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地衣芽孢杆菌YP1A耐有机溶剂蛋白酶基因的克隆与功能表达 被引量：4
1
作者 何小丹 李霜 +1 位作者 孙蓓蓓 何冰芳 《生物加工过程》 CAS CSCD 2009年第6期67-73,共7页
根据B.licheniformisYP1A来源的碱性蛋白酶具有的高强度耐有机溶剂性能及相关数据库分析,采用PCR克隆B.licheniformisYP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因,序列分析显示该基因(1 264 bp)包含启动子与编码380个氨基酸的开放阅读框(ORF),ORF包... 根据B.licheniformisYP1A来源的碱性蛋白酶具有的高强度耐有机溶剂性能及相关数据库分析,采用PCR克隆B.licheniformisYP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因,序列分析显示该基因(1 264 bp)包含启动子与编码380个氨基酸的开放阅读框(ORF),ORF包括信号肽、前肽及编码254个氨基酸的成熟肽序列。相关基因分析表明,YP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因与地衣芽孢杆菌ATCC14580的碱性蛋白酶基因仅有6个氨基酸残基差异。构建2种含YP1A碱性蛋白酶CDS的组成型穿梭表达载体pHY/aprYP与pHY/aprP43,前者采用YP1A蛋白酶自带的启动子,后者则采用来自于质粒pP43NMK的P43强启动子。利用这2种表达载体在枯草芽孢杆菌WB800中成功进行蛋白酶的功能表达,其中P43强启动子的表达能力明显优于碱性蛋白酶自带的启动子,表达的蛋白酶比酶活为395 U/mL。重组菌表达的碱性蛋白酶在体积分数50%的亲水及疏水有机溶剂中表现出了很好的耐受性,验证了克隆基因为地衣芽孢杆菌YP1A的高强度耐有机溶剂碱性蛋白酶基因。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌YP1A 耐有机溶剂蛋白酶 克隆 表达
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蜡样芽胞杆菌蛋白酶的克隆及在枯草芽胞杆菌系统中的高效表达 被引量：2
2
作者 承龙飞 朱富成 +1 位作者 刘可可 何冰芳 《生物加工过程》 CAS 2015年第3期20-25,共6页
基于来源于Bacillus cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶WQ的液相色谱-双质谱(LC-MS-MS)分析结果,设计引物,克隆耐有机溶剂蛋白酶WQ的基因,测序分析表明该蛋白酶的开放阅读框(ORF)大小为1 701 bp,编码566个氨基酸,其中含有信号肽(28个氨基... 基于来源于Bacillus cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶WQ的液相色谱-双质谱(LC-MS-MS)分析结果,设计引物,克隆耐有机溶剂蛋白酶WQ的基因,测序分析表明该蛋白酶的开放阅读框(ORF)大小为1 701 bp,编码566个氨基酸,其中含有信号肽(28个氨基酸)、前肽(220个氨基酸)及成熟肽序列(含954 bp编码318个氨基酸),相对分子质量约为3.7×104。将不带自身信号肽的蛋白酶基因apr WQ插入穿梭质粒p MA5中,构建了表达载体p MA5/apr WQ。该表达载体导入枯草芽胞杆菌WB600中获得阳性重组子WB600-p MA5/apr WQ,通过优化培养基成分以及培养条件,重组子发酵产蛋白酶体积酶活达到17 400 U/m L,约为高产野生菌产酶量的5倍。重组蛋白酶在多种有机溶剂(体积分数为50%)中表现出了良好的耐受性,验证了重组菌表达的蛋白酶与来源于B.cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶性质一致,该耐有机溶剂蛋白酶的高效表达为进一步发挥其高效生物催化作用等实际应用奠定了基础。 展开更多
关键词 耐有机溶剂蛋白酶 枯草芽胞杆菌 高表达 发酵优化
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Bacillus sphaericus 2297蛋白酶基因sph在毕赤酵母中的表达及重组酶酶学性质 被引量：1
3
作者 顾张慧 来蒋丽 +3 位作者 王淑军 焦豫良 刘姝 房耀维 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第7期114-118,130,共6页
将Bacillus sphaericus 2297蛋白酶基因sph进行毕赤酵母密码子优化后,进行全基因合成,并构建了重组酵母菌P.pastoris X33-ppicZalphA-sph,对重组酶进行酶学性质研究。结果表明,重组酶的最适反应温度和最适反应pH为40℃和8.0,且其为20～3... 将Bacillus sphaericus 2297蛋白酶基因sph进行毕赤酵母密码子优化后,进行全基因合成,并构建了重组酵母菌P.pastoris X33-ppicZalphA-sph,对重组酶进行酶学性质研究。结果表明,重组酶的最适反应温度和最适反应pH为40℃和8.0,且其为20～30℃中保温10 h仍有80%以上的酶活力、在pH7.0～9.0条件下孵育24 h,仍能保持60%以上的酶活性。K^+、Sr^(2+)对酶活有明显激活作用,而Fe^(3+)、Ba^(2+)对酶活有明显抑制作用;重组蛋白酶SPH在极性常数为0.8～3.1的25%的正丁醇、环己烷、二甲苯中孵育6 d后,仍能保留50%以上的酶活性。本研究为B.phaericus 2297和B.phaericus DS11蛋白酶有机溶剂耐受性机制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 耐有机溶剂蛋白酶 毕赤酵母 酶学性质 有机溶剂稳定性
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耐有机溶剂蛋白酶产生菌Bacillus cereus WQ9-2发酵条件及酶学性质
4
作者 许家兴 李振东 +1 位作者 承龙飞 何冰芳 《生物加工过程》 CAS CSCD 2012年第6期7-11,共5页
以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus WQ9-2为产耐有机溶剂蛋白酶的出发菌株,对其产酶条件进行优化并初步研究了其酶学性质。在单因素实验基础上,通过中心复合实验确定了产酶的最佳发酵条件为酵母粉8 g/L,葡萄糖17 g/L,KH2PO40.5 g/L,无水MgS... 以蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus WQ9-2为产耐有机溶剂蛋白酶的出发菌株,对其产酶条件进行优化并初步研究了其酶学性质。在单因素实验基础上,通过中心复合实验确定了产酶的最佳发酵条件为酵母粉8 g/L,葡萄糖17 g/L,KH2PO40.5 g/L,无水MgSO40.3 g/L,CaCl20.5 g/L,NaCl 1.0 g/L;pH 7.5。实验中发现采用低温发酵能大大缩短菌体产酶周期;通过优化发酵时间由最初84 h缩短到48 h,最高比酶活为3 921 U/mL。金属离子螯合剂1,10-菲罗啉(1,10-phenanthroline)、乙二胺四乙酸(EDTA)对该酶有较强的抑制作用,表明该酶可能为金属蛋白酶;Ca2+对该酶的活力及热稳定性有显著提高作用。 展开更多
关键词 BACILLUS CEREUS 耐有机溶剂蛋白酶 优化 酶学性质
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耐有机溶剂蛋白酶高产菌Pseudomonas aeruginosa PT121的发酵条件
5
作者 许家兴 唐啸宇 +1 位作者 张赣道 何冰芳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期6-9,共4页
优化了耐有机溶剂蛋白酶产生菌株Pseudomonas aeruginosa PT121的产酶发酵条件。通过单因子试验探索了碳源、有机氮源对菌株发酵产酶的影响;通过正交试验对甘油、果糖、胰蛋白胨进行了水平组合优化。正交试验的方差分析表明,培养基中各... 优化了耐有机溶剂蛋白酶产生菌株Pseudomonas aeruginosa PT121的产酶发酵条件。通过单因子试验探索了碳源、有机氮源对菌株发酵产酶的影响;通过正交试验对甘油、果糖、胰蛋白胨进行了水平组合优化。正交试验的方差分析表明,培养基中各成分显著性排列顺序为:胰蛋白胨>甘油>果糖。采用优化后培养基发酵72h,发酵液蛋白酶酶活达到12758U/mL,比优化前提高了6.3倍,为现有国内外报道中耐有机溶剂蛋白酶最高发酵产量。 展开更多
关键词 耐有机溶剂蛋白酶 PSEUDOMONAS AERUGINOSA 正交设计 发酵优化
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耐有机溶剂蛋白酶产生菌MSP03的产酶条件优化
6
作者 陈健 卢洋 周翔 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期289-293,共5页
通过正交实验和单因素实验对巨大芽孢杆菌MSP03产耐有机溶剂蛋白酶的培养基配方和发酵产酶条件进行优化。得到最佳发酵培养基配方为:糊精3 g/L,豆粕粉1 g/L,K_(2)HPO_(4)0.1 g/L。发酵条件为:装液量70 mL/250 mL,接种量5%,初始pH 7.0,... 通过正交实验和单因素实验对巨大芽孢杆菌MSP03产耐有机溶剂蛋白酶的培养基配方和发酵产酶条件进行优化。得到最佳发酵培养基配方为:糊精3 g/L,豆粕粉1 g/L,K_(2)HPO_(4)0.1 g/L。发酵条件为:装液量70 mL/250 mL,接种量5%,初始pH 7.0,于25℃发酵36 h。通过优化,耐有机溶剂蛋白酶活性增加到248.65 U/mL,是优化前的1.7倍,具有潜在的工业应用价值。 展开更多
关键词 耐有机溶剂蛋白酶 巨大芽孢杆菌 培养基优化 发酵条件优化
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