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TK1和TIMP1基因共表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达 被引量：1
1
作者 余惠珍 向红 +3 位作者 黄舒洁 朱鹏立 潘玮 张枫 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1072-1078,共7页
目的构建含人组织激肽释放酶1(hTK1)和基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP1)基因的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中的表达。方法选择相对应酶切位点,酶切含人TIMP1基因片段的原始质粒和腺病毒穿梭质粒pDC316,经连接... 目的构建含人组织激肽释放酶1(hTK1)和基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP1)基因的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中的表达。方法选择相对应酶切位点,酶切含人TIMP1基因片段的原始质粒和腺病毒穿梭质粒pDC316,经连接、热激、转化等亚克隆而构建成重组穿梭质粒。之后,应用限制性内切酶BglⅡ/SalⅠ,酶切含启动子和hTIMP1基因片段,再通过回收片段以及连接、热激等步骤亚克隆至pDC316-hTK1载体中,构建含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组病毒穿梭质粒。利用AdMax腺病毒Cre/loxP重组酶系统,将该质粒和骨架病毒质粒于293A细胞中同源重组包装产生双基因的重组腺病毒载体。采用Western blot测定在VSMCs中的表达。结果经PCR、双酶切和测序证实,重组病毒穿梭质粒pDC316-hTIMP1-EGFP和pDC316-hTK1-hTIMP1构建正确。在293A细胞里成功包装产生含双基因的重组腺病毒载体Ad5-hTK1-hTIMP1感染VSMCs后,hTK1和hTIMP1蛋白呈独立高表达,表达水平呈浓度依赖性增加。结论首次成功构建并包装了含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组腺病毒载体,目的蛋白在VSMCs中呈现独立高表达。 展开更多
关键词 组织激肽释放酶1基因 基质金属蛋白酶组织抑制物1基因 重组腺病毒载体 血管重构
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人乳腺癌细胞株KLK5 mRNA的表达及雌激素的调节作用 被引量：3
2
作者 陈英剑 胡成进 +2 位作者 闻新棉 徐军 孙晓明 《中国实验诊断学》 2007年第8期1005-1008,共4页
目的探讨雌激素对雌激素受体阳性人乳腺癌细胞株MCF-7和B37组织激肽释放酶5(KLK 5)mRNA的表达水平,以及雌激素对KLK5 mRNA表达水平的影响。方法分别取生长良好的MCF-7和B37细胞,在不同浓度的雌激素(17-βE2)存在下培养72小时后,收集细胞... 目的探讨雌激素对雌激素受体阳性人乳腺癌细胞株MCF-7和B37组织激肽释放酶5(KLK 5)mRNA的表达水平,以及雌激素对KLK5 mRNA表达水平的影响。方法分别取生长良好的MCF-7和B37细胞,在不同浓度的雌激素(17-βE2)存在下培养72小时后,收集细胞,提取总RNA,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应,检测KLK5 mRNA表达水平及变化。结果在未经刺激的乙醇对照组,MCF-7细胞KLK5 mRNA的相对表达水平(KLK5 mRNA/GAPDH mR-NA)为(3.23±0.51)×10-5,B37细胞KLK5 mRNA表达水平为(3.13±0.62)×10-4。B37细胞KLK5 mRNA表达水平高于MCF-7细胞。当17-βE2浓度10-11mol/L以下时,MCF-7和B37细胞中KLK5 mRNA表达水平与乙醇对照组无明显差异(P<0.05)。随17-βE2浓度的增高,MCF-7和B37细胞中KLK5 mRNA的表达呈递增趋势,各组与乙醇对照组相比差异有显著意义(P<0.01)。结论雌激素对人乳腺癌细胞株MCF-7和B37细胞的KLK5 mRNA表达有剂量依赖的上调作用。 展开更多
关键词 乳腺癌 组织激肽释放酶5基因(KLK5) 雌激素
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KLK11基因在卵巢癌组织中的表达状况及临床意义
3
作者 岳军 胡丽娜 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期433-436,I0001,共5页
目的:探讨人组织激肽释放酶11基因(KLK11基因)在卵巢癌组织中的表达状况。方法:应用免疫组织化学及逆转录PCR方法检测KLK11基因在卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢组织中的表达状况,研究其与肿瘤分期、组织病理学分型等相关预后... 目的:探讨人组织激肽释放酶11基因(KLK11基因)在卵巢癌组织中的表达状况。方法:应用免疫组织化学及逆转录PCR方法检测KLK11基因在卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢组织中的表达状况,研究其与肿瘤分期、组织病理学分型等相关预后因素的关系。结果:KLK11mRNA及其蛋白hK11均在卵巢上皮细胞中表达,在卵巢癌组织中的表达均低于其在正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织的表达;hK11蛋白在浆液性卵巢癌组织的表达高于其他类型的卵巢癌组织(P=0.012);早期卵巢癌(Ⅰ/Ⅱ期)组织中hK11蛋白的表达明显高于晚期卵巢癌(Ⅲ/Ⅳ期)(P=0.010);hK11蛋白在卵巢癌组织的表达水平与肿瘤的病理分级无明显关系(P=0.747);高水平的KLK11基因表达与卵巢癌临床分期等预后因素有明显相关性。结论:在卵巢癌组织中存在KLK11基因的表达下调,提示KLK11基因在卵巢癌中表达失调,可能对卵巢癌的诊断有一定价值。 展开更多
关键词 卵巢癌 人组织激肽释放酶11基因 人组织激肽释放酶11 逆转录聚合酶链反应 免疫组化
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组织激肽释放酶家族、激肽释放酶-激肽原-激肽系统及其重要应用 被引量：5
4
作者 华慧 周思翔 王正荣 《国外医学（生物医学工程分册）》 CAS 2004年第5期301-305,共5页
目前已明确,人组织激肽释放酶基因家族至少由15个基因组成,都定位于19q13.3～13.4,在基因结构、蛋白水平及三级结构上都有明显同源性。本文总结了组织激肽释放酶基因家族、激肽释放酶-激肽原-激肽系统的研究近况,并介绍了其在心血管疾... 目前已明确,人组织激肽释放酶基因家族至少由15个基因组成,都定位于19q13.3～13.4,在基因结构、蛋白水平及三级结构上都有明显同源性。本文总结了组织激肽释放酶基因家族、激肽释放酶-激肽原-激肽系统的研究近况,并介绍了其在心血管疾病和肿瘤方面的重要应用。 展开更多
关键词 激肽释放酶—激肽原—激肽系统 组织激肽释放酶基因家族 激肽原 激肽
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人组织激肽释放酶基因6与妇科肿瘤关系的研究进展 被引量：3
5
作者 王言研 王洋洋 李佩玲 《中华实用诊断与治疗杂志》 2014年第9期835-837,共3页
人组织激肽释放酶基因6是人组织激肽释放酶基因家族的重要成员,参与肿瘤细胞的生长、浸润、转移,与乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌等多种妇科恶性肿瘤的发生、发展有密切关系。本文就人组织激肽释放酶基因6与妇科肿瘤关系的研究进... 人组织激肽释放酶基因6是人组织激肽释放酶基因家族的重要成员,参与肿瘤细胞的生长、浸润、转移,与乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌等多种妇科恶性肿瘤的发生、发展有密切关系。本文就人组织激肽释放酶基因6与妇科肿瘤关系的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 组织激肽释放酶基因6 乳腺癌 宫颈癌 子宫内膜癌 卵巢癌
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人组织激肽释放酶基因真核表达载体的构建与鉴定 被引量：2
6
作者 彭武建 戴勇 +4 位作者 李体远 杜珙 孙文学 陈德珩 徐卓佳 《广东医学》 CAS CSCD 2003年第12期1286-1288,共3页
目的　构建并鉴定人组织激肽释放酶基 (h -TKK)基因真核表达质粒。方法　设计含pnI和BamHⅠ酶切位点的人组织激肽释放酶基因引物 ,采用PCR法从原核pBluescripeⅡKSKK ( +)中扩增KKcDNA片段 ,亚克隆至pAd track -CMV真核表达载体 ,转化... 目的　构建并鉴定人组织激肽释放酶基 (h -TKK)基因真核表达质粒。方法　设计含pnI和BamHⅠ酶切位点的人组织激肽释放酶基因引物 ,采用PCR法从原核pBluescripeⅡKSKK ( +)中扩增KKcDNA片段 ,亚克隆至pAd track -CMV真核表达载体 ,转化感受态大肠杆菌DH10B ,酶切鉴定阳性重组子 ,并进行序列测定。结果　经PCR能扩增出 73 8bp的片段 ,与预期片段大小相符 ,构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段 ,测序结果与预期序列完全一致。结论　成功构建了人组织激肽释放酶基因真核表达重组体pAdtrack -CMVKK。 展开更多
关键词 人组织激肽释放酶基因 真核表达载体 构建 鉴定 基因扩增 序列分析 高血压 基因治疗
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卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因14的表达 被引量：2
7
作者 史惠蓉 宋芷霜 +1 位作者 张瑞涛 寇歆馨 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第1期25-28,共4页
目的:检测卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因14(KLK14)mRNA和蛋白的表达。方法:应用RT-PCR和免疫组化SP法检测正常卵巢、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤和卵巢上皮性癌组织中KLK14mRNA和蛋白的表达,分析其表达与卵巢上皮性癌患者... 目的:检测卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因14(KLK14)mRNA和蛋白的表达。方法:应用RT-PCR和免疫组化SP法检测正常卵巢、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤和卵巢上皮性癌组织中KLK14mRNA和蛋白的表达,分析其表达与卵巢上皮性癌患者临床病理特征的关系。结果:卵巢上皮性癌组织中KLK14mRNA的相对表达量(1.36±0.24)高于正常卵巢组织(0.63±0.19)(t=8.432,P<0.001);卵巢上皮性癌组织中KLK14蛋白的阳性表达率为61.4%,与正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤和交界性卵巢肿瘤相比,差异有统计学意义(χ2=21.648,P<0.001)。KLK14蛋白的表达与卵巢上皮性癌的FIGO分期(χ2=5.759,P=0.016)、组织学分级(χ2=4.671,P=0.031)和淋巴结转移(χ2=8.254,P=0.004)相关。结论:KLK14可能参与了卵巢上皮性癌的侵袭和转移。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 上皮性癌 人组织激肽释放酶基因14
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人组织型激肽释放酶基因与冠心病的研究进展
8
作者 郭娜 苏秀兰 王立平 《医学综述》 2013年第16期2881-2883,共3页
人组织型激肽释放酶基因(KLK)在多种疾病中发挥着作用,参与体内多种病理生理过程,包括调节血压和水钠代谢,参与炎性反应和心血管保护作用。KLK具有降低血压,改善胰岛素抵抗,抑制心脏和动脉的重构,抑制平滑肌细胞增殖,以及缺血/再灌注损... 人组织型激肽释放酶基因(KLK)在多种疾病中发挥着作用,参与体内多种病理生理过程,包括调节血压和水钠代谢,参与炎性反应和心血管保护作用。KLK具有降低血压,改善胰岛素抵抗,抑制心脏和动脉的重构,抑制平滑肌细胞增殖,以及缺血/再灌注损伤的保护作用。KLK可能发挥抗动脉粥样硬化的功效,可能为冠状动脉粥样硬化性心脏病发生的易患基因。该文就KLK与心血管疾病的研究状况予以综述。 展开更多
关键词 冠状动脉粥样硬化性心脏病 人组织型激肽释放酶基因 人组织激肽释放酶
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人组织激肽释放酶基因7与肿瘤侵袭转移的关系
9
作者 廖春华 莫曾南 《广西医学》 CAS 2009年第5期729-731,共3页
关键词 人类组织激肽释放酶基因7 肿瘤侵袭转移 胰腺癌 妇科肿瘤 前列腺癌
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组织型激肽释放酶基因多态性与长沙地区汉族人群脑出血的关联研究 被引量：2
10
作者 曾艺 张乐 +8 位作者 胡中扬 杨期东 刘宝琼 马明明 刘运海 许宏伟 夏健 杜小平 胡治平 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期316-319,共4页
目的 分析长沙地区汉族人群脑出血与组织型激肽释放酶（kallikrein 1,KLK1）基因多态性的关系.方法 收集273例散发性脑出血患者和140名正常对照者的外周血标本.采用多重单碱基延伸单核苷酸多态分型技术和DNA测序法检测KLK1基因rs5516及r... 目的 分析长沙地区汉族人群脑出血与组织型激肽释放酶（kallikrein 1,KLK1）基因多态性的关系.方法 收集273例散发性脑出血患者和140名正常对照者的外周血标本.采用多重单碱基延伸单核苷酸多态分型技术和DNA测序法检测KLK1基因rs5516及rs5517多态性位点在两组人群中的分布.结果 （1）脑出血组及对照组KLK1基因rs5516多态和等位基因频率分布差异无统计学意义（P〉0.05）;脑出血组组织型KLK1基因rs5517多态A等位基因频率显著高于对照组（P〈0.05）.（2）对照组rs5517多态AA及GA基因型携带者舒张压水平显著高于GG基因型携带者（P〈0.05）;而rs5516位点各基因型亚组间血压水平差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 组织型激肽释放酶基因rs5516多态性与脑出血无关,而组织型激肽释放酶基因rs5517多态性与脑出血存在关联,可能通过影响血压水平而参与脑出血的发生发展. 展开更多
关键词 组织型激肽释放酶基因 单核苷酸多态性 脑出血
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