高吸水性树脂协同高强度聚焦超声对细粒棘球绦蚴原头节细胞酶活性的影响

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作者 张静 王梦莹 +4 位作者 叶彬 赵毅峰 韩秀敏 李发琪 王琦 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期987-993,共7页

目的为探索高吸水性树脂(Super Absorbent Resin,SAR)协同高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)对离体细粒棘球绦蚴原头节酶活性的影响。方法将离体原头节悬液(每mL含有2 000个原头节),分为4组:I组(仅原头节悬液)、... 目的为探索高吸水性树脂(Super Absorbent Resin,SAR)协同高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound,HIFU)对离体细粒棘球绦蚴原头节酶活性的影响。方法将离体原头节悬液(每mL含有2 000个原头节),分为4组:I组(仅原头节悬液)、Ⅱ组:仅SAR组(0.01gSAR)、III组(单纯HIFU照射)、IV组(HIFU照射+0.01gSAR)、Ⅴ组(HIFU照射+0.1gSAR)。以声功率为100w的高强度聚焦超声波辐照30s,辐照后悬液涂片进行台盼兰及经冰冻切片酶组织化学染色,观察原头节形态学改变,并用半定量方法检测原头节内细胞的葡萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶的活性。结果显示当超声剂量一定时,原头节的形态改变与SAR剂量有正效应关系,SAR量越大,其破坏程度越高。正常原头节透亮、外形完整,各实验组原头节深染或结构崩解。单纯HIFU照射组在作用60s时,原头节死亡率为80.1%;HIFU结合不同量SAR两组原头节在HIFU作用10s时,其死亡率分别为87.82%和89.1%。加入SAR后再经过HIFU照射各组原头节内细胞葡萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶活性降低,明显低于单纯超声组(P<0.05),阴性对照组无酶反应物产。结论 SAR能增加HIFU辐照对原头节的急性杀伤作用,使原头节内细胞的葡萄糖-6-磷酸酶活性和琥珀酸脱氢酶活性均显著低降低,从而影响其活力。 展开更多

关键词 细粒棘球绦蚴原头节 高吸水性树脂 高强度聚焦超声 三磷酸腺苷酶 葡萄糖-6-磷酸酶 琥珀酸脱氢酶

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去氢骆驼蓬碱体外诱导细粒棘球蚴原头节凋亡过程中caspase-3及抗氧化酶活性检测分析 被引量：7

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作者 巩月红 高惠静 +5 位作者 卢帅 郑璇 文丽梅 陈蓓 赵军 王建华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第11期1207-1210,共4页

目的观察不同浓度去氢骆驼蓬碱体外诱导细粒棘球蚴原头节生长凋亡过程中虫体活力、Caspase-3及相关抗氧化酶活性变化。方法将体外培养的细粒棘球蚴原头节分为空白对照组、溶剂组、阿苯达唑(ABZ)阳性对照组及不同浓度去氢骆驼蓬碱(25、50... 目的观察不同浓度去氢骆驼蓬碱体外诱导细粒棘球蚴原头节生长凋亡过程中虫体活力、Caspase-3及相关抗氧化酶活性变化。方法将体外培养的细粒棘球蚴原头节分为空白对照组、溶剂组、阿苯达唑(ABZ)阳性对照组及不同浓度去氢骆驼蓬碱(25、50μmol/L)处理组进行体外干预试验,于48、96、144、192、240、288h后取样,经0.1%伊红染色后置于倒置显微镜下观察原头节活力。试验重复验证3次,绘制活力曲线图。用ELISA试剂盒检测作用48h、96h后各浓度组原头节caspase-3及抗氧化酶HO-1和NQO-1的活性变化。结果去氢骆驼蓬碱处理组从作用第48h开始原头节活力开始下降,培养至第240h时25μmol/L组原头节死亡率为97.9%,50μmol/L组原头节均死亡。ELISA法测定25、50μmol/L去氢骆驼蓬碱作用原头节48h后caspase-3活性分别为(32.776±8.437)ng/ml和(52.129±5.949)ng/ml,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);ELISA法测定25、50μmol/L去氢骆驼蓬碱作用48、96h后原头节抗氧化酶HO-1和NQO-1活性分别为(0.563±0.031)ng/ml、(1.832±0.10)ng/ml和(0.425±0.011)ng/ml、(1.288±0.05)ng/ml,差异均有统计学意义(P<0.05),且呈时间及剂量依赖性。结论去氢骆驼蓬碱能抑制体外培养的细粒棘球蚴原头节的生长,并能降低caspase-3及抗氧化酶活性,具体机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 去氢骆驼蓬碱 细粒棘球蚴原头节 活性

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纳米化阿苯达唑对细粒棘球蚴原头节生长的影响 被引量：5

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作者 郭峰 董丹 +5 位作者 陈聪哲 杨琨 侯隽 王仙 吴向未 陈雪玲 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2018年第4期482-485,共4页

目的观察比较阿苯达唑粉剂和纳米化阿苯达唑在体外对细粒棘球蚴原头节作用的影响。方法将阿苯达唑粉剂溶解于DMSO后与纳米化阿苯达唑分别配成3.13、6.25、12.5、25μg/m L浓度,按照所设分组体外培养,倒置显微镜下观察各药物处理组经伊... 目的观察比较阿苯达唑粉剂和纳米化阿苯达唑在体外对细粒棘球蚴原头节作用的影响。方法将阿苯达唑粉剂溶解于DMSO后与纳米化阿苯达唑分别配成3.13、6.25、12.5、25μg/m L浓度,按照所设分组体外培养,倒置显微镜下观察各药物处理组经伊红染色后原头节的形态及活力。ELISA试剂盒测定药物作用3、6 d后原头节体内抗氧化酶NQO-1的活性变化。结果将相同条件下阿苯达唑粉剂和纳米环阿苯达唑各浓度组原头节的活力较空白对照组降低。12.5、25μg/m L浓度组纳米化阿苯达唑酶活性变化高于阿苯达唑粉剂组。结论阿苯达唑粉剂和纳米阿苯达唑均有不同程度的体外抗细粒棘球蚴原头节作用;纳米化阿苯达唑在体外抑制细粒棘球蚴原头节生长作用优于普通阿苯达唑粉剂,有望成为治疗细粒棘球蚴病的一种新的剂型。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴原头节 阿苯达唑 纳米材料 体外实验

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不同浓度二甲基亚砜对细粒棘球蚴原头节生长的影响 被引量：1

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作者 李芳芳 王勃 +2 位作者 崔仁杰 陈志广 吕海龙 《系统医学》 2023年第7期6-10,共5页

目的探讨不同浓度二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对细粒棘球蚴原头节生长的影响。方法2020年1月—2022年6月陇南市第一人民医院联合石河子大学课题组用不同浓度浓度的二甲基亚砜(0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、2.0%)对细粒棘球蚴原头... 目的探讨不同浓度二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对细粒棘球蚴原头节生长的影响。方法2020年1月—2022年6月陇南市第一人民医院联合石河子大学课题组用不同浓度浓度的二甲基亚砜(0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、2.0%)对细粒棘球蚴原头节进行处理,RPMI 1640培养基设为空白对照组,采用0.1%伊红染色法检测细粒棘球蚴原头节在48 h的生长情况,观察不同浓度的二甲基亚砜对体外原头节生长的影响;用活性试剂盒检测作用48 h后原头节内Caspase-3酶活性的影响;透射电镜观察DMSO作用48 h后原头节内部超微结构的改变。结果0.5%的DMSO作用原头节48 h后,原头节存活率与空白对照组对比,差异无统计学意义(P>0.05);但浓度为1.0%、2.0%DMSO作用原头节48 h后,其存活率分别为(55.3±1.13)%、(41.7±1.24)%,其存活力明显低于空白对照组,差异有统计学意义(t=8.726、9.217,P<0.05)。1.0%、2.0%DMSO作用后头节Caspase-3活性明显增加。2.0%DMSO组内部超微结构变化包括合胞体带疏松、表面微绒毛减少。结论在DMSO浓度0.1%~0.5%的范围内对细胞产生影响无明显变化。 展开更多

关键词 二甲基亚砜 细粒棘球蚴原头节 CASPASE-3 TEM 生长

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雄黄对细粒棘球蚴原头节体外生长及抗氧化酶活性的影响 被引量：3

5

作者 陈琳 于云宝 +3 位作者 许雅 王麟尧 秦文娟 姜玉峰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第1期58-63,共6页

目的初步探讨雄黄对体外细粒棘球蚴原头节生长及抗氧化酶的影响。方法在体外培养的基础上,将不同浓度雄黄分别作用细粒棘球蚴原头节2 d,光镜下观察原头节活力及形态变化;扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察原头节表面及内部超微结构改变... 目的初步探讨雄黄对体外细粒棘球蚴原头节生长及抗氧化酶的影响。方法在体外培养的基础上,将不同浓度雄黄分别作用细粒棘球蚴原头节2 d,光镜下观察原头节活力及形态变化;扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察原头节表面及内部超微结构改变;采用ELISA法测定SOD、ROS、HO-1和NQO-1表达情况;采用Caspase-3试剂盒检测原头节Caspase-3酶活性。结果250、500、1000、2000μmol/L雄黄体外作用于细粒棘球蚴原头节均能抑制其生长,雄黄作用2 d后光镜下观察原头节形态结构均发生改变,虫体萎缩,伊红染色呈红色(正常虫体为透明无色);SEM下观察原头节虫体皱缩,原头节正常形态被破坏;TEM下观察原头节内部微绒毛减少,合胞体带变薄、结构松散并有少量脂滴。EUSA检测SOD、HO-1和NQO-1活性均呈下降趋势,ROS和caspase-3酶活性均呈升高趋势(均P<0.05)。结论雄黄体外可抑制细粒棘球蚴原头节生长,破坏原头节形态结构,降低抗氧化酶活性,该抑制作用与机体抗氧化防御系统平衡失调有关。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴原头节 雄黄 抗氧化酶

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羟基喜树碱对细粒棘球蚴原头节的生长抑制作用及其机制 被引量：2

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作者 姜玉峰 马容基 +4 位作者 李佳洁 陈琳 许雅 马斌 吕海龙 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第10期1155-1159,共5页

目的观察羟基喜树碱(HCPT)对体外培养的细粒棘球蚴原头节生存抑制作用及其机制,寻找减少肝脏包虫病术后复发和术中头节外溢的安全高效的可行性药物,并探索其药物作用靶点,为肝脏包虫病的治疗用药提供更多的选择。方法体外培养细粒棘球... 目的观察羟基喜树碱(HCPT)对体外培养的细粒棘球蚴原头节生存抑制作用及其机制,寻找减少肝脏包虫病术后复发和术中头节外溢的安全高效的可行性药物,并探索其药物作用靶点,为肝脏包虫病的治疗用药提供更多的选择。方法体外培养细粒棘球蚴原头节,分别加入浓度为2.5μmol/L和5μmol/L的HCPT中,37℃恒温孵育2 d和4 d后伊红染色检测原头节生长活力;采用酶标法检测ROS,GSH和caspase-3活性;Western blot检测GRP78和Caspase-12蛋白表达水平。结果 HCPT对细粒棘球蚴生长有抑制作用,HCPT2.5μmol/L和5μmol/L作用4 d,细粒棘球蚴原头节的活力分别为28.2%和7.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。高浓度HCPT组ROS和caspase-3含量与对照组比较增高,GSH含量降低(P<0.05);高浓度HCPT作用组GRP78和Caspase-12表达量与对照组比较增加(P<0.05)。结论 HCPT体外可抑制细粒棘球蚴原头节存活,内质网应激机制可能参与其中。 展开更多

关键词 羟基喜树碱(HCPT) 细粒棘球蚴原头节 内质网应激

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阿霉素体外抗细粒棘球蚴原头节作用研究 被引量：2

7

作者 田春艳 陈蓓 +6 位作者 卢帅 文丽梅 赵军 郑璇 库尔班泥沙·阿马洪 高旖 王建华 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期571-575,582,共6页

目的研究阿霉素(Dox)对细粒棘球蚴原头节的体外抑制作用。方法4800个原头节随机分为空白对照组、1%DMSO组、Dox组(25、50、100、200、400、600μmol/L),每组200个原头节,设3个平行组,体外干预24 h。伊红拒染实验检测Dox干预后原头节活力... 目的研究阿霉素(Dox)对细粒棘球蚴原头节的体外抑制作用。方法4800个原头节随机分为空白对照组、1%DMSO组、Dox组(25、50、100、200、400、600μmol/L),每组200个原头节,设3个平行组,体外干预24 h。伊红拒染实验检测Dox干预后原头节活力,统计存活率。扫描电镜观察Dox干预后原头节表面超微结构变化。单细胞凝胶电泳实验检测Dox干预后原头节DNA损伤程度。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Dox干预后DNA损伤相关基因共济失调毛细血管扩张症突变激酶(ATM)、p53、DNA拓扑异构酶2A(Topo2a)的mRNA表达水平。结果伊红拒染实验结果显示,空白对照组、1%DMSO组、25、50、100、200、400、600μmol/L Dox组细粒棘球蚴原头节的存活率分别为(99.0±0.5)%、(98.6±0.3)%、(96.0±1.4)%、(80.3±4.8)%、(75.6±6.2)%、(53.2±3.0)%、(26.4±8.1)%和0,IC50为(267.9±7.1)μmol/L。与空白对照组相比,1%DMSO组、25μmol/L Dox组原头节存活率差异无统计学意义(P>0.05),50、100、200、400、600μmol/L Dox组原头节存活率差异有统计学意义(P<0.01)。扫描电镜结果显示,空白对照组、1%DMSO组原头节表面光滑,头节呈球形或椭圆形,顶突完整,微毛清晰可见;400μmol/L Dox组原头节吸盘变形,体部塌陷严重,顶突轻微变形,微毛明显脱落,虫体表层发生皱缩。单细胞凝胶电泳实验结果显示,100μmol/L Dox组原头节出现拖尾现象,彗星尾距(OTM)为16.6±1.7,与空白对照组(0.1±0.0)相比,差异有统计学意义(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,1%DMSO组原头节ATM、p53和Topo2a mRNA相对表达量分别为1.0±0.1、1.1±0.1、1.3±0.9,与空白对照组(1.0±0.1、1.0±0.4、1.0±0.1)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。100μmol/L Dox组原头节ATM、p53和Topo2a mRNA相对表达量分别为38.6±3.5、10.0±2.5、54.0±0.8,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Dox具有体外抗细粒棘球蚴原头节作用,可引起虫体DNA损伤,可能与ATM、p53、Topo2a� 展开更多

关键词 阿霉素 细粒棘球蚴原头节 DNA损伤 共济失调毛细血管扩张症突变激酶 P53 Topo2a

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siRNA特异性干扰EgTPx基因表达对细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤机制的影响 被引量：2

8

作者 郑璇 卢帅 +5 位作者 文丽梅 吕国栋 李亚芬 田春艳 赵军 王建华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第1期37-43,共7页

目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性干扰EgTPx基因表达后对细粒棘球蚴(Echi-nococcus granulosus,Eg)原头节DNA氧化损伤机制的影响。方法利用电穿孔法将EgTPx-siRNA干扰序列转染细粒棘球蚴原头节,实验分为EgTPx-siRN... 目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性干扰EgTPx基因表达后对细粒棘球蚴(Echi-nococcus granulosus,Eg)原头节DNA氧化损伤机制的影响。方法利用电穿孔法将EgTPx-siRNA干扰序列转染细粒棘球蚴原头节,实验分为EgTPx-siRNA-60、115、250干扰组,阴性对照组和空白对照组。电转3d后,协同自然状态下原头节体外耐受H_2O_2最大浓度干预1h,综合伊红拒染试验和碱性磷酸酶检测干扰前后原头节活性变化及qRT-PCR检测干扰前后EgTPx-mRNA表达水平变化筛选最佳EgTPx-siRNA干扰序列。采用单细胞凝胶电泳法(彗星试验)检测干扰前后原头节DNA氧化损伤程度变化;采用试剂盒法检测原头节体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,分析siRNA干扰对DNA氧化损伤机制的影响。结果自然状态下细粒棘球蚴原头节体外耐受H_2O_2的最大浓度为0.4mmol/L,干预时间为1h;电穿孔法将绿色荧光干扰序列导入原头节体内,实验组和阴性对照组的原头节体内均有绿色荧光斑点,而空白对照组原头节体内无绿色荧光斑点。导入siRNA后通过伊红拒染试验、碱性磷酸酶活性检测及qRT-PCR筛选出最佳干扰序列为EgTPx-siRNA-60;彗星试验显示干扰EgTPx基因表达后EgTPx-siRNA-60干扰组原头节DNA碎片离开核向阳极迁移形成拖尾,EgTPx-siRNA-60干扰组彗星尾距OTM值为12.860 2±2.537 7,与阴性对照组(0.055 8±0.010 3)和空白对照组(0.037 2±0.009 8)相比差异有统计学意义(t值分别为11.251和12.845,均P<0.01);经EgTPx-siRNA-60序列干扰后原头节体内ROS含量(13.978 6±0.233 0)A.U.与阴性对照组(3.281 7±0.052 5)A.U.和空白对照组(3.018 2±0.076 9)A.U.比较差异有统计学意义(t值分别为8.926和9.314,均P<0.01)。结论 EgTPx基因在细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤过程中发挥重要作用,EgTPx-siRNA-60可特异性干扰EgTPx基因的表达,并降低原头节修复DNA氧化损伤的能力。 展开更多

关键词 EgTPx基因 小干扰RNA 细粒棘球蚴原头节 DNA氧化损伤

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siRNA特异性干扰EgRad9基因表达对细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤机制的影响 被引量：2

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作者 郑璇 卢帅 +5 位作者 赵军 吕国栋 文丽梅 李亚芬 田春艳 王建华 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期343-349,共7页

目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)特异性干扰Eg Rad9基因表达后对细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤机制的影响。方法利用电穿孔法将Eg Rad9-si RNA干扰序列和阴性对照干扰序列转染细粒棘球蚴原头节,实验分为Eg Rad9-si RNA-... 目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)特异性干扰Eg Rad9基因表达后对细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤机制的影响。方法利用电穿孔法将Eg Rad9-si RNA干扰序列和阴性对照干扰序列转染细粒棘球蚴原头节,实验分为Eg Rad9-si RNA-354、-614、-971干扰组,阴性对照组和空白对照组。电转染3 d后,加入自然状态下原头节最大耐受浓度的H_2O_2处理1 h,伊红染液染色后,倒置荧光显微镜下观察原头节活性并计算存活率。收集各组原头节的培养液,进行碱性磷酸酶活性的检测。电转染3 d后,加入自然状态下原头节耐受H_2O_2的最大耐受浓度处理1 h后,TRIzol法提取总RNA。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测Eg Rad9m RNA的表达。采用彗星实验检测干扰Eg Rad9基因表达后细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤情况,活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测干扰Eg Rad9基因表达后细粒棘球蚴原头节体内ROS的含量,采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析。结果自然状态下细粒棘球蚴原头节体外耐受H_2O_2的最大浓度为0.4 mmol/L,干预时间为1 h;电穿孔法可将绿色荧光干扰序列有效的导入原头节体内,实验组和阴性对照组的原头节体内均有明亮的绿色荧光斑点;而空白对照组原头节体内无绿色荧光斑点。Eg Rad9-si RNA-354、-614、-971干扰组原头节的存活率分别为(42.99±4.03)%、(29.86±5.87)%和(56.48±4.64)%,初步筛选最有效干扰序列为Eg Rad9-si RNA-614。si RNA-354、-614、-971干扰组碱性磷酸酶活性分别为0.024±0.001、0.004±0.001、0.039±0.002,其中Eg Rad9-si RNA-614组碱性磷酸酶活性与阴性对照组(0.095±0.001)和空白对照组(0.099±0.001)相比,差异均有统计学意义(t=10.227、10.934,均P<0.01),表明该组原头节Eg Rad9基因经干扰后对其活性影响最大,最有效干扰序列为Eg Rad9-si RNA-614。Eg Rad9-si RNA-354、614、971干扰组Eg Rad9 m RNA表达量分别为0.432±0.055、0.291±0.079、0 展开更多

关键词 EgRad9基因 小干扰RNA 细粒棘球蚴原头节 DNA氧化损伤

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p38MAPK抑制剂SB202190体外对细粒棘球蚴原头节的作用 被引量：2

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作者 张晶 吕海龙 +4 位作者 王成华 孙冯 雷颖 彭心宇 姜玉峰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期700-703,708,共5页

目的探讨p38MAPK抑制剂SB202190体外抑制细粒棘球蚴原头节生长的作用。方法将体外培养的细粒棘球蚴原头节分别加入12.5、25、50、100μmol/L的SB202190中体外孵育。利用伊红染色的方法,在光镜下观察原头节的活力变化。实验重复3次;扫描... 目的探讨p38MAPK抑制剂SB202190体外抑制细粒棘球蚴原头节生长的作用。方法将体外培养的细粒棘球蚴原头节分别加入12.5、25、50、100μmol/L的SB202190中体外孵育。利用伊红染色的方法,在光镜下观察原头节的活力变化。实验重复3次;扫描电子显微镜下(SEM)下观察SB202190作用后原头节表面超微结构改变;不同浓度SB202190作用24h后,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性检测试剂盒检测caspase-3酶活性。结果 50μmol/L和100μmol/L的SB202190作用1d后,头节活力开始下降。作用14d后,100μmol/LSB202190组无存活的头节,50μmol/L SB202190组的头节活力仅为13.8%。超微结构显示100μmol/LSB202190作用6d后,原头节顶突外翻、变形,顶突界面缺损,吸盘变形,体表出现虫蛀样损害。不同浓度SB202190作用24h后,与正常对照组比较,SB202190高浓度组原头节的caspase-3表达明显增高。结论 p38MAPK抑制剂SB202190在体外有明显的抑制细粒棘球蚴原头节生长的作用。 展开更多

关键词 P38MAPK抑制剂 细粒棘球蚴原头节 体外实验

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甘氨鹅脱氧胆酸对体外细粒棘球蚴原头节活力及ROS影响 被引量：1

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作者 汤光耀 姜玉峰 +8 位作者 吕海龙 李佳洁 杨仁坦 秦文娟 马斌 马容基 王麟尧 陈琳 许雅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期595-598,共4页

目的研究甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid,GCDCA)对体外细粒棘球蚴原头节活力及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法将细粒棘球蚴原头节分为对照组及GCDCA处理组(500、1 500、2 500μmol/L),应用体外培养技... 目的研究甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid,GCDCA)对体外细粒棘球蚴原头节活力及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法将细粒棘球蚴原头节分为对照组及GCDCA处理组(500、1 500、2 500μmol/L),应用体外培养技术,通过伊红染色法每天定时在光学显微镜下观察原头节的活力并记录存活和死亡数目。使用试剂盒检测不同浓度GCDCA处理24h后各组原头节体内caspase-3酶活性变化;DCFH-DA染色法荧光显微镜观察GCDCA作用24h后原头节内ROS水平变化。结果 500、1 500、2 500μmol/L GCDCA处理后均可导致原头节活力减弱,且最高浓度组在第7d时原头节全部死亡。500、1 500、2 500μmol/L GCDCA组作用原头节24h后caspase-3酶活性与对照组相比明显升高(F=555.162,P<0.05)。500、1 500、2 500μmol/L GCDCA作用原头节24h后原头节内ROS水平与对照组相比明显升高(F=216.901,P<0.05)。结论 GCDCA能抑制体外原头节生长,促使原头节死亡,可能与活化caspase-3及提高原头节内ROS水平相关,具体机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 甘氨鹅脱氧胆酸 细粒棘球蚴原头节 CASPASE-3 活性氧

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PIK-75对体外细粒棘球蚴原头节的作用研究 被引量：1

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作者 杨仁坦 姜玉峰 +5 位作者 邢国强 汤光耀 史红娟 秦文娟 李佳洁 吕海龙 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期519-522,527,共5页

目的探讨不同浓度PIK-75体外对细粒棘球蚴原头节生长作用及形态学的影响。方法将体外培养的细粒棘球蚴原头节分为空白对照组及PIK-75处理组(0.4、0.8、1.2、1.6及2.0μmol/L),处理后的原头蚴用经0.1%伊红染色,置于倒置显微镜下观察原头... 目的探讨不同浓度PIK-75体外对细粒棘球蚴原头节生长作用及形态学的影响。方法将体外培养的细粒棘球蚴原头节分为空白对照组及PIK-75处理组(0.4、0.8、1.2、1.6及2.0μmol/L),处理后的原头蚴用经0.1%伊红染色,置于倒置显微镜下观察原头节的形态及活力,试验独立重复3次并绘制活力曲线图。用Caspase-3试剂盒检测作用24、48h后各浓度组原头节体内caspase-3酶活性;使用ELISA试剂盒测定不同浓度PIK-75作用后原头节体内抗氧化酶HO-1及NQO-1的活性变化。结果 PIK处理组原头节的形态结构发生变化,活力减弱,以2.0μmol/L时组原头节变化更明显,且在第6d时原头节均发生死亡。随着药物浓度的增高,PIK-75对细粒棘球蚴原头节生长的抑制作用越强。0.8μmol/L PIK-75处理组作用24h后原头节活性开始下降,在第3d约为67.4%,作用7d后活力为32.1%,空白对照组原头节形态及活力无明显变化。不同浓度PIK-75作用细粒棘球蚴原头节24、48h后caspase-3酶活性显著高于空白对照组(P<0.05)。0.8μmol/L PIK-75作用原头节2d、5d后,HO-1活性分别为(704.265±5.082)pg/ml和(656.05±0.095)pg/ml,NQO-1活性分别为(2.236±0.018)ng/ml和(1.446±0.026ng/ml),与空白对照组比较显著降低(P<0.05),且作用5d后的原头节酶活性显著低于作用2d组(P<0.05)。结论 PIK-75能抑制体外细粒棘球蚴原头节的生长,降低抗氧化酶的活性,具体机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 PIK-75 细粒棘球蚴原头节 体外

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过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞Caspase-3表达及超微结构改变的影响 被引量：1

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作者 胡汉华 康金凤 +4 位作者 陈蓉 白山别克 艾赛提 汤建安 谢风莲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期318-321,共4页

目的探讨过氧化氢(H2O2)体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡、Caspase-3表达和细胞超微结构的影响。方法RPMI1640添加谷氨酰胺组即体外培养细粒棘球蚴原头节,用5mmol/L H2O2诱导8h,使其发生细胞凋亡。用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标... 目的探讨过氧化氢(H2O2)体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡、Caspase-3表达和细胞超微结构的影响。方法RPMI1640添加谷氨酰胺组即体外培养细粒棘球蚴原头节,用5mmol/L H2O2诱导8h,使其发生细胞凋亡。用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL法)检测原头节细胞凋亡情况,用过氧化物酶标记链霉卵白素(SP)染色半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)。在透射电镜下观察原头节细胞超微结构的变化。结果过氧化氢诱导原头节细胞凋亡细胞增加,caspase-3表达增加,电镜观察原头节细胞异染色质增加,部分细胞染色质异常浓缩呈现凋亡细胞征象。结论H2O2可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡,且caspase-3参与原头节细胞的凋亡。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴原头节 过氧化氢 细胞凋亡 半胱天冬氨酸蛋白酶-3

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氯舒隆和奥硝唑体外抗细粒棘球蚴原头节和多房棘球蚴的效果评价

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作者 辛奇 高海军 +5 位作者 宋晓霞 孙旭东 吕薇 Nabil PERVAIZ 鲁俊 景涛 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期352-356,共5页

目的研究氯舒隆和奥硝唑体外抗细粒棘球蚴原头节和多房棘球蚴的效果。方法从感染细粒棘球蚴绵羊肝脏中收集原头节;从感染长爪沙鼠腹腔中分离多房棘球蚴,加入预先接种人肝癌细胞的DMEM培养基中培养2个月后,收集直径为1~5 mm囊泡。实验分... 目的研究氯舒隆和奥硝唑体外抗细粒棘球蚴原头节和多房棘球蚴的效果。方法从感染细粒棘球蚴绵羊肝脏中收集原头节;从感染长爪沙鼠腹腔中分离多房棘球蚴,加入预先接种人肝癌细胞的DMEM培养基中培养2个月后,收集直径为1~5 mm囊泡。实验分氯舒隆组(实验组)、奥硝唑组(实验组)、阿苯达唑组(阳性对照)和0.2%二甲基亚砜(DMSO)组(溶剂对照组)。每种药物设2个平行孔,终浓度均为40μmol/L,重复2次。每孔加细粒棘球蚴原头节约100个或多房棘球蚴囊泡25~35个。药物处理细粒棘球蚴原头节24、48、72、96、120、144和168 h后,显微镜下观察原头节形态,用台盼蓝染色,计算原头节存活率,组间存活率的比较采用方差分析。药物处理多房棘球蚴囊泡36 h和120 h后,显微镜下观察囊泡的形态学改变,测定培养上清液中碱性磷酸酶的活性,组间酶活性的比较采用卡方分析。结果氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑作用于原头节后,原头节颜色变深、钙颗粒减少、头钩脱落、头节外翻并伸长,0.2%DMSO对原头节形态无影响。氯舒隆、臭硝唑和阿苯达唑作用24、48、72、96、120、144和168 h后,原头节存活率分别为79%、70%、56%、42%、33%、16%、15%,86%、67%、63%、48%、32%、28%、21%和85%、71%、45%、36%、21%、15%、8%;0.2%DMSO组原头节存活率为100%。氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑组原头节存活率与0.2% DMSO组相比差异均有统计学意义(χ~2=147.83、130.58、170.37,P<0.05)。氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑作用后,多房棘球蚴囊泡均塌陷、皱缩,0.2%DMSO对多房棘球蚴囊泡形态无影响。作用36 h后氯舒隆、奥硝唑、阿苯达唑和0.2% DMSO组培养上清液碱性磷酸酶的吸光度(A405)值分别为0.196±0.030、0.186±0.004、0.244±0.049和0.131±0.020,作用120 h后分别为0.431±0.006、0.271±0.004、0.423±0.007和0.116±0.004。氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑组与0.2%DMSO组相比差异均有 展开更多

关键词 细粒棘球蚴原头节 多房棘球蚴 氯舒隆 奥硝唑

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γ-射线对细粒棘球蚴原头节在小鼠体内生长的抑制作用

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作者 袁庆 李波 +4 位作者 姜世平 罗兰云 李耿 赵强 张利勇 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2015年第2期139-143,共5页

目的探讨γ-射线对细粒棘球蚴原头节生长的抑制作用。方法在体外培养的基础上,利用不同剂量的γ-射线对细粒棘球蚴原头节进行照射,并将照射后的原头节种植于小白鼠腹腔,4个月后进行剖腹观察,对不同照射剂量组(分别为10 Gy、20 Gy、40 Gy... 目的探讨γ-射线对细粒棘球蚴原头节生长的抑制作用。方法在体外培养的基础上,利用不同剂量的γ-射线对细粒棘球蚴原头节进行照射,并将照射后的原头节种植于小白鼠腹腔,4个月后进行剖腹观察,对不同照射剂量组(分别为10 Gy、20 Gy、40 Gy、80 Gy)原头节种植后所形成棘球蚴的发生情况、重量、组织结构进行分析,并与不照射(对照组)作对比。结果经过照射后,原头节种植于小白鼠腹腔后其棘球蚴发生率逐步降低,对照组为100%,10 Gy组为80.0%,20 Gy组为33.3%,40 Gy组为33.3%,80 Gy组为26.7%。剖腹称重后,各组棘球蚴重量中位数比较,10 Gy组(35.80 mg)、20 Gy组(0.00 mg)、40 Gy组(0.00 mg)及80 Gy组(0.00 mg)与对照组(157.80mg)相比,均明显下降,差异有统计学意义(P<0.001)。实验组所形成的棘球蚴发生钙化。结论γ-射线的照射可以抑制原头节形成棘球蚴,并可以导致所形成的棘球蚴结构破坏,加快棘球蚴坏死、钙化的转归过程。 展开更多

关键词 γ-射线 细粒棘球蚴原头节 放射治疗 生长抑制

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细粒棘球蚴原头节mRNA测序及生物信息学初步分析

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作者 朱明星 王娅娜 +3 位作者 巨艳 王志昇 朱佳佳 赵巍 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2014年第2期83-89,共7页

目的 利用RNA-seq技术对细粒棘球蚴原头节的转录组进行测序并对测序数据进行生物信息学分析,以揭示细粒棘球蚴原头节mRNA所包含的信息. 方法 用Trizol法提取原头节总RNA,分离mRNA,利用Illumina公司的HiSeq2000高通量测序仪对mRNA序列进... 目的 利用RNA-seq技术对细粒棘球蚴原头节的转录组进行测序并对测序数据进行生物信息学分析,以揭示细粒棘球蚴原头节mRNA所包含的信息. 方法 用Trizol法提取原头节总RNA,分离mRNA,利用Illumina公司的HiSeq2000高通量测序仪对mRNA序列进行测序.参考英国桑格研究院（Wellcome Trust Sanger Institute）公布的细粒棘球绦虫基因组数据,对测序数据进行拼接组装,将获得的unigene与非冗余的蛋白序列数据库（non-redundant,Nr）、全球蛋白资源数据库（universal protein,UniProt）、基因本体数据库（gene ontology,GO）以及日本京都基因和基因组百科全书通路数据库（the kyotoencyclopedia of genes and genomes pathway,KEGG pathway）进行比对,获得该unigene的蛋白功能注释信息. 结果 测序后共获得132 007 609条读段（reads）,经过组装共形成91 342条unigene,平均长度为419 bp.通过GO分类注释,共有36 552个unigene获得了注释信息,分别归入到了生物学过程、分子功能、细胞组分3大类共计48个功能组.通过KEGG pathway的注释,有6 664条unigene注释到了KEGG上,参与了6大类生物过程中34个小类的代谢,共有227个代谢通路. 结论 获得了细粒棘球蚴原头节转录组相关信息,为棘球蚴病的后续研究提供了研究数据,积累了研究资料. 展开更多

关键词 细粒棘球蚴原头节 转录组 高通量转录组测序 生物信息学分析

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鹅脱氧胆酸诱导细粒棘球蚴原头节凋亡作用机制的初步研究

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作者 汤光耀 李佳洁 +2 位作者 马斌 姜玉峰 吕海龙 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2018年第2期248-252,共5页

目的初步探究鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)诱导细粒棘球蚴原头节凋亡的作用机制。方法采用鹅脱氧胆酸体外处理细粒棘球蚴原头节,0.1%伊红染色,倒置显微镜观察原头节的活力;Caspase-3试剂盒检测其酶活性变化;采用DCFH-DA染色... 目的初步探究鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)诱导细粒棘球蚴原头节凋亡的作用机制。方法采用鹅脱氧胆酸体外处理细粒棘球蚴原头节,0.1%伊红染色,倒置显微镜观察原头节的活力;Caspase-3试剂盒检测其酶活性变化;采用DCFH-DA染色法利用荧光酶标仪检测鹅脱氧胆酸作用2、4 d后原头节内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的荧光强度的变化;western blot技术检测Nrf2蛋白的表达;生物化学法测定细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)和硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase,TPx)酶活性的变化。结果体外应用500、1000、2000、3000μmol/L鹅脱氧胆酸能够抑制原头节体外生长,随着时间的延长,抑制作用逐渐增强;不同浓度鹅脱氧胆酸作用原头节24、48 h后caspase-3酶活性升高,随着时间的延长caspase-3酶活性增加越明显;不同浓度鹅脱氧胆酸作用原头节2、4 d后观察到原头节内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的水平升高(F=1631.77,P<0.05),同时western blot检测发现Nrf2蛋白的表达降低(P<0.05),并检测到抗氧化物酶谷胱甘肽过氧化物酶(F=756.033,P<0.05)和硫氧还蛋白过氧化物酶(F=608.848,P<0.05)的活性降低。结论鹅脱氧胆酸诱导细粒棘球蚴原头节凋亡可能是通过氧化应激途径起作用。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴原头节 鹅脱氧胆酸 ROS 抗氧化物酶

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