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含灯盏花中成药DNA提取及其分子鉴定 被引量：3
1
作者 朱高倩 王丽 +1 位作者 殷子喻 符德欢 《中国现代中药》 CAS 2023年第9期1878-1886,共9页
目的:优选适用于含灯盏花中成药的DNA提取方法和聚合酶链式反应(PCR)扩增引物,并通过测序和系统发育分析实现对其原料灯盏花的分子鉴定。方法:采用4种十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)改良方法对3种含灯盏花的中成药进行DNA提取,测定DNA的纯... 目的:优选适用于含灯盏花中成药的DNA提取方法和聚合酶链式反应(PCR)扩增引物,并通过测序和系统发育分析实现对其原料灯盏花的分子鉴定。方法:采用4种十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)改良方法对3种含灯盏花的中成药进行DNA提取,测定DNA的纯度和浓度。采用内转录间隔区(ITS)、matK、psbA-trnH、rbcL位点通用引物对提取的中成药DNA进行PCR扩增,并对PCR扩增最佳位点进行测序,通过构建系统发育树进行分子鉴定。结果:4种CTAB改良方法均能获得含灯盏花中成药DNA,其中CTAB改良方法一提取的DNA质量浓度显著高于其他改良方法;PCR扩增中以matK位点2对引物(matKXF/matK5R或matK3F/matK1R)最佳,可通过1次PCR成功获得具有单一条带且浓度较高的PCR产物,序列与灯盏花对照药材同源性为100%,系统发育树显示可与同属其他植物区分。结论:通过CTAB改良方法一可以有效提取含灯盏花中成药样品的DNA,采用matK位点引物matKXF/matK5R或matK3F/matK1R进行1次PCR扩增并对产物进行测序,通过序列比对可完成其原料灯盏花的鉴定。 展开更多
关键词 灯盏花 中成药 DNA提取 聚合酶链式反应扩增 分子鉴定
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G-四联体与聚合酶链式反应联用可视化检测沙门氏菌 被引量：2
2
作者 刘健慧 耿凤珍 +4 位作者 张先舟 高浩 李聪 高洁 檀建新 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第22期331-338,共8页
建立对沙门氏菌的G-四联体与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)联用可视化检测方法。以沙门氏菌属特异性基因invH为检测目标,设计5’端含有G-四联体互补序列的上下游引物,通过PCR的特异性识别并扩增目标序列,获得大量含G-... 建立对沙门氏菌的G-四联体与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)联用可视化检测方法。以沙门氏菌属特异性基因invH为检测目标,设计5’端含有G-四联体互补序列的上下游引物,通过PCR的特异性识别并扩增目标序列,获得大量含G-四联体的双链DNA,变性后与氯高铁血红素结合生成具有过氧化物酶活性的模拟酶(DNAzyme),并催化H_(2)O_(2)与2,2’-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑琳-6-磺酸)二胺盐由无色变为绿色,实现G-四联体与PCR联用对沙门氏菌的可视化检测。在优化的检测体系下,沙门氏菌基因组的质量浓度对数与421 nm处的吸光度具有良好的线性关系,其回归方程为y=0.1299x+0.2179,R^(2)=0.9945,线性范围0.07~771.6 ng/μL,灵敏度为0.07 ng/μL。特异性分析表明:此方法适用于沙门氏菌属的检测,可成功应用于人工污染沙门氏菌牛奶的检测,检出限为1.2×10^(2) CFU/mL。通过检测30种市售样品,发现其结果与国标检测方法结果一致。本研究为食源性致病菌的检测提供了新的策略。 展开更多
关键词 G-四联体 聚合酶链式反应扩增 沙门氏菌 可视化检测
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DNA条形码技术在中药制剂中鸡内金鉴定的应用研究 被引量：2
3
作者 熊乐文 房凯丽 +3 位作者 刘帅 赵宏伟 王彦予 张龙霏 《山东中医药大学学报》 2021年第3期393-399,共7页
目的:探讨以细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因作为DNA条形码鉴定中药制剂中鸡内金的可行性。方法:以11种市售含鸡内金中药制剂为材料,以天根DNA提取试剂盒提取DNA,利用合成的HE引物和TY引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,将其产物进行琼... 目的:探讨以细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因作为DNA条形码鉴定中药制剂中鸡内金的可行性。方法:以11种市售含鸡内金中药制剂为材料,以天根DNA提取试剂盒提取DNA,利用合成的HE引物和TY引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,将其产物进行琼脂糖凝胶电泳分离并测序,最后将测序结果导入美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站进行Blast在线比对。结果:成功提取中药制剂中鸡内金DNA,扩增产物电泳后的条带长度与目的条带理论长度接近,且Blast对比数据相似度高。结论:以COⅠ基因作为DNA条形码鉴定中药制剂中的鸡内金有效、可行,且鉴别速度快,但还需结合其他方法排除掺入鸡其他器官组织的可能性,才能进一步保证检测结果的准确性。 展开更多
关键词 鸡内金 细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ DNA提取 DNA条形码 聚合酶链式反应扩增
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肝素钠粗品及原料药中猪源性成分的聚合酶链式反应检测
4
作者 余燕 邓锋 《中国药业》 CAS 2016年第4期26-29,共4页
目的建立肝素钠粗品及原料药的聚合酶链式反应(PCR)检测方法,用于检测生产原料的动物来源是否为猪源性。方法分别对肝素钠粗品及原料药进行了DNA提取,并加入猪特异性引物进行扩增,对扩增产物进行酶切及测序验证。结果 7批粗品及原料药中... 目的建立肝素钠粗品及原料药的聚合酶链式反应(PCR)检测方法,用于检测生产原料的动物来源是否为猪源性。方法分别对肝素钠粗品及原料药进行了DNA提取,并加入猪特异性引物进行扩增,对扩增产物进行酶切及测序验证。结果 7批粗品及原料药中,只有粗品检测出猪源性成分,其DNA 50倍稀释液中均检测出猪源性成分,肝素钠PCR产物与Genbank中猪序列的同源性为99.2%。结论用常规PCR方法检测肝素钠粗品及样品中猪源性成分是可行的。 展开更多
关键词 肝素钠 猪源性成分 DNA片段 聚合酶链式反应扩增
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用全自动化学发光免疫分析仪联合PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的价值研究
5
作者 刘元钟 《当代医药论丛》 2022年第4期149-152,共4页
目的:探讨使用全自动化学发光免疫分析仪联合聚合酶链式反应(PCR)扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的价值。方法:选取2020年1月至2021年2月期间电子科技大学医学院附属绵阳市中心医院收治的186例疑似患有乙型病毒性肝炎的患者作为研究对象。为... 目的:探讨使用全自动化学发光免疫分析仪联合聚合酶链式反应(PCR)扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的价值。方法:选取2020年1月至2021年2月期间电子科技大学医学院附属绵阳市中心医院收治的186例疑似患有乙型病毒性肝炎的患者作为研究对象。为所有患者均使用全自动化学发光免疫分析仪和PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎。然后观察为这些患者单独使用全自动化学发光免疫分析仪、单独使用PCR扩增仪、联合使用全自动化学发光免疫分析仪和PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的敏感度、特异度和准确度。结果:与单独使用全自动化学发光免疫分析仪或PCR扩增仪相比,为本研究中的患者联合使用全自动化学发光免疫分析仪和PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的敏感度、特异度及准确度均较高,P<0.05。结论:与单独使用全自动化学发光免疫分析仪或PCR扩增仪相比,联合使用全自动化学发光免疫分析仪和PCR扩增仪诊断乙型病毒性肝炎的敏感度、特异度及准确度均较高。 展开更多
关键词 乙型病毒性肝炎 全自动化学发光免疫分析仪 聚合酶链式反应扩增仪 血清免疫标志物 乙肝两对半
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