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CDE诱导慢性肝损伤过程中肝细胞特异性过表达细胞周期抑制因子P21促进胆管上皮细胞转分化为成熟肝细胞研究
1
作者 刘清桂 王紫君 +2 位作者 王敏君 杜涵 陈费 《实用肝脏病杂志》 CAS 2023年第4期466-471,共6页
目的探讨慢性损伤模型细胞周期抑制因子P21(P21)表达对肝损伤程度和胆管上皮细胞转分化为肝细胞的影响。方法利用谱系示踪技术建立胆管上皮细胞示踪模型小鼠;在胆管上皮细胞示踪小鼠,利用腺相关病毒构建肝细胞特异性P21过表达模型;利用... 目的探讨慢性损伤模型细胞周期抑制因子P21(P21)表达对肝损伤程度和胆管上皮细胞转分化为肝细胞的影响。方法利用谱系示踪技术建立胆管上皮细胞示踪模型小鼠;在胆管上皮细胞示踪小鼠,利用腺相关病毒构建肝细胞特异性P21过表达模型;利用胆碱缺乏/乙硫氨酸补充饮食(CDE)构建小鼠严重慢性肝损伤模型;采用蛋白印迹和免疫组织荧光法检测胆管上皮细胞标记和P21过表达水平,以过表达P21为实验组,过表达空载体为对照组,取损伤2 w和损伤后恢复2 w的小鼠肝组织,采用蛋白印迹、免疫组织化学和免疫组织荧光等技术检测肝损伤程度、细胞增殖水平、胆管上皮细胞转分化效果和转分化细胞特性。结果在CDE诱导慢性肝损伤小鼠,肝细胞特异性过表达P21组肝脏外观表面失去原有光泽,肝质量比为(4.5±0.1)%,显著低于对照组【(5.2±0.2)%,P<0.05】;血清AST、ALT和TBIL水平分别为(385.4±12.7)U/L、(423.8±32.4)U/L和(21.3±1.4)μmol/L,显著高于对照组【分别为(175.9±11.4)U/L、(214.8±23.5)U/L和(10.5±0.9)μmol/L,P<0.05】;过表达P21组肝细胞Ki67阳性比例为(0.1±0.1)%,显著低于对照组【(8.2±1.5)%,P<0.05】,S期标志蛋白CyclinA2阳性比例为(0.1±0.2)%,显著低于对照组【(3.2±0.7)%,P<0.05】,而两组间G1期特异性蛋白CyclinD1阳性比例无显著性差异【(43.2±3.5)%对(42.0±2.8)%,P>0.05】,提示肝细胞过表达细胞周期抑制蛋白P21使肝细胞阻滞于G1/S期;肝细胞过表达细胞周期抑制蛋白P21组在损伤恢复2周时出现了带有绿色荧光标记的肝细胞样克隆,这群细胞表达HNF4α肝细胞标志物。进一步分析发现绿色肝细胞样克隆具有成熟肝细胞的特征,比如表达Alb、CYP3A4、CYP2E1和CYP2D6等。结论在肝损伤过程中,P21过表达抑制肝细胞增殖能力,导致肝损伤程度加剧,从而促进胆管上皮细胞转分化为具有功能的成熟肝细胞。 展开更多
关键词 肝细胞 胆管细胞 细胞周期抑制因子p21 转分化 小鼠
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Sall2和p21与肌萎缩侧索硬化症海马区病变关系分析
2
作者 徐进超 王雪枚 +5 位作者 应涵韬 陈燕春 赵建涛 霍姿君 张凌云 郭章玉 《潍坊医学院学报》 2022年第3期161-165,共5页
目的检测SOD1-G93A突变型肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠海马中婆罗双树样基因-2(Sall2)和细胞周期抑制因子p21的表达变化及其与ALS海马区病变的关系。方法将33对SOD1-G93A突变型ALS转基因小鼠和同窝野生型(WT)小鼠于95d、108d和122d... 目的检测SOD1-G93A突变型肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠海马中婆罗双树样基因-2(Sall2)和细胞周期抑制因子p21的表达变化及其与ALS海马区病变的关系。方法将33对SOD1-G93A突变型ALS转基因小鼠和同窝野生型(WT)小鼠于95d、108d和122d分别取材,应用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学染色实验检测Sall2和p21不同发病时期海马中mRNA和蛋白水平表达变化及其在海马中的表达规律。结果与同窝WT小鼠相比,Sall2 mRNA和蛋白在ALS转基因小鼠海马中108d、122d表达均下调,p21 mRNA水平无明显变化,p21蛋白在108d、122d表达均上调(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,与同窝WT小鼠相比,122d龄ALS转基因小鼠海马中Sall2免疫反应性降低,而p21免疫反应性升高。结论ALS转基因小鼠中Sall2和p21的表达异常与ALS海马区病变密切相关。 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化症 婆罗双树样基因-2 细胞周期抑制因子p21 ALS转基因小鼠 海马
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丙戊酸钠对急性髓系白血病细胞周期相关因子的影响 被引量：1
3
作者 王丽红 张志华 +3 位作者 朱松岩 赵蕾 朱翠敏 郝长来 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第24期3708-3711,共4页
目的探讨组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)诱导急性髓系白血病细胞周期阻滞的分子学机制。方法用急性髓系白血病细胞系Kasumi-1细胞皮下接种裸鼠,建立裸鼠移植瘤模型,用VPA处理(VPA治疗组)。采用RT-PCR及Western blot方法分... 目的探讨组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)诱导急性髓系白血病细胞周期阻滞的分子学机制。方法用急性髓系白血病细胞系Kasumi-1细胞皮下接种裸鼠,建立裸鼠移植瘤模型,用VPA处理(VPA治疗组)。采用RT-PCR及Western blot方法分析对照组(每天向腹腔内注射生理盐水)和VPA治疗组瘤组织的细胞周期相关调控因子P21 mRNA及E2F-1蛋白的变化;染色质共沉淀(Chip)法检测P21启动子区域组蛋白乙酰化程度;蛋白免疫共沉淀(Co-ip)法检测Rb/E2F-1复合体的改变。结果 VPA治疗组裸鼠移植瘤组织E2F-1蛋白的表达水平明显降低,Rb/E2F-1复合体的水平增加,P21 mRNA水平上调,P21启动子区域组蛋白乙酰化水平增强(P<0.01)。结论 VPA作为HDAC抑制剂,能够提高P21启动子区域组蛋白乙酰化程度,使基因转录增强,增加P21基因表达,抑制pRb磷酸化,阻断了E2F的转录激活作用,这可能是VPA诱导细胞周期阻滞发挥抗肿瘤作用的机制之一。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 急性髓系白血病 细胞周期 细胞周期蛋白激酶抑制因子p21 细胞转录因子
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甲基莲心碱对人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及Cyclin D1,P^(21Waf1/Cip1)表达的影响 被引量：2
4
作者 童国新 李晓春 +2 位作者 王宁夫 来蕾 冷建杭 《中华中医药学刊》 CAS 2011年第2期305-309,共5页
目的:观察甲基莲心碱对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMCs)增殖,Cyclin D1及P21Waf1/Cip1表达的影响,旨在探讨甲基莲心碱作用的分子机制。方法:采用MTT法和流式细胞仪观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及甲基莲心碱对HUVSMCs增殖的影响。用免疫印迹法检... 目的:观察甲基莲心碱对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMCs)增殖,Cyclin D1及P21Waf1/Cip1表达的影响,旨在探讨甲基莲心碱作用的分子机制。方法:采用MTT法和流式细胞仪观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及甲基莲心碱对HUVSMCs增殖的影响。用免疫印迹法检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cyclin D1及P21Waf1/Cip1rnRNA的表达。结果:AngⅡ对HUVSMCs有明显促增殖作用,其促增殖效应在24 h达到峰值,且在0.001-0.1μmol/L浓度范围内有剂量依赖关系。甲基莲心碱呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的HUVSMCs增殖,同时可抑制AngⅡ诱导的Cyclin D1蛋白及mRNA的表达,促进P21Waf1/Cip1蛋白及mRNA表达。结论:甲基莲心碱可通过下调Cyclin D1及上调P21Waf1/Cip1的表达阻滞细胞周期的进程,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,是一种有效的抑制血管平滑肌细胞增殖的药物。 展开更多
关键词 甲基莲心碱 血管平滑肌细胞 细胞周期蛋白D1 细胞周期蛋白激酶抑制因子p21Waf1/Cip1 增殖
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