细胞角蛋白7、8和10/13在不同级别宫颈病变中的表达及意义 被引量：3

1

作者 潘嫱微 陈大可 +6 位作者 潘嘉佳 张月辉 沙丽晓 杨洁 沈晓露 陈育梅 潘丹 《现代实用医学》 2018年第2期219-221,共3页

目的探讨细胞角蛋白(CK)7、CK8和CK10/13在宫颈疾病中的表达情况,分析其在宫颈疾病诊断中的价值。方法子宫颈低级别鳞状上皮内瘤变(LSIL)50例(LSIL组),子宫颈高级别鳞状上皮内瘤变(HSIL)50例(HSIL组),宫颈鳞癌(SCC)50例(SCC组),采用免... 目的探讨细胞角蛋白(CK)7、CK8和CK10/13在宫颈疾病中的表达情况,分析其在宫颈疾病诊断中的价值。方法子宫颈低级别鳞状上皮内瘤变(LSIL)50例(LSIL组),子宫颈高级别鳞状上皮内瘤变(HSIL)50例(HSIL组),宫颈鳞癌(SCC)50例(SCC组),采用免疫组化Envision法检测3组宫颈病变组织中CK7、CK 8和CK 10/13的表达情况。结果CK7、CK8及CK10/13在LSIL组、HSIL组及SCC组中的表达率差异均有统计学意义(均P<0.01)。LSIL组CK7、CK8及CK10/13表达率与HSIL组及SCC组差异均有统计学意义(均P<0.05),HSIL组CK7及CK8表达率与SCC组差异均有统计学意义(均P<0.05),HSIL组与SCC组CK10/13表达率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CK7、CK8的表达和CK10/13的表达缺失是宫颈疾病进展的标志物。 展开更多

关键词 宫颈病变 细胞角蛋白7 细胞角蛋白8 细胞角蛋白10/13 表达

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细胞角蛋白8在促肾上腺皮质激素释放因子诱导的肠上皮通透性改变中的作用 被引量：4

2

作者 胡玥 陈超英 +1 位作者 张梦 吕宾 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期900-906,共7页

目的:探讨细胞角蛋白8(CK8)在促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)诱导的肠上皮细胞间通透性改变中的作用及机制。方法:培养人结肠腺癌HT29细胞株建立肠上皮屏障模型,采用免疫荧光法检测HT29细胞表面CRF受体1(CRFR1)及CRFR2的表达情况,并将... 目的:探讨细胞角蛋白8(CK8)在促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)诱导的肠上皮细胞间通透性改变中的作用及机制。方法:培养人结肠腺癌HT29细胞株建立肠上皮屏障模型,采用免疫荧光法检测HT29细胞表面CRF受体1(CRFR1)及CRFR2的表达情况,并将其分为对照组和CRF组,CRF组以100 nmol/L CRF处理细胞72 h。采用Transwell小室检测2组细胞FITC标记的dextran透过率,透射电镜观察2组细胞紧密连接结构变化,并用Western blot法检测2组细胞CK8及紧密连接相关蛋白(ZO-1和occludin)的表达,免疫荧光检测CK8表达微结构变化,ELISA检测加药5 min、10 min、30 min、1 h及2 h后蛋白激酶C(PKC)活性。采用sh-CK8慢病毒构建CK8低表达HT29细胞,检测给予CRF处理后相应蛋白表达量、FITC标记的dextran透过率及PKC活性的改变。结果:HT29细胞表面存在CRFR1及CRFR2受体,而CRF处理后,FITC标记的dextran透过率高于对照组(P<0.05),透射电镜观察可见对照组细胞紧密连接通道关闭, CRF处理后紧密连接开放。同时,CRF可引起HT29细胞CK8的荧光强度增高,呈颗粒样浓聚,其蛋白表达明显增加(P<0.05),而occludin和ZO-1表达下调(P<0.05)。此外,CRF处理1 h时,PKC的活性下降(P<0.05)。sh-CK8慢病毒转染HT29细胞后成功建立低表达CK8细胞株,与阴性对照组相比,CRF刺激后肠上皮细胞通透性并未明显降低, occludin蛋白表达仍下调(P<0.05),而ZO-1则无明显改变。同时,与阴性对照组相比,CK8低表达后,CRF刺激并未引起PKC活性的下降。结论:CK8可能通过抑制PKC活性参与CRF诱导的肠上皮通透性的增加,同时可能存在其它信号通路共同参与。 展开更多

关键词 肠易激综合征 细胞角蛋白8 促肾上腺皮质激素释放因子 紧密连接 蛋白激酶C

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小鼠味蕾细胞分离及体外培养方法 被引量：3

3

作者 秦玉梅 张根华 +2 位作者 石锦芹 王腾浩 邓少平 《细胞生物学杂志》 CSCD 2009年第1期119-122,共4页

以ICR小鼠的味觉上皮为材料,优化味觉上皮及味蕾细胞分离方法,将分离的味细胞置于Ⅰ型鼠尾胶原包被的含有IMDM培养基的培养板上培养,相差显微镜下观察味蕾细胞形态变化。免疫组织化染色和荧光染色用于鉴定味蕾细胞。结果显示味蕾细胞离... 以ICR小鼠的味觉上皮为材料,优化味觉上皮及味蕾细胞分离方法,将分离的味细胞置于Ⅰ型鼠尾胶原包被的含有IMDM培养基的培养板上培养,相差显微镜下观察味蕾细胞形态变化。免疫组织化染色和荧光染色用于鉴定味蕾细胞。结果显示味蕾细胞离体培养一段时间后形态异于体内,但仍具味蕾细胞特有的与细胞骨架和细胞内信号相关的分子标记如:α-gustducin、细胞角蛋白8。由此证明这是一种有效的小鼠的味蕾细胞分离及体外培养方法,为离体研究味蕾细胞生理生化特性提供了更好的途径。 展开更多

关键词 味蕾细胞 原代培养 味乳头 α-gustducin 细胞角蛋白8

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aFGF、HGF体外诱导小鼠ESC向肝细胞定向分化及标志物研究 被引量：1

4

作者 应佳丽 王雪玲 +1 位作者 范丽娇 张少艳 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2014年第11期1305-1308,共4页

目的观察酸性成纤维细胞生长因子(acid fibroblast growth factor,a FGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外定向诱导分化作用及诱导后肝细胞标志物的表达水平。方法体外培... 目的观察酸性成纤维细胞生长因子(acid fibroblast growth factor,a FGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外定向诱导分化作用及诱导后肝细胞标志物的表达水平。方法体外培养小鼠ESC使其发育成拟胚体,然后加入a FGF、HGF诱导ESC定向分化成肝细胞。收集培养上清液,RIA法测定甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、白蛋白(albumin,ALB)浓度。PCR和免疫印迹法检测ALB、细胞角蛋白8(CK8)以及细胞角蛋白18(CK18)在细胞内mRNA和蛋白表达水平。结果 ESC培养5 d后发育成为拟胚体,加入不同浓度a FGF继续培养,5 d后AFP浓度降低,ALB浓度升高,与对照组相比有显著性差异。细胞内ALB、CK8及CK18表达水平明显升高。一次诱导后加入HGF,继续诱导5 d,上清液中AFP浓度降低,ALB浓度升高,具有浓度依赖性。ALB、CK8及CK18在细胞内表达升高。结论体外培养小鼠ESC,加入a FGF、HGF后可诱导其向肝细胞定向分化。肝细胞标志物AFP水平明显降低,ALB、CK8以及CK18表达水平明显升高。 展开更多

关键词 酸性成纤维细胞生长因子 肝细胞生长因子 胚胎干细胞 甲胎蛋白 白蛋白 细胞角蛋白8 细胞角蛋白18

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人皮肤真皮组织中角朊干细胞样细胞的分离与培养

5

作者 池光范 李美英 +3 位作者 赵贵芳 邓继鸿 刘晋宇 李玉林 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第23期4264-4271,共8页

背景:皮肤真皮组织是皮肤损伤修复时除表皮基底层以外可形成表皮层结构的重要干细胞来源。目的:探索从人皮肤真皮组织中分离培养角朊干细胞样细胞的新方法。方法:将一定大小的成人腹部全层皮肤组织用Dispase过夜消化后去除表皮层结构,... 背景:皮肤真皮组织是皮肤损伤修复时除表皮基底层以外可形成表皮层结构的重要干细胞来源。目的:探索从人皮肤真皮组织中分离培养角朊干细胞样细胞的新方法。方法:将一定大小的成人腹部全层皮肤组织用Dispase过夜消化后去除表皮层结构,然后用0.1%Ⅰ型胶原酶过夜消化,离心分离以获取真皮来源总细胞。将分离的细胞用含有体积分数1%N2,2%B27,20μg/L表皮生长因子和40μg/L碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12(1:1)无血清培养液悬浮后以低密度接种于培养皿进行培养。采用RT-PCR和免疫细胞荧光染色法对其进行分析。结果与结论:RT-PCR分析结果显示所分离的真皮细胞中含有表达Lgr5和Lirg1等特异基因的毛囊来源干细胞;免疫细胞荧光分析结果显示其表达细胞角蛋白8和细胞角蛋白14。在无血清条件下培养6d时,可观察到表达细胞角蛋白14和整合素α6的"铺路石"样细胞克隆。进行传代培养后P1细胞表达角朊干细胞标志物CD29、细胞角蛋白14和P63。传代培养至P3,4时大部分细胞分化,不能继续传代。结果证实,以无血清培养液结合低密度培养法可直接从人真皮组织中有效地培养增殖活跃、细胞角蛋白14和P63阳性的角朊干细胞样细胞。 展开更多

关键词 干细胞 干细胞培养与分化 人皮肤 真皮 汗腺 毛囊 角朊细胞 细胞角蛋白14 细胞角蛋白8 CD29 基因 其他基金 干细胞图片文章

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葡萄胎组织中MMP-26、CK-8、Ki67的表达及意义 被引量：2

6

作者 王利平 王思敏 《中国妇产科临床杂志》 CSCD 2021年第3期289-290,共2页

目的探讨葡萄胎组织中基质金属蛋白酶-26(MMP-26)、细胞角蛋白8(CK-8)、细胞周期相关抗原(Ki67)的表达及意义。方法选择河南省某三甲医院2017年1月至2019年9月收治的120例葡萄胎患者和100例正常人工流产患者临床资料,收集清宫术组织标本... 目的探讨葡萄胎组织中基质金属蛋白酶-26(MMP-26)、细胞角蛋白8(CK-8)、细胞周期相关抗原(Ki67)的表达及意义。方法选择河南省某三甲医院2017年1月至2019年9月收治的120例葡萄胎患者和100例正常人工流产患者临床资料,收集清宫术组织标本,检测标本中MMP-26、CK-8、Ki67的表达,分析三者在葡萄胎中的表达及意义。结果葡萄胎组织MMP-26、CK-8、Ki67阳性率分别为90.83%、82.50%、91.67%,明显高于正常绒毛组织织的42.00%、35.00%、5.00%(P <0.05);相关分析显示,MMP-26、CK-8、Ki67阳性率表达和既往葡萄胎史、黄素囊肿、增生程度、子宫大小之间密切相关(P <0.05),与年龄相关关系不显著(P>0.05)。结论在葡萄胎组织中MMP-26、CK-8、Ki67阳性率表达均较高,三者联合检测对早期诊断葡萄胎的恶变有重要的诊断价值。 展开更多

关键词 葡萄胎 基质金属蛋白酶-26 细胞角蛋白8 细胞周期相关抗原

原文传递

人乳腺病变组织乳腺癌耐药蛋白及细胞角蛋白8和嗜铬蛋白A的表达 可能与多向分化潜能干细胞相关? 被引量：1

7

作者 陈颖欣 李连宏 +2 位作者 孙杰 王波 王丽霞 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期57-62,共6页

背景:多数学者认为正常乳腺组织中无神经内分泌细胞,乳腺病变后出现神经内分泌细胞是乳腺上皮干细胞分化过程中受局部微环境和激素水平影响所发生的突变、异常分化结果。目的:通过检测人乳腺病变组织中乳腺癌耐药蛋白、细胞角蛋白8及嗜... 背景:多数学者认为正常乳腺组织中无神经内分泌细胞,乳腺病变后出现神经内分泌细胞是乳腺上皮干细胞分化过程中受局部微环境和激素水平影响所发生的突变、异常分化结果。目的:通过检测人乳腺病变组织中乳腺癌耐药蛋白、细胞角蛋白8及嗜铬蛋白A的表达,从干细胞多向分化的角度探讨人乳腺病变中出现神经内分泌细胞的可能机制。方法:用乳腺癌耐药蛋白作为SP干细胞标记物,用细胞角蛋白8作为腺上皮分化标记物,用嗜铬蛋白A作为神经内分泌分化指标标记物,采用免疫组化方法分别检测这3种蛋白在89例人乳腺组织中的表达情况,并分析3者间的相关性。结果与结论:乳腺癌耐药蛋白与细胞角蛋白8在正常乳腺组织、乳腺增生组织、乳腺病变组织中均有表达,乳腺癌耐药蛋白在病变组织中的表达呈上升趋势,细胞角蛋白8的表达则随乳腺组织异常分化程度的降低呈逐渐减少,嗜铬蛋白A只在乳腺病变组织中有表达。在正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺病变组织中,乳腺癌耐药蛋白与嗜铬蛋白A的阳性表达呈显著相关(P<0.01),与细胞角蛋白8的阳性表达无明显相关(P=0.069)。上述结果表明正常及增生乳腺组织中未发现神经内分泌细胞,乳腺病变组织中发现神经内分泌细胞,其机制可能与多向分化潜能干细胞的分化有关。 展开更多

关键词 乳腺 乳腺癌耐药蛋白 细胞角蛋白8 嗜铬蛋白A 干细胞

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细胞角蛋白8对丙型肝炎病毒复制的影响 被引量：1

8

作者 李文静 李健蕊 +6 位作者 黄梦昊 吴舟一 陈金花 李虎 吕晓芹 程军军 彭宗根 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期913-918,共6页

细胞角蛋白8(KRT-8)水平在丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的肝癌患者体内及在HCV感染细胞培养中均明显上升,与肝病进展密切相关,但KRT-8是否对HCV复制产生影响并不清楚。本文利用KRT-8高表达质粒和特异性sh RNA分析其在细胞培养中对HCV复制... 细胞角蛋白8(KRT-8)水平在丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的肝癌患者体内及在HCV感染细胞培养中均明显上升,与肝病进展密切相关,但KRT-8是否对HCV复制产生影响并不清楚。本文利用KRT-8高表达质粒和特异性sh RNA分析其在细胞培养中对HCV复制的影响,并分析低沉默KRT-8后与已知抗HCV药物联合抑制HCV的作用及其对常见HCV耐药突变株的影响。结果显示,胞内KRT-8水平随HCV复制的增加而增加,其高表达能促进HCV的复制,而特异性干扰KRT-8基因表达后,HCV的复制受到抑制。低沉默KRT-8可以增强已知抗HCV药物特拉匹韦抑制HCV复制的作用,且对蛋白酶抑制剂常见耐药突变(A156T和D168V)HCV也具有抑制作用。这提示KRT-8可能是HCV复制的辅助因子,下调KRT-8具有抗HCV的作用及优势。因此,KRT-8有望成为抗HCV药物研发的一个新的宿主靶点。 展开更多

关键词 细胞角蛋白8 丙型肝炎病毒 辅助因子 抗病毒靶点 宿主成分

原文传递

类固醇生成因子1及细胞角蛋白8在垂体腺瘤中的表达及意义

9

作者 吴会芳 王俊宽 +7 位作者 常佳 顾斌 冯怡锟 杨婉菁 张岩 胡桂明 陈琛 任景丽 《中国实用神经疾病杂志》 2018年第4期353-356,共4页

目的探讨类固醇生长因子1(SF1)和细胞角蛋白8(CK8)在垂体腺瘤分类中的指导作用。方法收集垂体腺瘤49例,检测SF1和CK8在垂体腺瘤中的表达,分析二者在不同类型垂体腺瘤中的表达特点。结果 SF1在促性腺激素细胞腺瘤中的阳性表达率(90%,18/... 目的探讨类固醇生长因子1(SF1)和细胞角蛋白8(CK8)在垂体腺瘤分类中的指导作用。方法收集垂体腺瘤49例,检测SF1和CK8在垂体腺瘤中的表达,分析二者在不同类型垂体腺瘤中的表达特点。结果 SF1在促性腺激素细胞腺瘤中的阳性表达率(90%,18/20)明显高于其他类型垂体腺瘤(0);CK8在SF1阳性的垂体腺瘤中的高表达率(21%,5/24)明显低于SF1阴性的垂体腺瘤(92%,23/25)。结论 SF1对促性腺激素细胞腺瘤有极高的诊断价值;CK8阴性或低表达是促性激素细胞腺瘤的分子特征之一,可以辅助用于垂体腺瘤的分类。 展开更多

关键词 垂体腺瘤 类固醇生长因子1 细胞角蛋白8 促性腺激素细胞腺瘤 免疫组织化学

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细胞角蛋白8GFP/Puro双标干涉慢病毒系统的构建及对细胞凋亡的影响

10

作者 金延超 尹荣华 +4 位作者 郑巍薇 孔祥祯 詹轶群 杨晓明 李长燕 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1761-1765,共5页

目的构建细胞角蛋白8(CK8)的双标慢病毒干涉载体,获得高滴度慢病毒颗粒,感染HCT116细胞建立稳定株,检测CK8敲低对细胞凋亡的影响。方法将CK8的siRNA序列插入慢病毒表达载体GV248,并与包装质粒PMD、SPA共转染293T细胞,36、48 h分两次收... 目的构建细胞角蛋白8(CK8)的双标慢病毒干涉载体,获得高滴度慢病毒颗粒,感染HCT116细胞建立稳定株,检测CK8敲低对细胞凋亡的影响。方法将CK8的siRNA序列插入慢病毒表达载体GV248,并与包装质粒PMD、SPA共转染293T细胞,36、48 h分两次收集慢病毒上清,应用流式细胞术检测病毒滴度。获得的病毒感染HCT116细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞,Western blotting检测干涉效果。采用Annexin V/PI染色检测干涉CK8对化疗药物顺铂诱导的细胞凋亡的影响。结果与结论成功构建CK8干涉慢病毒载体并得到干涉稳定株,在HCT116细胞中干涉CK8使细胞对顺铂引起的凋亡更加敏感。 展开更多

关键词 细胞角蛋白8 GFP Puro双标慢病毒 RNAI 凋亡 顺铂

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细胞角蛋白8真核表达载体的构建、表达及生物信息学分析

11

作者 寻萌 赵四海 +5 位作者 曹春霞 薛欣 邵明明 李薇 徐琨 楚雍烈 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期123-127,共5页

目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型。方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMD18-Tsimplevector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP-C1,构建真核表达载体pE... 目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型。方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMD18-Tsimplevector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-CK8。脂质体介导转染SMMC7721细胞,荧光显微镜、realtimePCR和Westernblot检测CK8的表达。生物信息学软件分析CK8理化特性、信号肽及功能位点等。结果:PCR、酶切和测序结果均证实重组质粒含有人CK8全长CDS序列,转染实验表明CK8在SMMC7721细胞中发生了高表达。结论:成功地构建了人CK8全长CDS真核表达载体,并使其在SMMC7721细胞中获得高表达,为研究CK8的生物学功能奠定了实验基础。 展开更多

关键词 细胞角蛋白8 全长编码序列 真核表达 生物信息学分析

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老年冠心病患者外周血细胞角蛋白水平改变及其辅助诊断价值

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作者 孟晓峰 刘倩 +3 位作者 刘彦伯 任凤学 刘祎秀 李远征 《临床和实验医学杂志》 2016年第15期1500-1502,共3页

目的检测老年冠心病患者外周血细胞角蛋白8(CK8)水平的改变,并分析其辅助诊断价值。方法纳入2013年1月至2015年1月收治的冠心病患者,并设定为观察组。另将同期接受体检者设定为对照组。检测两组外周血CK8水平并分析临床意义。结果本研... 目的检测老年冠心病患者外周血细胞角蛋白8(CK8)水平的改变,并分析其辅助诊断价值。方法纳入2013年1月至2015年1月收治的冠心病患者,并设定为观察组。另将同期接受体检者设定为对照组。检测两组外周血CK8水平并分析临床意义。结果本研究纳入96例研究对象,观察组46例,对照组50例。观察组患者外周血C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)及CK8水平显著高于对照组(P<0.05)。观察组患者外周血CK8水平与CRP及IL-6均呈现显著正相关关系(P<0.05)。受试者工作曲线分析显示,以45.05μg/L为截点值,CK8诊断冠心病的敏感度为91.30%,特异度为92.00%,优于CRP及IL-6。观察组患者外周血CK8水平与Gensini评分呈现显著正相关关系(P<0.001)。结论 CK8在老年冠心病患者外周血表达升高且与疾病严重程度相关,具有一定辅助诊断价值。 展开更多

关键词 老年 冠心病 细胞角蛋白8 炎症因子 诊断

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p16,Ki67,CK8、17在CIN及宫颈鳞癌中的临床表达及病理意义 被引量：8

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作者 张力忆 蒋奉希 桂定清 《实用癌症杂志》 2018年第8期1242-1244,共3页

目的探究p16,Ki67,细胞角蛋白8、17在宫颈上皮内瘤变及浸润性鳞状细胞癌中的临床表达及其病理意义。方法选取250例宫颈活检患者,采用免疫组织化学技术法检测宫颈上皮内瘤变125例(低级组别60例,高级组别65例)、浸润性鳞性细胞癌65例、正... 目的探究p16,Ki67,细胞角蛋白8、17在宫颈上皮内瘤变及浸润性鳞状细胞癌中的临床表达及其病理意义。方法选取250例宫颈活检患者,采用免疫组织化学技术法检测宫颈上皮内瘤变125例(低级组别60例,高级组别65例)、浸润性鳞性细胞癌65例、正常宫颈组织60例中p16、Ki67、细胞角蛋白8、17的阳性表达率。结果 p16,Ki67,CK8、17在正常宫颈对照组均为阴性表达;在浸润性鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为100.0%、100.0%、89.2%、93.8%;在宫颈上皮内瘤变高级别中的阳性表达分别为100.0%、98.5%、56.9%、58.5%;在宫颈上皮内瘤低级别中的阳性表达率分别为63.3%、62%、13.3%、31.7%。结论 p16,Ki67,细胞角蛋白8、17的阳性表达率与宫颈病变严重程度成正比,是判断宫颈上皮内瘤病变、浸润性鳞状细胞癌增殖状态的有效指标。 展开更多

关键词 宫颈上皮内瘤变 浸润性鳞状细胞癌 p16、Ki67 细胞角蛋白8、17

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人细胞角蛋白8(CK8)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：3

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作者 李薇 寻萌 +1 位作者 楚雍烈 郑建武 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期41-43,共3页

目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA并在大肠杆菌中表达CK8蛋白产物。方法:运用DNA重组技术,设计CK8基因特异引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝细胞癌7721细胞中扩增CK8编码区cDNA,将其插入克隆载体pMD18-T simple vecto... 目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA并在大肠杆菌中表达CK8蛋白产物。方法:运用DNA重组技术,设计CK8基因特异引物,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肝细胞癌7721细胞中扩增CK8编码区cDNA,将其插入克隆载体pMD18-T simple vector中,获得重组质粒pMD18-CK8,转化感受态大肠杆菌DH5α。继而采用PCR技术从重组质粒pMD18-CK8中扩增出约1500bp目的片段,再次级克隆到原核表达质粒pET-28a(+)载体中,获得pET-28a-CK8重组原核表达质粒;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21(DE3)菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达。采用SDS-PAGE电泳及Western blot检测CK8蛋白表达水平。结果:成功建立了人CK8基因cDNA重组体的无性繁殖系。②在原核细胞中成功地表达出人CK8蛋白,该蛋白具有很好的免疫原性。结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了人细胞角蛋白8(CK8)基因,为进一步研究CK8的基因型及探讨该基因编码的CK8蛋白的性质和生物学活性创造条件。 展开更多

关键词 人细胞角蛋白8CK8 基因克隆 原核表达

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胃窦部癌No.12b淋巴结转移的临床病理因素及临床意义研究

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作者 张宝 郑国良 +5 位作者 张勇 赵岩 朱海涛 张涛 刘勇 郑志超 《中华胃肠外科杂志》 CSCD 北大核心 2024年第2期167-174,共8页

目的探讨胃窦部癌No.12b淋巴结(微)转移的相关临床病理因素及其清扫的临床意义。方法本研究采用回顾性队列研究方法。收集2007年1月至2012年12月期间,于辽宁省肿瘤医院胃外科接受胃癌根治术(至少D2根治范围)+No.12b淋巴结清扫、无远处... 目的探讨胃窦部癌No.12b淋巴结(微)转移的相关临床病理因素及其清扫的临床意义。方法本研究采用回顾性队列研究方法。收集2007年1月至2012年12月期间,于辽宁省肿瘤医院胃外科接受胃癌根治术(至少D2根治范围)+No.12b淋巴结清扫、无远处转移、随访资料完整且未接受术前抗肿瘤治疗或伴有其他恶性肿瘤(史)的242例胃腺癌病例资料。鉴于胃癌淋巴结存在微转移的可能性,本研究应用抗体细胞角蛋白(CK)8/18进行免疫组织化学(免疫组化)检测患者No.12b淋巴结微转移情况。若患者苏木精-伊红(HE)染色和(或)CK8/18免疫组化结果为No.12b阳性,判定为No.12b(微)转移,纳入No.12b阳性组;反之则纳入No.12b阴性组。观察No.12b(微)转移情况,比较No.12b阳性和阴性两组患者的临床病理特征和5年无复发生存(RFS)情况,并进行相关危险因素分析。结果传统HE染色显示,242例胃腺癌患者中No.12b淋巴结阳性15例,阴性227例。共计241枚阴性No.12b淋巴结,免疫组化检测发现,其中7枚为No.12b淋巴结微转移阳性,微转移淋巴结检出率2.9%(7/241),且7枚分布于阴性病例中的不同病例,微转移率为3.1%(7/227)。据微转移结果进行重新分组:No.12b阳性组22例,占9.1%(22/242);No.12b阴性组220例,占90.9%(220/242)。多因素分析显示,No.12b淋巴结(微)转移与胃壁浆膜受侵越严重(HR=3.873,95%CI:1.676~21.643,P=0.006)、T3分期(HR=1.615,95%CI:1.113~1.867,P=0.045)、N分期越高(HR=1.768,95%CI:1.187~5.654,P=0.019)、TNM分期中Ⅲ期(HR=2.129,95%CI:1.102~3.475,P=0.046)以及No.1、No.8a、No.12a淋巴结转移有关(HR=0.451,95%CI:0.121~0.552,P=0.035;HR=0.645,95%CI:0.071~0.886,P=0.032;HR=1.512,95%CI:1.381~2.100,P=0.029)。生存分析显示,与No.12b阴性组相比,No.12b阳性组患者的5年RFS更差(18.2%比34.5%,P<0.001)。其中,原发肿瘤的分化越差(HR=0.528,95%CI:0.288~0.969,P=0.039)、浆膜受侵越严重(HR=1.262,95%CI:1.039~1.534,P=0.019)、T分期、N分期和 展开更多

关键词 胃肿瘤 胃窦部 淋巴结清扫 第12b组淋巴结 微转移 细胞角蛋白8/18 预后

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中青年宫颈癌患者组织Ki-67、CK8/18、CK7表达及相关性分析

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作者 张淋淋 陈子昂 杜彬 《河北医药》 CAS 2023年第12期1794-1797,1802,共5页

目的研究中青年宫颈癌患者组织细胞增殖核抗原67(Ki-67)、细胞角蛋白8/18(CK8/18)、CK7表达及相关性。方法选取2018年5月至2019年5月76例中青年宫颈癌患者,取术中宫颈癌组织和癌旁正常组织(癌旁2 cm)。采用免疫组织化学法检测两种组织中... 目的研究中青年宫颈癌患者组织细胞增殖核抗原67(Ki-67)、细胞角蛋白8/18(CK8/18)、CK7表达及相关性。方法选取2018年5月至2019年5月76例中青年宫颈癌患者,取术中宫颈癌组织和癌旁正常组织(癌旁2 cm)。采用免疫组织化学法检测两种组织中Ki-67、CK8/18、CK7阳性表达情况,分析宫颈癌组织中Ki-67阳性表达与CK8/18、CK7阳性表达的相关性。并比较不同病理特征患者Ki-67、CK8/18、CK7阳性表达情况,分析各指标与宫颈癌病理特征的相关性。术后随访3年,应用生存曲线分析宫颈癌组织中Ki-67、CK8/18、CK7阳性与阴性表达患者生存情况。结果中青年宫颈癌患者宫颈癌组织中Ki-67、CK8/18、CK7阳性率均高于癌旁正常组织(P<0.05);宫颈癌组织中Ki-67与CK8/18、CK7阳性率呈正相关(r值分别为0.351,0.328,P<0.05);临床分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润深度T3~T4级宫颈癌患者癌组织中CK8/18、CK7阳性率分别高于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度T1~T2级宫颈癌患者(P<0.05);宫颈癌组织中Ki-67阳性表达与临床分期、淋巴结转移、浸润深度无相关性(P>0.05);CK8/18、CK7阳性表达与临床分期、淋巴结转移、浸润深度呈正相关(r值分别为0.315、0.390、0.359、0.324、0.368、0.383,P<0.05);宫颈癌组织中Ki-67表达阳性、CK8/18表达阳性、CK7表达阳性患者3年生存率均低于阴性患者,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论中青年宫颈癌患者组织Ki-67、CK8/18、CK7阳性表达明显增高,其中CK8/18、CK7阳性表达与临床分期、淋巴结转移、浸润深度呈正相关,各指标均与患者预后有关。 展开更多

关键词 中青年 宫颈癌 细胞增殖核抗原67 细胞角蛋白8/18 细胞角蛋白7

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降低细胞膜角蛋白8和乳腺癌耐药蛋白的表达逆转耐药性 被引量：5

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作者 袁翔 程昕 +6 位作者 许元富 周圆 邵晓枫 李巍 任思楣 张秀丽 杨铭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1425-1429,共5页

目的研究细胞膜角蛋白8(CK8)和乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein,BCRP)作为多靶点治疗逆转耐药的可行性。方法共转染特异的CK8-siRNAs和BCRP-siRNAs至人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/MX,用Western blot方法检测siRNAs对CK8和... 目的研究细胞膜角蛋白8(CK8)和乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein,BCRP)作为多靶点治疗逆转耐药的可行性。方法共转染特异的CK8-siRNAs和BCRP-siRNAs至人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/MX,用Western blot方法检测siRNAs对CK8和BCRP蛋白表达的抑制,荧光染色用激光共聚焦显微镜观察细胞膜表面CK8表达量的变化,并用Sulforhodamine B的方法检测转染前后细胞对多种化疗药敏感性的变化。结果MCF-7/MX细胞导入CK8-siRNAs和BCRP-siRNAs后,CK8和BCRP的表达水平均明显降低,且细胞表面CK8染色也明显降低,同时对米托蒽醌等化疗药的敏感性明显提高,耐药表型明显逆转。结论CK8和BCRP在MCF-7/MX耐药细胞中共同高表达且在乳腺癌多药耐药表型的形成中起重要作用,共同抑制CK8和BCRP的表达可以有效逆转乳腺癌的多药耐药,为治疗肿瘤多药耐药提供了一条新的思路。 展开更多

关键词 多药耐药 细胞膜角蛋白8 多靶点治疗 乳腺癌耐药蛋白 RNA干扰 米托蒽醌

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过表达的细胞膜表面角蛋白8——乳腺癌多药耐药的一种新靶点 被引量：4

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作者 刘芳 高瀛岱 +5 位作者 郭红星 张砚君 代晓华 师锐赞 杨纯正 熊冬生 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1441-1444,共4页

目的研究细胞膜角蛋白8(CK8)过表达与乳腺癌多药耐药的相关性及其作为逆转乳腺癌耐药靶点的可行性。方法转染特异的CK8-siRNAs至人乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX,用Western blot方法检测siRNAs对CK8蛋白表达的抑制,荧光染色用激光共聚焦显微... 目的研究细胞膜角蛋白8(CK8)过表达与乳腺癌多药耐药的相关性及其作为逆转乳腺癌耐药靶点的可行性。方法转染特异的CK8-siRNAs至人乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX,用Western blot方法检测siRNAs对CK8蛋白表达的抑制,荧光染色用激光共聚焦显微镜观察细胞膜表面CK8表达量的改变,并用Sulforhodamine B的方法检测转染前后细胞对多种化疗药敏感性的变化。结果MCF-7/MX细胞导入CK8-siRNAs后,细胞膜CK8的表达水平明显抑制,同时对米托蒽醌等化疗药的敏感性明显提高,耐药表型明显逆转。结论CK8细胞内定位及表达水平的改变,在乳腺癌多药耐药表型的形成中起重要作用。作为一种新的耐药相关膜表面标志,细胞膜CK8有望成为逆转乳腺癌多药耐药诊断和治疗的新靶点。 展开更多

关键词 多药耐药 细胞膜角蛋白8 靶点 RNAI 乳腺癌

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