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鸽脂肪前体细胞的分离培养及成脂诱导分化研究
1
作者 梁小娟 李雨爽 +3 位作者 付周 唐铎 李莹莹 王守伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3482-3492,共11页
旨在建立鸽脂肪前体细胞的体外分离、培养、鉴定和成脂诱导分化的方法。本研究采集3只健康的1日龄银王鸽皮下脂肪组织,利用I型胶原酶进行消化以分离脂肪前体细胞,在脂肪前体细胞常规分离法基础上进行分离方法改良,对获得的脂肪前体细胞... 旨在建立鸽脂肪前体细胞的体外分离、培养、鉴定和成脂诱导分化的方法。本研究采集3只健康的1日龄银王鸽皮下脂肪组织,利用I型胶原酶进行消化以分离脂肪前体细胞,在脂肪前体细胞常规分离法基础上进行分离方法改良,对获得的脂肪前体细胞进行原代和传代培养,并观察细胞形态,通过免疫荧光鉴定特异性标记DLK1,确认脂肪前体细胞。通过在培养基中添加胰岛素和油酸钠进行成脂诱导分化,使用BODIPY493/503染色观察细胞中的脂滴分布情况,通过甘油三酯测定试剂盒检测细胞中甘油三酯的含量,采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测脂肪前体细胞成脂分化过程中分化相关基因的表达。研究结果表明,鸽脂肪前体细胞呈梭形,改良分离法比常规分离法能够获得更多的脂肪前体细胞;与37℃相比,在41℃培养温度下,获得的脂肪前体细胞数目显著增加(P<0.001)。免疫荧光结果表明,DLK1表达为阳性,说明获得的是脂肪前体细胞。BODIPY493/503染色结果显示,分化6 d的细胞中产生大量的脂滴。且随着分化时间的增加,细胞中甘油三酯的相对含量也显著增加(P<0.01)。qPCR结果显示,在添加诱导剂2 d时,PPARγ、SCD、DGAT2、PLIN2、FASN、AFABP、LPL基因的表达量显著上调(P<0.05),之后随分化时间的增加表达逐渐上调;SREBF 1基因在分化2 d时表达量显著上调(P<0.05),之后表达量不变;ACACA基因在分化2 d时,表达量显著增加(P<0.05),在分化4 d时表达量达到高峰。Western blot结果表明,在分化2 d时,PPARγ、LPL和PLIN2的表达量显著上调(P<0.05),之后随着分化时间的延长,表达量进一步升高。综上所述,本研究改良了脂肪前体细胞常规分离法,成功分离获得鸽脂肪前体细胞,且筛选出最适培养温度。获得的鸽脂肪前体细胞经胰岛素和油酸钠诱导后能高效地分化为成熟的脂肪细胞。本研究为鸽脂肪代谢分子调控机制的� 展开更多
关键词 鸽 脂肪前体细胞 成脂分化 成熟脂肪细胞 细胞培育肉
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北京黑猪脂肪前体细胞的分离培养及成脂诱导分化研究
2
作者 梁小娟 李雨爽 +1 位作者 李莹莹 王守伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2877-2889,共13页
旨在建立北京黑猪脂肪前体细胞的分离培养及成脂诱导分化培养体系,为研究猪脂肪沉积的分子机制提供试验材料,为生物培育肉的制备提供技术指导。本研究采集1头7日龄健康的北京黑猪公猪的颈部皮下脂肪组织,使用机械法联合I型胶原酶消化法... 旨在建立北京黑猪脂肪前体细胞的分离培养及成脂诱导分化培养体系,为研究猪脂肪沉积的分子机制提供试验材料,为生物培育肉的制备提供技术指导。本研究采集1头7日龄健康的北京黑猪公猪的颈部皮下脂肪组织,使用机械法联合I型胶原酶消化法分离脂肪前体细胞。对获得的脂肪前体细胞进行形态观察、生长曲线绘制、免疫荧光鉴定、成脂诱导分化、油红O染色、BODIPY染色、甘油三酯含量测定及使用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测成脂分化相关基因的表达。结果表明,分离的北京黑猪脂肪前体细胞贴壁后呈长梭形,细胞生长曲线呈S型。免疫荧光结果表明,PREF1表达为阳性,表明分离的细胞的确为脂肪前体细胞。在相同的诱导试剂组合条件下,使用10%FBS比2%FBS成脂诱导分化效果更好。在相同血清浓度的情况下,鸡尾酒法与油酸钠、罗格列酮共同联用的细胞分化效果较好。分化8 d的细胞中出现大量的脂滴,脂滴经油红O染色呈红色,经BODIPY染色呈绿色。且分化8 d的细胞中甘油三酯的含量显著升高(P<0.001)。qPCR结果显示,PPARγ、CEBPα、ACCα、LPL、SCD和FABP4在分化2 d时表达量均显著升高(P<0.05),4~6 d达到高峰,8 d时表达量降低。Western blot结果表明,PPARγ、CEBPα、FABP4、APN在细胞分化过程中表达逐渐上调。PREF1在细胞分化过程中表达逐渐下调。在三维培养情况下,使用10%FBS,鸡尾酒法与油酸钠、罗格列酮共同联用也能使脂肪前体细胞分化为成熟的脂肪细胞,分化8 d的细胞中脂滴经BODIPY和油红O染色后分别呈绿色和红色,且PPARγ、CEBPα、ACCα、LPL、SCD和FABP4在分化8 d的细胞中的表达量显著上调(P<0.001)。综上所述,本研究成功建立了北京黑猪脂肪前体细胞的分离与培养体系,并筛选出适合二维和三维培养的成脂诱导分化方法,为进一步研究猪脂肪沉积的分子机制和改善肉品质奠 展开更多
关键词 北京黑猪 脂肪前体细胞 成脂诱导分化 成熟脂肪细胞 三维培养 细胞培育肉
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论“道德物化”的实践困境——以细胞培育肉技术为例
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作者 练新颜 《科学技术哲学研究》 北大核心 2024年第3期69-75,共7页
“道德物化”被认为是规范技术和规范人的行为的新思路,得到大力倡导。文章以细胞培育肉技术为例考察了该思路的实践困境。细胞培育肉技术的研发是为了解决目前人类肉食伦理困境,从而被认为是“道德物化”的典范:有利于保护环境,提高动... “道德物化”被认为是规范技术和规范人的行为的新思路,得到大力倡导。文章以细胞培育肉技术为例考察了该思路的实践困境。细胞培育肉技术的研发是为了解决目前人类肉食伦理困境,从而被认为是“道德物化”的典范:有利于保护环境,提高动物福利;有利于人类自身的健康和满足人们对肉食的偏好。但是试图通过“道德物化”来解决“吃肉”的伦理困境,其径路是建立在现代营养学和相关数据的线性预测的基础上的,更基础方面被忽略了。该技术的应用在实践中可能会遭遇以下三方面的困境:首先“肉食”作为一种社会历史的建构,其影响不能仅仅从营养成分来考虑;其次,细胞培育肉要发挥环境保护、动物福利等伦理效应要看其嵌入社会的文化、经济、政治等方面的深度;最后,饮食作为社会活动的重要组成部分,受影响的因素非常多,肉食困境解决的方案是多样性的,我们需要多方面因素的考量。 展开更多
关键词 道德物化 细胞培育肉 技术治理
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国外细胞培育肉的监管发展动态及对我国的借鉴
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作者 李石磊 李莹莹 +2 位作者 王守伟 杨峰 刘屹森 《中国食品安全》 2023年第1期88-95,共8页
近年来随着细胞培育肉工程化实施的不断推进,细胞培育肉的种类不断丰富、生产规模逐渐扩大,商业化的趋势愈发显著。首先,本文通过对生物活性因子、化学物质、种子细胞转基因、产品标签标识等关键特点的综述分析阐明细胞培育肉的特殊性... 近年来随着细胞培育肉工程化实施的不断推进,细胞培育肉的种类不断丰富、生产规模逐渐扩大,商业化的趋势愈发显著。首先,本文通过对生物活性因子、化学物质、种子细胞转基因、产品标签标识等关键特点的综述分析阐明细胞培育肉的特殊性、发展性及与监管之间的关系。然后,本文详细介绍了联合国粮农组织、美国、新加坡、以色列、欧盟、英国、卡塔尔、澳大利亚、新西兰和日本等在细胞培育肉监管方面的进展、经验和不足,系统展示了全球在细胞培育肉监管发展方面的发展动态。最后,本文在总结上述综述分析的基础上提出了供我国下一步开展细胞培育肉监管的借鉴建议:1)行业相关方面进行充分的沟通交流;2)基于行业发展现状制定监管实施细则;3)充分考虑技术的特殊性和发展性;4)构建风险因子数据库。细胞培育肉的监管是事关这一创新型产品能否获得消费者认可的关键一环,合理的监管不仅可以保障食品安全而且有助于吸引优秀的企业在国内发展。 展开更多
关键词 细胞培育肉 细胞培养肉 监管 食品安全 技术特点
原文传递
利用微载体系统规模化生产鸡成肌细胞
5
作者 刘屹森 蔡佳琦 +9 位作者 李石磊 李莹莹 王守伟 杨峰 胡海娟 刘文婷 李雨爽 董圣艳 陈嘉璇 梁俊 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第24期127-137,共11页
随着细胞培育肉产业的快速发展,应用于细胞培育肉生产的细胞规模化培养技术受到广泛关注。本研究采用3D Table Trix^(TM)和Cytodex 1两种微载体在转瓶中对成肌细胞进行悬浮培养,筛选出更适于成肌细胞大规模培养的微载体,进而采用单因素... 随着细胞培育肉产业的快速发展,应用于细胞培育肉生产的细胞规模化培养技术受到广泛关注。本研究采用3D Table Trix^(TM)和Cytodex 1两种微载体在转瓶中对成肌细胞进行悬浮培养,筛选出更适于成肌细胞大规模培养的微载体,进而采用单因素控制变量法探讨了不同培养条件对细胞大规模培养的影响。两种微载体的显微示意图显示,Cytodex 1是一种表面光滑且无大孔结构的球体,3D Table Trix^(TM)是一种表面多孔且孔隙较大的不规则球体。细胞转瓶培养结果显示,细胞在3D Table Trix^(TM)上生长更加高效,培养10 d后细胞收获量为8.97×10^(5)个/m L。优化细胞在3D Table Trix^(TM)的培养条件,结果显示,在细胞贴壁期,以40 r/min速率搅拌10 min、静置50 min的间隔搅拌方式培养最佳;在细胞接种密度1×10^(5)个/m L、微载体质量浓度2 mg/m L、搅拌速率40 r/min的条件下,初始培养血清体积分数为20%,培养24 h后更换为血清体积分数10%的培养基,并采用隔天更换50%培养基的补料方式,可获得最佳的细胞培养效率。通过微载体的珠对珠转移,将细胞转移至2 L转瓶,最终收获细胞数量1.07×10^(9)个,存活率达到95%以上。带有细胞的微载体还可以冻存和复苏,并且和解冻细胞的增殖状况和形态没有显著差异。优化后的培养工艺实现了在转瓶中成肌细胞高效的大规模培养,并在工业化大规模生产细胞培育肉领域具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 成肌细胞 细胞培育肉 微载体 转瓶 优化培养工艺
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纤维素基生物材料在细胞培育肉生产中的应用 被引量：2
6
作者 唐雨楠 史陈晨 +2 位作者 杨明 盛奎川 张玺铭 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第19期295-307,共13页
随着细胞培育肉研究的兴起,应用于细胞培育肉生产的可食用支架受到高度关注。纤维素具有丰富易得、可食用、非动物源、成本低、可商业化生产等特点,这些都展示了纤维素用于细胞培育肉的重要潜力。本综述首先介绍了不同种类纤维素(植物... 随着细胞培育肉研究的兴起,应用于细胞培育肉生产的可食用支架受到高度关注。纤维素具有丰富易得、可食用、非动物源、成本低、可商业化生产等特点,这些都展示了纤维素用于细胞培育肉的重要潜力。本综述首先介绍了不同种类纤维素(植物纤维素、细菌纤维素)的基本理化性质,其次围绕支架的一系列特定结构(多孔、定向、球形结构、天然精密结构、可定制结构),提出了针对纤维素基细胞培育肉支架的制备方法,最后讨论了纤维素应用于细胞培育肉支架中的主要挑战,并提供了可能的解决方案,以期为低成本、连续化生产纤维素基支架以及良好培育肌肉、脂肪细胞提供参考。 展开更多
关键词 纤维素衍生物 去细胞植物组织 支架 微载体 水凝胶 生物墨水 细胞培育肉
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细胞培育肉种子细胞永生化诱导研究 被引量：1
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作者 杨峰 李莹莹 +2 位作者 王守伟 刘文婷 李石磊 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第12期52-62,共11页
目的:构建永生化种子细胞是解决细胞培育肉种子细胞来源高效、可持续的有效手段。方法:基于猪成肌细胞,通过端粒酶逆转录酶进行诱导载体的构建,核转染到细胞后分别通过免疫荧光标记、定量PCR、染色体核型分析等方法进行细胞诱导验证。结... 目的:构建永生化种子细胞是解决细胞培育肉种子细胞来源高效、可持续的有效手段。方法:基于猪成肌细胞,通过端粒酶逆转录酶进行诱导载体的构建,核转染到细胞后分别通过免疫荧光标记、定量PCR、染色体核型分析等方法进行细胞诱导验证。结果:构建永生化细胞诱导载体序列完整度高、无突变;成功将载体转入细胞高效表达并获得诱导阳性细胞株1个;转染后染色体核型未发生不可控的突变;同时诱导后的细胞端粒酶逆转录酶表达量显著高于对照组;更重要的是诱导阳性细胞传代次数突破“Hayflick”增殖界限,实现了200以上的传代次数。结论:构建了猪成肌细胞永生化诱导载体,鉴定了细胞诱导后的稳定性,该永生化种子细胞将在细胞培育肉生产中具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 细胞培育肉 种子细胞 永生化 诱导载体 端粒酶逆转录酶
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动物细胞培育肉及其种子细胞优选与永生化策略
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作者 仝西魁 付云辉 +2 位作者 郑文云 王阳敏 马兴元 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期56-65,共10页
鉴于传统养殖和屠宰获取肉类食品的方式,环境污染、资源浪费和多种有害成分残留等方面问题不断加剧,以及未来绿色低碳发展所面临的现实问题,随着“细胞农牧”科技的兴起,国内外研究者和企业家将目光转向了具有综合优势的细胞培育肉生产... 鉴于传统养殖和屠宰获取肉类食品的方式,环境污染、资源浪费和多种有害成分残留等方面问题不断加剧,以及未来绿色低碳发展所面临的现实问题,随着“细胞农牧”科技的兴起,国内外研究者和企业家将目光转向了具有综合优势的细胞培育肉生产新模式。与以多种蛋白质资源为原料进行调制加工的“植物人造肉”不同,动物细胞培育所生产细胞培育肉,在营养品质和口感上更接近“真肉”,有望成为细胞合成生物技术生产替代蛋白质的未来发展新热点,已成为新兴食品科技和产业与投资界的新宠。将细胞培育成具有一定规模和效率的“培育肉”,将对生长效率与周期,以及规模化生产的成本控制具有基础性作用,其中最为关键的是种子细胞及其永生化扩增能力。主要就国内外有关动物细胞培育肉概况、种子细胞优选与实现其永生化策略,以及动物细胞培育肉方面科技伦理等进行较为系统的综述和分析,为我国开展相关研究和细胞培育肉产业提供重要参考。 展开更多
关键词 动物细胞培育肉 种子细胞优选 干细胞 永生化 人造肉 科技伦理
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