人线粒体转录终止因子2蛋白的生物信息学分析 被引量：9

1

作者 杨勇琴 左绍远 +3 位作者 张海洋 张晓娟 余敏 熊伟 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第5期944-949,共6页

目的:探讨人线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)的生物学功能。方法:采用生物信息学的方法和工具对人MTERF2的理化性质、跨膜区和信号肽、二级结构功能域、亚细胞定位、蛋白质的功能分类预... 目的:探讨人线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)的生物学功能。方法:采用生物信息学的方法和工具对人MTERF2的理化性质、跨膜区和信号肽、二级结构功能域、亚细胞定位、蛋白质的功能分类预测、多重序列比对与系统发育树构建、三级结构建模进行系统的分析与研究。结果:人MTERF2蛋白分子量为44.41 k D,等电点为9.15,不具有信号肽和跨膜区。该蛋白定位于细胞线粒体中,N端1-35个氨基酸为前导肽序列,其二级结构主要构成元件为螺旋和无规则卷曲,包含4个MTERF基序。三级结构预测显示该蛋白为球状结构,N端为螺旋结构,C端为无规则卷曲。对该蛋白进行多重序列比对和聚类分析显示,人MTERF2属于直系同源蛋白质,与猩猩MTERF2相似性最高,二者在系统发育树上聚为一类。结论:人MTERF2是一种典型的线粒体DNA结合蛋白质,本研究为进一步探索人MTERF2蛋白的功能提供参考资料和理论依据。 展开更多

关键词 人类 线粒体转录终止因子2 生物信息学 蛋白功能

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线粒体转录终止因子2对人子宫颈癌HeLa细胞线粒体基因表达的影响 被引量：6

2

作者 孙美涛 梅雯 +5 位作者 王唯斯 自加吉 杨勇琴 张晓娟 余敏 熊伟 《生物技术》 CAS 2018年第1期36-43,17,共9页

[目的]线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)是通过比较血清饥饿与血清培养的人成纤维细胞基因表达谱差异发现的一个细胞增殖抑制基因。该研究旨在从复制、转录和翻译水平探讨线粒体转录终止... [目的]线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)是通过比较血清饥饿与血清培养的人成纤维细胞基因表达谱差异发现的一个细胞增殖抑制基因。该研究旨在从复制、转录和翻译水平探讨线粒体转录终止因子2对人子宫颈癌He La细胞线粒体基因表达的影响。[方法]利用MTERF2过表达质粒和shRNA干扰表达质粒分别瞬时转染人子宫颈癌He La细胞,通过qRT-PCR检测目的基因MTERF2表达水平的变化。采用荧光定量PCR检测MTERF2对线粒体DNA拷贝量的影响,半定量RT-PCR检测MTERF2对线粒体基因转录水平的影响,Western Blot检测MTERF2线粒体DNA重链编码ND1、CO1蛋白和轻链编码ND6蛋白表达水平的影响。[结果]转染人子宫颈癌He La细胞48 h后,通过荧光定量PCR检测线粒体DNA拷贝量发现,过表达MTERF2基因对线粒体DNA的拷贝量具有显著抑制作用(P<0.05),而敲低MTERF2基因对线粒体DNA拷贝量的影响无显著差异(P>0.05);半定量RT-PCR和Western Blot检测发现,MTERF2基因的过表达会显著降低线粒体编码基因的mRNA水平和线粒体编码蛋白水平(P<0.05),而敲低MTERF2后线粒体转录和翻译水平略有下降,但无显著差异(P>0.05)。[结论]在人子宫颈癌He La细胞中过表达MTERF2显著抑制线粒体DNA的复制水平,并且显著下调线粒体编码基因的转录和翻译水平,而敲低MTERF2后线粒体基因的表达无显著变化。 展开更多

关键词 线粒体转录终止因子2 子宫颈癌 HELA细胞 线粒体基因表达

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人线粒体转录终止因子2在大肠杆菌表达及多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：4

3

作者 熊伟 孙美涛 +4 位作者 梅雯 杨勇琴 自加吉 张晓娟 余敏 《生物技术》 北大核心 2017年第3期232-238,263,共8页

[目的]构建人线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)基因原核表达载体并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)Rosetta细胞中表达目的蛋白质,制备及鉴定鼠抗人MTERF2多克隆抗体。[方法]利用RT-... [目的]构建人线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)基因原核表达载体并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)Rosetta细胞中表达目的蛋白质,制备及鉴定鼠抗人MTERF2多克隆抗体。[方法]利用RT-PCR技术从HeLa细胞中扩增出人MTERF2基因cDNA开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,将目的基因插入pET-28b原核表达载体中,转化大肠杆菌Rosseta细胞,IPTG诱导人MTERF2融合蛋白质的表达,经包涵体的洗涤、亲和层析法纯化、质谱鉴定后,用纯化出的包涵体蛋白免疫BALB/c小鼠制备鼠抗人MTERF2多克隆抗体。用酶联免疫吸附法检测抗体的效价,Western Blot检测抗体的特异性。[结果]构建了含有人MTERF2基因cDNA ORF序列的原核表达载体pET-28b-h MTERF2,并成功制备高质量的鼠抗人MTERF2多克隆抗体。酶联免疫吸附法分析结果显示抗体的效价约为1∶10 240,Western Blot检测结果显示鼠抗人MTERF2多克隆抗体能识别原核表达的人MTERF2蛋白以及HeLa、U251细胞内源的人MTERF2蛋白。[结论]在大肠杆菌细胞成功地表达人MTERF2蛋白,制备的鼠抗人MTERF2多克隆抗体具有高效价和高特异性,为进一步研究人MTERF2蛋白的功能提供了基础。 展开更多

关键词 线粒体转录终止因子2 原核表达载体 多克隆抗体 鉴定

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MTERF2对人子宫颈癌HeLa细胞线粒体氧化磷酸化活性的影响 被引量：1

4

作者 孙美涛 梅雯 +4 位作者 自加吉 严长宝 陈莹 余敏 熊伟 《解放军医药杂志》 CAS 2019年第3期50-55,共6页

目的探究过表达或下调线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因对人子宫颈癌HeLa细胞线粒体氧化磷酸化活性的影响。方法将人子宫颈癌HeLa细胞分为6组:空白对照组未转染HeLa细胞,阴性对照1和2组分别转染p3×FLAG-CMV-14和pSi-NK,实验1、2和... 目的探究过表达或下调线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因对人子宫颈癌HeLa细胞线粒体氧化磷酸化活性的影响。方法将人子宫颈癌HeLa细胞分为6组:空白对照组未转染HeLa细胞,阴性对照1和2组分别转染p3×FLAG-CMV-14和pSi-NK,实验1、2和3组分别转染pCMV-MTERF2-FLAG、pSi-MTERF2-1和pSi-MTERF2-2。比较MTERF2蛋白在各组HeLa细胞中的表达情况,并分别检测各组线粒体呼吸链复合体Ⅰ～Ⅴ酶活性、线粒体呼吸控制率(RCR)、线粒体跨膜电位、细胞内ATP含量以及线粒体活性氧(ROS)水平的变化。结果实验1组MTERF2蛋白的表达比空白对照组高,实验2和3组MTERF2蛋白的表达水平比空白对照组低(P<0.01)。与阴性对照2组比较,实验1组线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ相对酶活性以及线粒体跨膜电位下降(P<0.01,P<0.05),线粒体ROS水平升高(P<0.01)。与空白对照组比较,实验1组的线粒体RCR和细胞内ATP含量下降(P<0.01)。而实验2和3组上述指标与空白对照组或阴性对照2组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论过表达MTERF2基因能显著抑制子宫颈癌HeLa细胞线粒体氧化磷酸化活性,下调MTERF2基因对线粒体氧化磷酸化活性无显著影响。 展开更多

关键词 线粒体转录终止因子2 宫颈肿瘤 线粒体 氧化磷酸化

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小鼠Mterf2基因cDNA的克隆、序列分析与组织表达特征 被引量：1

5

作者 李素芬 王唯斯 +4 位作者 自加吉 陈莹 戴莉萍 余敏 熊伟 《生物技术通讯》 CAS 2018年第5期598-603,608,共7页

目的:克隆BALB/c小鼠线粒体转录终止因子2(Mterf2)基因cDNA编码区序列,分析Mterf2 mRNA和蛋白质在小鼠大脑、心、脾、肺、肾、肝、胰腺、肌肉和睾丸等9种组织中的表达情况。方法:以BALB/c小鼠肝组织总RNA为模板,RT-PCR扩增Mterf2基因cDN... 目的:克隆BALB/c小鼠线粒体转录终止因子2(Mterf2)基因cDNA编码区序列,分析Mterf2 mRNA和蛋白质在小鼠大脑、心、脾、肺、肾、肝、胰腺、肌肉和睾丸等9种组织中的表达情况。方法:以BALB/c小鼠肝组织总RNA为模板,RT-PCR扩增Mterf2基因cDNA编码区序列,将其克隆至pMD-19T载体,通过菌落PCR、双酶切和DNA序列测定进行验证;采用MEGA 6.0软件构建Mterf2基因系统发生树;通过Northern印迹和qRT-PCR方法检测Mterf2基因mRNA在小鼠各组织中的表达量;通过Western印迹检测MTERF2蛋白在小鼠多个组织中的表达量。结果:克隆获得BALB/c小鼠Mterf2基因cDNA的编码区序列,其全长1158 bp,编码385个氨基酸残基,克隆到的序列与GenBank参考序列的同源性为100%,无任何碱基突变和移码突变。小鼠Mterf2基因与大鼠Mterf2基因的同源性最高,达到91.0%,在系统发生树上聚类为一簇。Mterf2基因mRNA和蛋白质在BALB/c小鼠心、脑、肝和肾等新陈代谢旺盛的组织中表达丰度最高,其次是在胰腺、睾丸和肌肉组织,而在脾和肺组织中表达相对较低。结论:克隆了BALB/c小鼠Mterf2基因cDNA的编码区序列,并进行了多种组织的表达特征分析,为后续研究Mterf2基因在实验动物体内的生理功能奠定了基础。 展开更多

关键词 小鼠 线粒体转录终止因子2 基因克隆 序列分析 组织表达

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线粒体转录终止因子2 五聚素3及微小RNA-106b在子宫内膜癌演进过程中的表达变化研究

6

作者 郑瑜 励红凤 杜乔 《中国妇幼保健》 CAS 2022年第22期4272-4276,共5页

目的 分析线粒体转录终止因子2(MTERF2)、五聚素3(PTX3)及微小RNA-106b(miR-106b)在子宫内膜癌演进过程中的表达变化。方法 选取2019年1月-2020年1月宁波大学附属人民医院病理科留存的子宫内膜癌组织标本159例作为子宫内膜癌组,另外选... 目的 分析线粒体转录终止因子2(MTERF2)、五聚素3(PTX3)及微小RNA-106b(miR-106b)在子宫内膜癌演进过程中的表达变化。方法 选取2019年1月-2020年1月宁波大学附属人民医院病理科留存的子宫内膜癌组织标本159例作为子宫内膜癌组,另外选取同期该院病理科留存的经病理证实无子宫内膜病变的因子宫内膜内膜息肉行宫腔镜手术切除的子宫内膜组织标本80例作为良性组,采用免疫组化、Western blot法检测MTERF2、PTX3、miR-106b表达,分析MTERF2、PTX3、miR-106b在子宫内膜癌演进过程中的表达变化及三者相关性。结果 与良性组相比,子宫内膜癌组MTERF2表达量降低,PTX3、miR-106b表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。MTERF2、PTX3、miR-106b参与子宫内膜癌的演进,与Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、G1分级、G2分级、无淋巴结转移、肌层浸润深度<1/2的患者相比,Ⅳ期、G3分级、有淋巴结转移、肌层浸润深度≥1/2的患者MTERF2表达量降低,PTX3、miR-106b表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。MTERF2、PTX3、miR-106b之间Pearson相关性分析显示,MTERF2与PTX3之间负相关(r=-0.210,P=0.008);MTERF2与miR-106b之间负相关(r=-0.248,P=0.002);PTX3与miR-106b之间正相关(r=0.290,P=0.000)。结论 MTERF2在子宫内膜癌中低表达,PTX3、miR-106b在子宫内膜癌中高表达,随着疾病的进展表达加剧,参与子宫内膜癌的演进。 展开更多

关键词 线粒体转录终止因子2 五聚素3 微小RNA-106b 子宫内膜癌

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MTERF2在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性

7

作者 王唯斯 自加吉 +4 位作者 李素芬 李彬 张态 张若鹏 熊伟 《实用医药杂志》 2019年第11期1014-1021,I0001,共9页

目的探讨线粒体转录终止因子2(MTERF2)在乳腺癌组织中的表达情况及其与临床疾病病理特征的关系。方法分别采用qRT-PCR技术及免疫组化SP法检测46例乳腺癌组织及其配对癌旁组织中MTERF2 mRNA和蛋白质的表达水平。使用R2.15.3软件从美国癌... 目的探讨线粒体转录终止因子2(MTERF2)在乳腺癌组织中的表达情况及其与临床疾病病理特征的关系。方法分别采用qRT-PCR技术及免疫组化SP法检测46例乳腺癌组织及其配对癌旁组织中MTERF2 mRNA和蛋白质的表达水平。使用R2.15.3软件从美国癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)中下载乳腺癌数据集MTERF2 mRNA SeqV2数据及临床病理资料。利用R2.15.3软件分析MTERF2 mRNA表达量与临床病理参数的相关性及预后作用。采用Kaplan-Meier生存分析MTERF2表达量和乳腺癌患者预后的相关性。采用Cox回归多因素分析探讨影响乳腺癌患者预后的因素。结果qRT-PCR结果显示,与癌旁组织相比,MTERF2 mRNA在乳腺癌组织的表达水平均显著降低(P=0.013)。免疫组织化学结果显示,MTERF2蛋白主要表达于细胞质,在乳腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P=0.020)。从TCGA数据库中共下载1110例含有MTERF2 mRNA表达量和患者临床病理参数的乳腺癌组织样本,经筛选整理剔除临床资料不完整的病例后保留707例,统计分析表明,MTERF2 mRNA的表达量与乳腺癌患者的ER状态、PR状态、分子分型、癌症类型以及组织学诊断类型存在显著相关性(均P<0.001),而与患者的年龄、性别、T分期、N分期、M分期、AJCC病理分期、HER2状态、有无恶性肿瘤病史以及原发部位无显著相关性。Kaplan-Meier生存分析发现,乳腺癌患者MTERF2 mRNA的表达水平与总生存率(OS)和无疾病进展生存率(DFS)没有显著相关性(Log-rank,P=0.329和Log-rank,P=0.371)。Cox比例风险回归模型分析表明,乳腺癌患者的年龄、M分期以及肿瘤类型可能是影响乳腺癌患者预后的独立因素(P<0.05),但MTERF2 mRNA的表达量与乳腺癌患者的预后无关。结论MTERF2 mRNA和蛋白质在乳腺癌组织的表达水平显著低于癌旁组织,MTERF2 mRNA的表达量与乳腺癌患者临床病理特征密切相关,但与乳腺癌患者的预后无显著 展开更多

关键词 线粒体转录终止因子2 乳腺癌 免疫组化 QRT-PCR TCGA数据集

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人线粒体转录终止因子2基因启动子区的生物信息学分析 被引量：11

8

作者 熊伟 张晓娟 +2 位作者 孙美涛 张海洋 徐彤 《井冈山大学学报（自然科学版）》 2016年第1期51-56,共6页

人线粒体转录终止因子2基因(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)在线粒体基因表达、细胞能量代谢及细胞周期调控过程中发挥重要作用,但MTERF2基因自身的表达调控机制仍不明确。通过生物信息学方法预测和分析人... 人线粒体转录终止因子2基因(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)在线粒体基因表达、细胞能量代谢及细胞周期调控过程中发挥重要作用,但MTERF2基因自身的表达调控机制仍不明确。通过生物信息学方法预测和分析人线粒体转录终止因子2基因启动子区的结构与功能,结果显示:人MTERF2基因全长9876 bp,含有3个外显子和2个内含子。基因上游5’端2500 bp的核苷酸序列存在3个启动子,启动子区序列中存在长为874 bp的CpG岛,启动子区共发现244个转录因子结合位点。人MTERF2基因启动子区的生物信息学分析,提高了针对该基因启动子的研究效率,并为分析基因启动子的功能奠定了重要的理论基础。 展开更多

关键词 人线粒体转录终止因子2 启动子 转录因子 生物信息学

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人线粒体转录终止因子2(MTERF2)在Caski宫颈癌细胞的表达和定位 被引量：8

9

作者 孙美涛 张成桂 +4 位作者 梅雯 杨勇琴 杨泽芳 张晓娟 熊伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期783-788,共6页

目的构建人线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因真核表达载体,并在人Caski宫颈癌细胞中过表达,观察其编码蛋白质在Caski细胞中的定位。方法从Caski细胞中提取总RNA,采用反转录PCR扩增人MTERF2基因可读框序列,将其重组于p3×FLAG-CMV-1... 目的构建人线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因真核表达载体,并在人Caski宫颈癌细胞中过表达,观察其编码蛋白质在Caski细胞中的定位。方法从Caski细胞中提取总RNA,采用反转录PCR扩增人MTERF2基因可读框序列,将其重组于p3×FLAG-CMV-14载体中,利用PCR和DNA测序鉴定重组子正确性;并用脂质体法转染至Caski细胞,转染24、32、48 h,采用Western blot法检测MTERF2蛋白水平,通过免疫荧光细胞化学染色观察其亚细胞定位情况。结果经过PCR和DNA测序鉴定,人MTERF2基因可读框正确地插入到真核表达质粒中,大小为1158 bp,表达的蛋白相对分子质量(Mr)为44 000,与预计大小相符。转染p3×FLAG-MTERF2质粒的Caski细胞培养24 h,可检测到目的蛋白表达,该蛋白主要定位于线粒体中。结论在Caski细胞成功表达了MTERF2蛋白并证实其定位于线粒体。 展开更多

关键词 线粒体转录终止因子2(MTERF2) Caski宫颈癌细胞 真核表达 蛋白定位

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基于Oncomine和TCGA数据挖掘分析MTERF2在胰腺癌中的表达及临床意义 被引量：4

10

作者 王唯斯 梅雯 +4 位作者 孙美涛 李彬 张态 张若鹏 熊伟 《生物技术通讯》 CAS 2019年第2期163-169,共7页

目的:探究人线粒体转录终止因子2(MTERF2)在胰腺癌中的表达及临床意义。方法:检索Oncomine数据库中的MTERF2信息,对其在胰腺癌组织和正常胰腺组织中的表达进行荟萃分析;从美国癌症基因组图谱(TCGA)中下载胰腺癌数据集MTERF2 RNA Seq V2... 目的:探究人线粒体转录终止因子2(MTERF2)在胰腺癌中的表达及临床意义。方法:检索Oncomine数据库中的MTERF2信息,对其在胰腺癌组织和正常胰腺组织中的表达进行荟萃分析;从美国癌症基因组图谱(TCGA)中下载胰腺癌数据集MTERF2 RNA Seq V2数据及临床病理资料;利用R 2.15.3软件分析MTERF2表达量与临床病理参数的相关性及预后;利用Kaplan-Meier生存函数分析MTERF2表达量和胰腺癌患者预后的关联。结果:Oncomine数据库中共收集了586个不同类型的研究结果,其中关于MTERF2表达有统计学差异的研究有58个,MTERF2表达增高的研究有26个,表达减低的研究有32个。共有9项研究涉及MTERF2在胰腺癌组织和正常组织中的表达,包括226例临床样本,与对照组相比,MTERF2在胰腺癌中低表达(P=7.34×10-6)。TCGA胰腺癌数据集中共收集179例具有临床病理参数的病例及其对应的MTERF2 mRNA表达量。剔除病理参数不详或不完整的病例,利用R 2.15.3软件分析发现,MTERF2 mRNA表达量与胰腺癌患者T分期、M分期、癌症类型及原发部位存在显著相关(均P<0.05),而与患者的年龄、性别、N分期、AJCC病理分期、等级、组织学类型及饮酒史无显著相关(均P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析发现,胰腺癌患者MTERF2的表达水平与总生存率(OS)无显著相关性(P>0.05),而与无病生存率(DFS)显著相关(P<0.001)。结论:Oncomine和TCGA数据挖掘显示,人MTERF2在胰腺癌组织中低表达,且MTERF2表达量与胰腺癌患者总生存率无显著相关性,与无病生存率有显著相关性。 展开更多

关键词 线粒体转录终止因子2(MTERF2) 胰腺癌 Oncomine数据库 癌症基因组图谱(TCGA) 数据挖掘

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MTERF2在人子宫颈癌细胞株中的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响 被引量：3

11

作者 李素芬 王唯斯 +4 位作者 孙美涛 梅雯 自加吉 张若鹏 熊伟 《生物技术通讯》 CAS 2019年第4期464-472,共9页

目的:线粒体转录终止因子2(MTERF2)是线粒体类核的重要组成成分,且参与线粒体基因的表达调控。本研究旨在阐明MTERF2基因在体外培养的人类正常子宫颈上皮细胞株和子宫颈癌细胞株中的表达情况,并进一步探讨MTERF2对子宫颈癌HeLa细胞增殖... 目的:线粒体转录终止因子2(MTERF2)是线粒体类核的重要组成成分,且参与线粒体基因的表达调控。本研究旨在阐明MTERF2基因在体外培养的人类正常子宫颈上皮细胞株和子宫颈癌细胞株中的表达情况,并进一步探讨MTERF2对子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR和Western印迹检测正常子宫颈上皮细胞株(End1/E6E7)和子宫颈癌细胞株(HeLa、SiHa、C-33A、C4-1、CaSki)中MTERF2 mRNA及其蛋白质的表达情况;分别构建MTERF2稳定过表达或下调表达的子宫颈癌HeLa细胞株,通过XTT实验、细胞划痕实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、克隆形成实验和流式细胞术等方法观察MTERF2基因过表达或表达下调对子宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。结果:MTERF2蛋白及mRNA在子宫颈癌细胞株中的表达水平均低于正常宫颈上皮细胞株。与对照组相比,稳定过表达MTERF2的子宫颈癌HeLa细胞增殖能力下降,同时子宫颈癌HeLa细胞的克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力均显著下降;细胞周期出现G1/S期阻滞,周期蛋白D1和pRb蛋白的表达水平明显下降。下调MTERF2表达的子宫颈癌HeLa细胞的增殖能力、克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力均有所增强,且未出现细胞周期阻滞。此外,稳定过表达或下调MTERF2表达对子宫颈癌HeLa细胞凋亡均没有显著影响。结论:MTERF2基因在子宫颈癌细胞株中的表达水平低于正常子宫颈上皮细胞株,且负调控子宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,提示其可能在子宫颈癌发生发展中发挥类似抑癌基因的作用。 展开更多

关键词 子宫颈癌细胞株 线粒体转录终止因子2(MTERF2) 增殖 迁移 侵袭

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人MTERF2基因特异性shRNA载体的构建与干扰效果评价 被引量：2

12

作者 孙美涛 梅雯 +4 位作者 王唯斯 自加吉 张晓娟 余敏 熊伟 《生物技术》 北大核心 2017年第5期415-421,共7页

[目的]构建针对人线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)的shRNA干扰表达载体,检测其对人宫颈癌HeLa细胞MTERF2基因表达的干扰效率。[方法]以人MTERF2基因为靶向,设计并合成的2条互补寡核苷酸... [目的]构建针对人线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)的shRNA干扰表达载体,检测其对人宫颈癌HeLa细胞MTERF2基因表达的干扰效率。[方法]以人MTERF2基因为靶向,设计并合成的2条互补寡核苷酸链克隆至pSilencer^(TM)4.1-CMV neo真核表达载体中得到重组干扰质粒。对重组质粒进行PCR和DNA测序鉴定;运用脂质体介导瞬时转染HeLa细胞;采用半定量RT-PCR检测2个干扰质粒对人MTERF2基因mRNA表达的干扰效果,并筛选最有效的shRNA干扰序列;采用Western Blot技术检测2个干扰质粒转染HeLa细胞后MTERF2蛋白的表达情况。[结果]经PCR鉴定和DNA测序鉴定证实,pSi-MTERF2-1和pSi-MTERF2-2重组shRNA干扰表达质粒中已插入目的 DNA片断。瞬时转染MTERF2-shRNA的HeLa细胞48 h后,pSi-MTERF2-1和pSi-MTERF2-2干扰表达质粒均可以显著地降低人MTERF2基因mRNA和蛋白质的表达(P<0.01),而且pSiMTERF2-2干扰效果优于pSi-MTERF2-1。pSi-MTERF2-2对MTERF2基因mRNA和蛋白质表达的抑制率分别为74.0%、78.2%。[结论]成功构建针对人MTERF2基因的shRNA真核表达载体有效抑制目的基因的表达,为进一步应用于宫颈癌的基因治疗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 人线粒体转录终止因子2 短发夹RNA 载体构建 HELA细胞

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基于数据挖掘分析MTERF2基因在子宫内膜癌的表达及意义 被引量：1

13

作者 李彬 自加吉 +4 位作者 孙美涛 王唯斯 张若鹏 严长宝 熊伟 《生物技术通讯》 CAS 2018年第5期629-635,共7页

目的:基于数据挖掘分析线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因在子宫内膜癌及正常子宫内膜组织中的表达情况,并进一步探讨MTERF2对子宫内膜癌患者预后的影响。方法:利用Oncomine数据库分析MTERF2基因DNA拷贝数在子宫内膜癌组织中的变化;利用c... 目的:基于数据挖掘分析线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因在子宫内膜癌及正常子宫内膜组织中的表达情况,并进一步探讨MTERF2对子宫内膜癌患者预后的影响。方法:利用Oncomine数据库分析MTERF2基因DNA拷贝数在子宫内膜癌组织中的变化;利用cBioportal分析MTERF2基因在子宫内膜癌组织中的突变情况;通过基因表达谱动态分析(GEPIA)探讨人体正常组织及其相应的肿瘤组织中MTERF2基因的表达差异;经MethHC分析子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中MTERF2基因DNA启动子区甲基化水平的差异;利用OncoLnc对MTERF2基因的表达水平与子宫内膜癌患者生存率做Kaplan-Meier生存分析和Log-Rank检验;在String-DB数据库中探索MTERF2基因在线粒体DNA表达调控过程中关系密切的相关基因。结果:与正常子宫内膜组织相比,子宫内膜癌组织中MTERF2基因DNA拷贝数无明显变化(P>0.05),在mRNA水平呈显著低表达(P<0.05),DNA启动子区甲基化水平显著降低(P<0.005);MTERF2基因的表达水平与子宫内膜癌患者的总体生存时间无显著相关性(Log-Rank P>0.05);TFB1M、TFB2M、POLMT、MTERFD1、MTERFD2、PTCD1、SSBP1、COA3、HDGFRP3等基因与MTERF2基因关系密切,可能存在相互作用。结论:大样本数据挖掘能迅速获取子宫内膜癌组织中MTERF2基因表达的相关信息,为深入探究MTERF2基因在子宫内膜癌发生发展中的作用机制及其预后价值奠定基础。 展开更多

关键词 子宫内膜癌 线粒体转录终止因子2(MTERF2) 数据挖掘

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