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GPCR-G蛋白融合传感器检测GPCR与G蛋白相互作用的灵敏度 被引量：1
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作者 马传顺 林慧 +1 位作者 孙金鹏 张道来 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2022年第9期85-90,共6页
目的以GPR56-G蛋白融合传感器为例,建立一种检测GPCR与G蛋白相互作用的高灵敏方法。方法将带有NanoLuc荧光素酶(Nluc)的G蛋白α亚基的N端融合到GPCR的C端,构建GPCR和G蛋白α亚基两者的融合蛋白为实验组,受体和G蛋白共表达作为对照组。... 目的以GPR56-G蛋白融合传感器为例,建立一种检测GPCR与G蛋白相互作用的高灵敏方法。方法将带有NanoLuc荧光素酶(Nluc)的G蛋白α亚基的N端融合到GPCR的C端,构建GPCR和G蛋白α亚基两者的融合蛋白为实验组,受体和G蛋白共表达作为对照组。在受体表达水平相同的条件下,利用生物发光共振能量转移(BRET)方法检测GPR56-Gα_(12)亚基融合蛋白、GPR56和Gα_(12)亚基共表达的组成性活力。利用BRET方法检测GPR56激动剂(P19)对GPR56-Gα_(12)亚基融合蛋白相互作用的影响。结果BRET比率结果显示,与对照组GPR56和Gα_(12)亚基共表达相比,GPR56-Gα_(12)亚基融合蛋白具有更强的组成性活力(F=424.7,P<0.001);与对照组比较,P19激活实验组的半数有效浓度(EC_(50))下降,差异有统计学意义(t=13.36,P<0.001),GPR56-Gα_(12)亚基融合蛋白对激动剂(P19)的感知更灵敏,亲和力更强。结论GPCR-Gα亚基融合蛋白系统是一种检测GPCR与G蛋白相互作用更灵敏的方法。 展开更多
关键词 GPCR-Gα亚基融合蛋白 GPR56 Gα_(12) 组成性活力 P19
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