库进行Blast比对,确定非中国药典品的科属;利用距离法和建树法比较非中国药典品与软紫草属、滇紫草属、紫草属的亲缘关系;利用限制性内切酶AluⅠ酶切PCR产物,将酶切产物经琼脂糖凝胶电泳检测后紫外成像。结果:非中国药典品经Blast比对为软紫草属;非中国药典品与软紫草属新疆紫草平均遗传距离为0.071,均小于与紫草属和滇紫草属的平均遗传距离,通过建立Neighbor-Joining(N-J)树聚类分析,非中国药典品与软紫草属新疆紫草和黄花软紫草明显区分,并与滇紫草属和紫草属均具有良好的单系性。正品紫草能被限制性内切酶AluⅠ酶切为两条条带,非中国药典品不能被酶切。结论:市场流通大量紫草非中国药典收载的新疆紫草(Arnebia euchroma(Royle)Johnst.)和内蒙紫草(Arnebia guttata Bunge),利用聚合酶链式反应限制性长度片段多态性法可鉴别紫草正品与非中国药典品。 展开更多
关键词 紫草 聚合酶链式反应(pcr) 内部转录间隔区2(ITS2) 聚合酶链式反应限制性片段长度多态性(pcr-rflp) DNA条形码分子鉴定 分子生物学鉴定 中药基原鉴定分析 中药材伪品鉴定 中药材分子鉴定方法
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聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法对太白贝母鉴别检验的适用性探讨 被引量:8
8
作者 张文娟 尚柯 +1 位作者 魏锋 马双成 《中国现代中药》 CAS 2015年第9期905-910,共6页
目的:探讨聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对于太白贝母的适用性。方法:采集太白贝母野生及栽培品,收集市场上太白贝母伪品,利用性状、PCR-RFLP鉴别法、DNA序列分析三种方法分析太白贝母与常见伪品的区别。结果:从... 目的:探讨聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对于太白贝母的适用性。方法:采集太白贝母野生及栽培品,收集市场上太白贝母伪品,利用性状、PCR-RFLP鉴别法、DNA序列分析三种方法分析太白贝母与常见伪品的区别。结果:从性状上看,太白贝母栽培品与伪品往往非常相似,较难辨别;通过PCRRFLP方法可以正确、客观的鉴别太白贝母与常见伪品,基于ITS2的DNA条形码方法进一步验证了PCR-RFLP法的准确性。市场上太白贝母的伪品多为伊犁贝母。结论:PCR-RFLP鉴别法可准确鉴别太白贝母与其伪品;市场上太白贝母伪品较多,应加强监管。 展开更多
关键词 太白贝母 伊犁贝母 鉴别 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法(pcr-rflp) 内转录间隔区(ITS)
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劳盆地热液喷口沉积物微生物多样性初步研究
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作者 郭文婷 刘晓曦 王鹏 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期23-27,共5页
采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术对劳盆地热液区TVG9站位沉积物中细菌、古菌多样性进行了调查,并构建其细菌、古菌种群的16S rRNA基因文库。研究结果表明,该站位细菌包含变形杆菌(Proteobacteria)、硝化螺旋... 采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术对劳盆地热液区TVG9站位沉积物中细菌、古菌多样性进行了调查,并构建其细菌、古菌种群的16S rRNA基因文库。研究结果表明,该站位细菌包含变形杆菌(Proteobacteria)、硝化螺旋菌(Nitrospira),疣微菌(Verrucomicrobia)等3个类群,其中变形杆菌占据优势地位,由Alphaproteobactria,Gamaproteobactria,Deltaproteobac-tria等3个亚群组成。古菌包含泉古菌(Crenarchaeota)和广古菌(Euryarchaeota),其中泉古菌占优势,由MGⅠ(Marine GroupⅠ)和MCG(Miscellaneous Crenarchaeotal Group)两类群组成,而广古菌主要由MBGE(Marine Benthic Group E)组成。旨在揭示深海热液区的微生物多样性,为生态环境的研究提供理论支持。 展开更多
关键词 劳盆地 热液喷口 沉积物 微生物多样 聚合酶链式反应限制性片段长度多态性分析(pcrrflp )
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