耐热β-糖苷酶的基因克隆、表达和耐热性研究 被引量：3

1

作者 何向远 金城 +1 位作者 张树政 杨寿钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期63-68,共6页

从非解朊栖热菌HG10 2 (Thermusnonproteolyticus)染色体文库中 ,筛选得到耐热 β 糖苷酶 (Tn gly)基因。该基因位于重组质粒 2 6kbHindⅢ插入片段上 ;并在E .coli中表达 ,酶比活力提高 17倍。经序列测定 ,该基因1311bp ,编码 436个氨... 从非解朊栖热菌HG10 2 (Thermusnonproteolyticus)染色体文库中 ,筛选得到耐热 β 糖苷酶 (Tn gly)基因。该基因位于重组质粒 2 6kbHindⅢ插入片段上 ;并在E .coli中表达 ,酶比活力提高 17倍。经序列测定 ,该基因1311bp ,编码 436个氨基酸 ,前端与部分糖透性酶基因紧密相连 ,G +G含量为 71% ,有明显的RBS序列 ,启动子序列不明显。经序列同源性比较 ,其氨基酸序列属糖苷水解酶家族 1,有 N E P 和 T E N 保守序列 ,Glu16 4和Glu338推测是催化活性中心。其氨基酸组成中 ,疏水氨基酸含量较高 (Ala 12 .8%、Leu 10 .9% ) ,Arg(9 6 % )、Glu(9 44 % )和Pro(8.0 % )含量显著较高。理论预测二级结构中 ,α 螺旋占 41 4% ,β 折叠占 16 2 % ,β 转角占 14 4% ,并有大量的Pro位于 β 转角的第二位。疏水作用、盐键、α 螺旋和Pro对Tn gly的突出热稳定性有重要贡献。经系统进化树分析发现 ,β 展开更多

关键词 耐热β-糖苷酶 基因克隆 表达 耐热性 非解朊栖热菌HG102

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产耐热β-葡萄糖苷酶细菌的筛选与鉴定 被引量：1

2

作者 廖德芳 陈献忠 +2 位作者 张梁 王正祥 石贵阳 《工业微生物》 CAS CSCD 2011年第4期61-66,共6页

从中国高校工业微生物资源和信息中心(CICIM-CU)菌种库的1323株细菌保藏物中筛选出20株产β-葡萄糖苷酶能力较高的细菌。通过16S rDNA序列鉴定,初步确定其中有5株为嗜热溶胞土芽孢杆菌(Geobacillus sp.),其余为地衣芽孢杆菌(Bacillus li... 从中国高校工业微生物资源和信息中心(CICIM-CU)菌种库的1323株细菌保藏物中筛选出20株产β-葡萄糖苷酶能力较高的细菌。通过16S rDNA序列鉴定,初步确定其中有5株为嗜热溶胞土芽孢杆菌(Geobacillus sp.),其余为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。对其中编号为F157043A的地衣芽孢杆菌和编号为170-28-2的嗜热溶胞土芽孢杆菌进行了粗酶液酶学性质分析,发现地衣芽孢杆菌最适反应温度为55℃,最适反应pH值为9.0,该条件下测得粗酶液比酶活为0.66U/mg;嗜热溶胞土芽孢杆菌最适反应温度为53℃,最适反应pH值为8.0,该条件下测得粗酶液比酶活为0.36U/mg。通过菌体和菌落形态观察以及生理生化特征分析,进一步鉴定编号为F157043A的菌株为地衣芽孢杆菌。 展开更多

关键词 耐热β-葡萄糖苷酶 细菌 筛选 鉴定

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重组耐热β-葡萄糖苷酶的固定化及其对黄酮糖苷的定向转化 被引量：1

3

作者 解静聪 徐浩 +2 位作者 张宁 杨静 赵剑 《生物质化学工程》 CAS 2021年第3期10-16,共7页

为提高黄酮糖苷类化合物酶法转化的效率,降低酶使用成本,对重组耐热β-葡萄糖苷酶的固定化条件进行了研究,比较了固定化酶和游离酶的酶学性质差异,同时研究了固定化酶转化3种黄酮糖苷的时效曲线及转化效率。结果表明:重组耐热β-葡萄糖... 为提高黄酮糖苷类化合物酶法转化的效率,降低酶使用成本,对重组耐热β-葡萄糖苷酶的固定化条件进行了研究,比较了固定化酶和游离酶的酶学性质差异,同时研究了固定化酶转化3种黄酮糖苷的时效曲线及转化效率。结果表明:重组耐热β-葡萄糖苷酶的固定化最优条件为在pH值6.0,室温条件下,酶活力2 U/mL,海藻酸钠质量分数1.5%,氯化钙质量分数2.5%,戊二醛质量分数1.25%,颗粒硬化时间2.5 h,此条件下固定化酶颗粒的酶活力为0.64 U/mg,酶固定化率可达62.5%。固定化酶较游离酶具有更优的酸碱稳定性和热稳定性,且重复使用20次后仍具有55%以上的残余酶活力。固定化酶能够高效定向转化异槲皮素、大豆苷以及淫羊藿次苷I等3种黄酮糖苷,生成活性更强的黄酮苷元槲皮素、大豆苷元和淫羊藿素,其摩尔转化率分别为99.37%、97.21%和97.93%,产率分别为0.776、1.091和0.714 g/(L·h)。 展开更多

关键词 黄酮糖苷 耐热β-葡萄糖苷酶 固定化

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耐热β-葡萄糖苷酶固定化研究

4

作者 刘卓群 《现代食品》 2016年第9期84-88,共5页

本文借助原核表达系统,成功制备了耐热β-葡萄糖苷酶,酶活性可达0.745 k,以经戊二醛交联的DEAE纤维素作为载体固定化耐热β-葡萄糖苷酶,并优化固定化条件,结果显示戊二醛浓度为4%,加酶量为0.5 mL时,固定化效果最好,经测定,固定化酶的酶... 本文借助原核表达系统,成功制备了耐热β-葡萄糖苷酶,酶活性可达0.745 k,以经戊二醛交联的DEAE纤维素作为载体固定化耐热β-葡萄糖苷酶,并优化固定化条件,结果显示戊二醛浓度为4%,加酶量为0.5 mL时,固定化效果最好,经测定,固定化酶的酶活回收率可达到84.6%,且载体材料耐高温。本研究实现了经济、安全、高效的耐热β-葡萄糖苷酶制备方法,以及耐热β-葡萄糖苷酶的固定化条件优化,为探索适合商业化生产京尼平的制备技术提供有力的数据支撑。 展开更多

关键词 固定化 耐热β-葡萄糖苷酶 戊二醛 DEAE纤维素

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耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量：9

5

作者 葛佳佳 陈卫 张灏 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2002年第3期296-298,共3页

将来自嗜热脂肪芽孢杆菌IAM 110 0 1的高温乳糖酶基因bgaB亚克隆到具强启动子的大肠杆菌载体 pKK 2 2 3 3中 ,经IPTG诱导后 ,表达出的重组蛋白质仍具有耐高温活性 ,其相对分子质量与天然蛋白质相似 ,表达量为 1.5U/mg ,比出发菌株高

关键词 耐热β-半乳糖苷酶基因 大肠杆菌 表达

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耐热β-半乳糖苷酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆和表达 被引量：8

6

作者 傅晓燕 陈卫 张灏 《中国酿造》 CAS 北大核心 2004年第8期16-18,共3页

用PCR的方法从嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilis ATCC8005)染色体DNA中扩增到耐热β- 半乳糖苷酶基因bgaB,装载到大肠-枯草穿梭质粒pZZ01中,并将其转化到枯草杆菌宿主WB600中进行表达。在1%的淀粉培养基上摇瓶培养,36h时... 用PCR的方法从嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilis ATCC8005)染色体DNA中扩增到耐热β- 半乳糖苷酶基因bgaB,装载到大肠-枯草穿梭质粒pZZ01中,并将其转化到枯草杆菌宿主WB600中进行表达。在1%的淀粉培养基上摇瓶培养,36h时酶活达到24U/mL,和大肠杆菌pET系统相当。同时产酶出现了2个增长时期,第1阶段在对数生长期,第2阶段在静止期,这和重叠启动子P43的性质是相吻合的。 展开更多

关键词 耐热β-半乳糖苷酶 枯草芽孢杆菌 重叠启动子 克隆和表达

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耐热β-半乳糖苷酶基因bgaB在枯草芽孢杆菌中的整合表达 被引量：5

7

作者 张灏 夏雨 +2 位作者 傅晓燕 陈卫 丁霄霖 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2003年第6期1-4,14,共5页

来源于嗜热脂肪芽胞杆菌Bacillusstearothermophilus的耐热β 半乳糖苷酶基因bgaB被克隆到大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒pMA5中,然后将外源基因及其表达调控序列亚克隆到枯草芽胞杆菌整合载体pSAS144中,转化Bacillussubtilis受体菌BD1... 来源于嗜热脂肪芽胞杆菌Bacillusstearothermophilus的耐热β 半乳糖苷酶基因bgaB被克隆到大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒pMA5中,然后将外源基因及其表达调控序列亚克隆到枯草芽胞杆菌整合载体pSAS144中,转化Bacillussubtilis受体菌BD170,在5μg/mL的氯霉素抗性平板上筛选抗性转化子.经摇瓶发酵后,得到耐热乳糖酶的比酶活为0.32U/mg,是出发菌株比酶活的2倍. 展开更多

关键词 耐热β-半乳糖苷酶 枯草芽孢杆菌 基因表达 整合

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黑曲霉DL116产乳糖酶发酵条件的研究 被引量：4

8

作者 杜海英 李宁 +2 位作者 韩军 于宏伟 贾英民 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期60-64,共5页

为确定产高温乳糖酶的黑曲霉菌株DL116的最佳发酵培养条件,研究了突变菌株产乳糖酶的发酵培养基成分及培养条件。结果表明:DL116产乳糖酶的最佳培养基成分为:果胶2.5%,豆粕粉6%,玉米浆9%,(NH4)2SO40.1%,K2HPO41%,Tween-80 0.3%;最佳培... 为确定产高温乳糖酶的黑曲霉菌株DL116的最佳发酵培养条件,研究了突变菌株产乳糖酶的发酵培养基成分及培养条件。结果表明:DL116产乳糖酶的最佳培养基成分为:果胶2.5%,豆粕粉6%,玉米浆9%,(NH4)2SO40.1%,K2HPO41%,Tween-80 0.3%;最佳培养条件:温度30℃,初始pH 5.0,装液量30 mL/250 mL,接种量104个/mL。在此条件下培养,β-半乳糖苷酶酶活力达83.89 U/mL,是初始发酵条件下酶活力的1.89倍。 展开更多

关键词 黑曲霉 耐热β-半乳糖苷酶 发酵条件 优化

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耐热β-半乳糖苷酶的结构分析及同源建模 被引量：4

9

作者 张志刚 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2013年第4期706-709,748,共5页

预测耐热β-半乳糖苷酶的初级结构和高级结构,为进一步了解该蛋白的结构特征提供理论依据。应用ProtParam、ProtScale、TMHMM Server v.2.0、SignalP 4.0 Server、SOPMA、PSORT Prediction、GENO3D等生物信息学软件对此耐热β-半乳糖苷... 预测耐热β-半乳糖苷酶的初级结构和高级结构,为进一步了解该蛋白的结构特征提供理论依据。应用ProtParam、ProtScale、TMHMM Server v.2.0、SignalP 4.0 Server、SOPMA、PSORT Prediction、GENO3D等生物信息学软件对此耐热β-半乳糖苷酶的初级结构和空间结构进行分析和预测。该耐热β-半乳糖苷酶由452个氨基酸残基组成,无跨膜区域和信号肽,定位于细胞质,二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主,应用同源建模的方法,三维结构分子模型得到了成功构建。为进一步研究耐热β-半乳糖苷酶的功能特征以及改造奠定了基础。 展开更多

关键词 耐热β-半乳糖苷酶 生物信息学 同源建模

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耐热β-半乳糖酶在乳酸克鲁维酵母及毕赤酵母中的表达研究 被引量：4

10

作者 董艺凝 王霁昀 +2 位作者 陈海琴 张灏 陈卫 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期168-171,175,共5页

将嗜热脂肪芽孢杆菌来源的耐热β-半乳糖酶基因bgaB分别插入穿梭质粒pKLAC1、pPIC9k的α-因子信号肽下游,构建bgaB基因的乳酸克鲁维酵母真核表达载体pKLAC1-bgaB及毕赤酵母真核表达载体pPIC9k-bgaB。载体经酶切线性化后采用电击方法分... 将嗜热脂肪芽孢杆菌来源的耐热β-半乳糖酶基因bgaB分别插入穿梭质粒pKLAC1、pPIC9k的α-因子信号肽下游,构建bgaB基因的乳酸克鲁维酵母真核表达载体pKLAC1-bgaB及毕赤酵母真核表达载体pPIC9k-bgaB。载体经酶切线性化后采用电击方法分别转化到乳酸克鲁维酵母K.lactis GG799及毕赤酵母GS115中,并通过同源区各自整合到宿主基因组中。重组酶进行镍柱纯化、Western Blot杂交鉴定及酶学性质分析。结果表明,耐热β-半乳糖苷酶在酵母表达系统中可以实现外源表达且热稳定性保持良好,但不能被酵母系统有效分泌。 展开更多

关键词 耐热β-半乳糖苷酶 乳酸克鲁维酵母 毕赤酵母 酶学性质

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耐热β-半乳糖苷酶重组菌WB600/pMA5-bgaB发酵条件的研究 被引量：1

11

作者 陈卫 陈海琴 +2 位作者 田丰伟 赵建新 张灏 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1-5,共5页

耐热β-半乳糖苷酶相比酵母来源的中温乳糖酶用于低乳糖牛奶的生产具有潜在的优越性。在已将来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的耐热β-半乳糖苷酶基因(bgaB)克隆入枯草芽孢杆菌得到重组菌WB600/pMA5-bgaB后,对此重组菌的发酵条件进行了研究。重... 耐热β-半乳糖苷酶相比酵母来源的中温乳糖酶用于低乳糖牛奶的生产具有潜在的优越性。在已将来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的耐热β-半乳糖苷酶基因(bgaB)克隆入枯草芽孢杆菌得到重组菌WB600/pMA5-bgaB后,对此重组菌的发酵条件进行了研究。重组菌WB600/pMA5-bgaB在发酵过程中具有良好的遗传稳定性,可溶性淀粉和胰蛋白胨是重组菌生长和酶活表达的适合碳源和氮源。WB600/pMA5-bgaB适宜的摇瓶培养条件为接种量3%～5%,装液量30～50/250 mL(三角瓶),起始pH7.0,摇床转速220r/min。在7L反应器中进行分批发酵,研究表明,pH调控和溶氧控制对提高工程菌发酵产酶具有明显帮助,pH控制在7.0,溶氧控制在50%可提高发酵酶活;补料培养后菌体密度OD_(600)可达到47,酶活达到37.5U/mL,比在初始条件下提高了10倍。 展开更多

关键词 耐热β-半乳糖苷酶 重组枯草杆菌 发酵

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