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高校绿色校园建设策略研究
1
作者 杨再娣 《湖南邮电职业技术学院学报》 2023年第1期115-118,共4页
高校绿色校园建设是我国社会主义生态文明建设重要组成部分。针对当前高校绿色校园建设过程中存在的管理体系不完善、管理意识淡薄、专业管理队伍缺乏等问题,围绕生态兴则文明兴、人与自然和谐共生的生态文明理念,结合符合国情和学校特... 高校绿色校园建设是我国社会主义生态文明建设重要组成部分。针对当前高校绿色校园建设过程中存在的管理体系不完善、管理意识淡薄、专业管理队伍缺乏等问题,围绕生态兴则文明兴、人与自然和谐共生的生态文明理念,结合符合国情和学校特色的绿色校园建设思路,提出了高校绿色校园建设的“四原则、三理念”及创建“六绿载体”的思路与策略,进一步推动高校高质量内涵式绿色发展。 展开更多
关键词 绿色校园 绿色理念 高质量发展 绿色载体
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人前脑啡肽原绿色荧光蛋白真核表达载体的构建 被引量：1
2
作者 李永辉 胡伊乐 +1 位作者 涂心明 臧卫东 《河南科技大学学报（医学版）》 2010年第1期5-7,共3页
目的构建人前脑啡肽原(preproenkephalin,PENK)绿色荧光真核表达载体并进行鉴定。方法参照PENK基因全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自酶切位点。通过RT-PCR的方法从正常人脑组织中扩增出目的基因,并定向克隆至pEGFP-C3绿... 目的构建人前脑啡肽原(preproenkephalin,PENK)绿色荧光真核表达载体并进行鉴定。方法参照PENK基因全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自酶切位点。通过RT-PCR的方法从正常人脑组织中扩增出目的基因,并定向克隆至pEGFP-C3绿色荧光蛋白真核表达载体上。筛选阳性克隆,通过双酶切和测序法鉴定重组质粒。结果双酶切结果与目的基因表达的条带完全吻合,克隆测序结果与NCB I收录的PENK序列完全一致。结论成功构建pEGFP-C3-PENK载体,为进一步研究疼痛的基因治疗奠定基础。 展开更多
关键词 绿色荧光载体 真核表达 人前脑啡肽原
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SEDL基因及其突变体真核表达载体的构建与鉴定 被引量：1
3
作者 夏欣一 周鑫 +5 位作者 崔英霞 魏莉 戈一峰 姚兵 李晓军 黄宇烽 《中国优生与遗传杂志》 2010年第5期7-9,35,共4页
目的构建SEDL基因及其突变体与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体的融合表达质粒pEGFP-C3-SEDL并获得表达。方法分别提取X连锁迟发性脊柱骨骺发育不良(SEDT)患者和正常对照外周血淋巴细胞RNA,RT-PCR方法扩增SEDL基因cDNA,双酶切后克隆至... 目的构建SEDL基因及其突变体与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体的融合表达质粒pEGFP-C3-SEDL并获得表达。方法分别提取X连锁迟发性脊柱骨骺发育不良(SEDT)患者和正常对照外周血淋巴细胞RNA,RT-PCR方法扩增SEDL基因cDNA,双酶切后克隆至pEGFP-C3空载体,构建表达质粒pEGFP-C3-SEDL。双酶切和DNA测序鉴定后,转染COS-7细胞,通过流式细胞仪和荧光显微镜观察重组蛋白表达情况。结果 DNA测序显示重组真核表达载体pEGFP-C3-SEDL构建成功,SEDL基因c.370-371ins A突变位点被成功克隆到突变体重组质粒中。荧光倒置显微镜观察证实重组质粒均能在细胞内进行蛋白表达。结论 SEDL基因及其突变体真核表达载体的成功构建为其进一步研究SEDL基因突变致SEDT的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 SEDL基因 绿色荧光表达载体 迟发性脊柱骨骺发育不良
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CYP21和CYP21P基因启动子序列对绿色荧光蛋白基因表达的影响 被引量：1
4
作者 韩蓓 王秀敏 +1 位作者 张雅芬 顾学范 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期396-401,T002,共7页
特异性扩增CYP2 1基因和CYP2 1P基因启动子区域 770bp～ 1bp片段 ,去除pEGFP N1载体中的CMV启动子 ,构建含CYP2 1基因启动子的pEGFP N1载体 (pCYP2 1)和CYP2 1P基因启动子的pEGFP N1载体 (pCYP2 1P) ,分别将上述两种构建载体、野生型pEG... 特异性扩增CYP2 1基因和CYP2 1P基因启动子区域 770bp～ 1bp片段 ,去除pEGFP N1载体中的CMV启动子 ,构建含CYP2 1基因启动子的pEGFP N1载体 (pCYP2 1)和CYP2 1P基因启动子的pEGFP N1载体 (pCYP2 1P) ,分别将上述两种构建载体、野生型pEGFP N1(阳性对照 )质粒及阴性对照转染入肾上腺皮质来源的Y1细胞系中 ,用倒置荧光显微镜 ,以及激光共聚焦显微镜等方法观测绿色荧光蛋白的表达。转染后 ,在荧光倒置显微镜下首次发现Y1细胞中出现绿色荧光蛋白的时间阳性对照为 3小时 ,pCYP2 1为 7小时 ,pCYP2 1P与阴性对照 (未转染任何载体的Y1细胞 )始终未观测到绿色荧光蛋白。激光共聚焦显微镜显示 ,阳性对照绿色荧光蛋白表达强于pCYP2 1,pCYP2 1P与阴性对照始终未观测到绿色荧光蛋白。阳性对照和pCYP2 1的绿色荧光蛋白在胞核中的荧光强度高于胞浆。上述结果进一步表明 ,含有CYP2 1和CYP2 展开更多
关键词 基因表达 CYP21基因 YP21P基因 启动子 绿色荧光蛋白载体 Y1细胞系 肾上腺皮质增生 CAH
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DNA错配修复酶hMSH2缺陷细胞株的建立
5
作者 何云 庄志雄 +2 位作者 扬杏芬 郑树森 杜柳涛 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期915-917,共3页
目的　建立并鉴定DNA错配修复酶hMSH2缺陷细胞株 ,用于研究hMSH2基因的作用机制及其缺陷与肿瘤发生的关系。方法　运用基因工程的方法获得hMSH2cDNA片段 ,并反向克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1上 ,随后将构建好的hMSH2反义RNA... 目的　建立并鉴定DNA错配修复酶hMSH2缺陷细胞株 ,用于研究hMSH2基因的作用机制及其缺陷与肿瘤发生的关系。方法　运用基因工程的方法获得hMSH2cDNA片段 ,并反向克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1上 ,随后将构建好的hMSH2反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体转染入人胚肺成纤维细胞 (HLF) ,使之在HLF中表达 ,用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中hMSH2基因的表达水平。结果　构建了hMSH2反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体 ,并在真核细胞成功表达 ;hMSH2酶缺陷细胞株hMSH2基因的蛋白表达水平下降了 4 4 %。结论　hMSH2缺陷细胞株的成功建立和鉴定为hMSH2基因功能研究提供了一种有效手段。 展开更多
关键词 DNA错配修复酶 HMSH2 反义RNA 绿色荧光蛋白载体 真核细胞转染
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SET-EGFP重组表达质粒的构建及表达 被引量：1
6
作者 周丽 席仁荣 +2 位作者 刘建军 邢秀梅 黄海燕 《中国热带医学》 CAS 2008年第5期716-718,共3页
目的构建癌蛋白SET与增强型绿色荧光表达载体(EGFP)的融合表达质粒pEGFP-N2-SET并获得表达。方法根据人SET基因序列。设计了一对含有Kozak序列、终止密码子、HindⅢ和Kpn I酶切位点的引物。从人L-02肝细胞提取总RNA,以逆转录后cDNA为模... 目的构建癌蛋白SET与增强型绿色荧光表达载体(EGFP)的融合表达质粒pEGFP-N2-SET并获得表达。方法根据人SET基因序列。设计了一对含有Kozak序列、终止密码子、HindⅢ和Kpn I酶切位点的引物。从人L-02肝细胞提取总RNA,以逆转录后cDNA为模板,PCR扩增获得SET基因片段,经双酶切后回收得到有以上两个酶切位点的SET基因片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pEGFP-N2载体中,获得重组质粒pEGFP-N2-SET。以LipofectamineTM 2000为载体,将构建好的真核表达质粒转染到L-02肝细胞中进行瞬时表达。结果经DNA测序鉴定证实,pEGFP-N2-SET重组质粒构建成功,经荧光倒置显微镜观察,证实能在细胞内进行蛋白表达。结论SET表达质粒的成功构建及表达为其进一步结构和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 癌蛋白SET 绿色荧光表达载体 蛋白磷酸酶2A
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腺病毒绿色荧光表达载体追踪皮肤组织工程种子细胞的转归
7
作者 刘志国 夏照帆 +3 位作者 贲道锋 程大胜 李刚 肖仕初 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1325-1327,I003,共4页
目的 :用转基因技术标记组织工程种子细胞 ,探索一种追踪种子细胞转归的方法。 方法 :用腺病毒荧光表达载体转染人皮肤成纤维细胞 ,观察转染率及其荧光表达。再将细胞种植在真皮支架上 ,活体观察荧光标记的效果和持续时间。结果 :所制... 目的 :用转基因技术标记组织工程种子细胞 ,探索一种追踪种子细胞转归的方法。 方法 :用腺病毒荧光表达载体转染人皮肤成纤维细胞 ,观察转染率及其荧光表达。再将细胞种植在真皮支架上 ,活体观察荧光标记的效果和持续时间。结果 :所制备的腺病毒荧光表达载体能转染靶细胞 ,转染率 >95 %。转染的细胞经一次传代后 ,尽管荧光强度降低 ,细胞轮廓仍清晰可见。细胞种植至真皮支架上 ,观察 2周 ,可以在荧光显微镜下较清晰地观察到培养物活体上细胞的形态。结论 :应用腺病毒荧光表达载体标记皮肤组织工程种子细胞以追踪细胞的转归是方便。 展开更多
关键词 腺病毒绿色荧光表达载体 转基因 组织工程 人工皮肤 种子细胞 成纤维细胞
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pEGFP-C3-PENK载体的构建及在体内外的表达
8
作者 胡伊乐 曹靖 +2 位作者 臧卫东 徐玉英 涂心明 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期754-756,F0004,共4页
目的：观察载体介导的外源性脑啡肽在细胞以及大鼠体内的表达与生物学作用.方法：将从大鼠脑组织中扩增的前脑啡肽原基因与真核绿色荧光载体连接构建新载体pEGFP-C3-PENK,体外转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜及免疫细胞化学观察新建载体... 目的：观察载体介导的外源性脑啡肽在细胞以及大鼠体内的表达与生物学作用.方法：将从大鼠脑组织中扩增的前脑啡肽原基因与真核绿色荧光载体连接构建新载体pEGFP-C3-PENK,体外转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜及免疫细胞化学观察新建载体在NIH3T3细胞内表达绿色荧光及脑啡肽;制备神经性疼痛大鼠模型并在蛛网膜下腔注射新建载体,通过大鼠疼痛阈值变化检测新合成脑啡肽的生物学作用.结果：在NIH3T3细胞与大鼠蛛网膜下腔均有大量的脑啡肽表达,大鼠的热敏阈明显提高.结论：新建载体介导的脑啡肽在生物体内能持续稳定表达并发挥生物学功能. 展开更多
关键词 绿色荧光载体 脑啡肽 基因治疗 大鼠
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慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白载体转染大鼠心肌成纤维细胞 被引量：1
9
作者 朱占占 侯宾 +3 位作者 孙雯雯 院慧芳 张永春 蔡新华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期43-47,共5页
目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GFP... 目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GFP转染心肌成纤维细胞,观察荧光表达,探索最佳转染条件。LV-SDF-1α-GFP目的基因病毒以及阴性对照CON145病毒的转染心肌成纤维细胞,绘制生长曲线,探索转染对心肌成纤维细胞的增殖有无明显影响。利用最佳转染剂量组转染心肌成纤维细胞,斑点印迹法(Dot blotting)检测SDF-1α目的蛋白分泌。计量资料进行统计学分析。结果心肌成纤维细胞具很高活性,传至4代纯度高,折光度好,无自发性搏动。LV-SDF-1α-GFP最佳转染感染复数(MOI)值为10,添加感染增强液,聚凝胺组感染效果最好,效率达80%。LV-SDF-1α-GFP组以及阴性对照CON145组对心肌成纤维细胞毒性作用小,细胞形态无明显变化,与非转染组生长曲线相似,差异无统计学意义(P>0.05)。转染LV-SDF-1α-GFP的心肌成纤维细胞培养至第4天SDF-1α蛋白分泌量达最高值,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LV-SDF-1α-GFP载体对心肌成纤维细胞具很高的转染效率,细胞毒性小,并能够分泌SDF-1α目的蛋白。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 慢病毒-基质细胞衍生因子-1α绿色荧光蛋白载体 转染 斑点印迹法 乳大鼠
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hTERT重组绿色荧光表达载体的构建与表达
10
作者 李一冬 赵国新 曹明瑞 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期171-173,共3页
目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的真核表达质粒。方法用RT-PCR方法从肝癌组织中提取总RNA扩增出hTERT基因片段,将其连接pGEM-TEasy质粒上,将重组质粒pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体同时用HindⅢ和BamHⅠ双酶切... 目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的真核表达质粒。方法用RT-PCR方法从肝癌组织中提取总RNA扩增出hTERT基因片段,将其连接pGEM-TEasy质粒上,将重组质粒pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体同时用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,再将重组的pEGFP-C3-hTERT基因片段转染NIH3T3细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞系,荧光倒置显微镜观察并检测转染细胞的hTERTmRNA表达水平。结果DNA序列分析证实了重组载体pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3-hTERT内插入片段的碱基组成与公开发表的hTERT序列一致。转染pEGFP-C3-hTERT的NIH3T3细胞可见绿色荧光,并检出高水平表达的hTERT。结论成功构建高效表达hTERT的真核表达载体,为以hTERT为靶点的肿瘤治疗打下实验基础。 展开更多
关键词 HTERT 绿色荧光表达载体 真核表达
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