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纳豆激酶原基因的克隆及表达
被引量：
16
1
作者
谢秋玲
孙奋勇
+2 位作者
廖美德
张玲
汪炬
《华南理工大学学报（自然科学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期19-21,共3页
从纳豆菌中克隆具有溶血栓性质的纳豆激酶原的基因 ,与质粒PBV2 2 0连接 ,转化大肠杆菌E .coliDH5α .挑取阳性克隆用EcoRⅠ /BamHⅠ双酶切鉴定得到一条约10 0 0bp的条带 .阳性克隆经温度诱导表达 ,用SDS_PAGE电泳鉴定 ,在 38kD处有一...
从纳豆菌中克隆具有溶血栓性质的纳豆激酶原的基因 ,与质粒PBV2 2 0连接 ,转化大肠杆菌E .coliDH5α .挑取阳性克隆用EcoRⅠ /BamHⅠ双酶切鉴定得到一条约10 0 0bp的条带 .阳性克隆经温度诱导表达 ,用SDS_PAGE电泳鉴定 ,在 38kD处有一条明显的带 ,占菌体蛋白的 2 0 %左右 ,同时还表明该蛋白以包涵体的形式蛋白分子量为存在 .包涵体经收集。
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关键词
纳
豆
激酶
原
基因克隆
基因表达
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职称材料
纳豆激酶原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达
被引量：
16
2
作者
刘北域
官孝群
宋后燕
《上海医科大学学报》
CSCD
1999年第6期401-404,共4页
目的 构建纳豆激酶原基因克隆 ,实现其在大肠杆菌中的表达。方法 从纳豆芽胞杆菌中分离纯化基因组DNA ,作为模板通过PCR扩增纳豆激酶原基因。运用重组DNA技术 ,构建表达质粒pESX 1,转化大肠杆菌JF112 5 ,温度诱导表达目的蛋白。结果...
目的 构建纳豆激酶原基因克隆 ,实现其在大肠杆菌中的表达。方法 从纳豆芽胞杆菌中分离纯化基因组DNA ,作为模板通过PCR扩增纳豆激酶原基因。运用重组DNA技术 ,构建表达质粒pESX 1,转化大肠杆菌JF112 5 ,温度诱导表达目的蛋白。结果 琼脂糖凝胶电脉及核苷酸序列分析证实 pESX 1为含纳豆激酶原基因的阳性克隆。在大肠杆菌中表达纳豆激酶原 ,经自体加工产生具有纤溶活性的纳豆激酶。结论 成功地构建了纳豆激酶原基因克隆 ,实现了在大肠杆菌中的表达。
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关键词
纳
豆
激酶
原
基因克隆
大肠杆菌
基因表达
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职称材料
前纳豆激酶原基因化学诱导型表达载体的构建及鉴定
3
作者
郭文秀
孙志
+1 位作者
云华
陈宇飞
《中国国境卫生检疫杂志》
CAS
2012年第2期78-82,共5页
目的克隆前纳豆激酶原基因,实现其在大肠杆菌中的表达,并对其表达条件进行研究。方法从枯草芽孢杆菌中分离纯化基因组DNA作为模板,通过PCR扩增前纳豆激酶原基因,将其克隆到质粒pUC19中,构建重组克隆质粒pNK并转化大肠杆菌DH5α;将目的...
目的克隆前纳豆激酶原基因,实现其在大肠杆菌中的表达,并对其表达条件进行研究。方法从枯草芽孢杆菌中分离纯化基因组DNA作为模板,通过PCR扩增前纳豆激酶原基因,将其克隆到质粒pUC19中,构建重组克隆质粒pNK并转化大肠杆菌DH5α;将目的基因片段与表达载体pET30a连接,构建重组表达质粒pENK,转化大肠杆菌BL21(DE3),对其表达条件进行研究。结果序列检测结果表明,所克隆片段全长1152bp,与Genbank中已报道序列相比较,同源性达到100%。转化菌pENK108-BL21(DE3)经IPTG诱导表达目的产物,SDS-PAGE检测结果显示具特异条带,Western Blotting检测结果表明,表达产物确系目的融合蛋白。转化菌pENK108-BL21(DE3)在LB培养基中经37℃培养,1mmol/L IPTG诱导4h后,目的产物表达量达到最大,约占菌体总蛋白的31%。时间凝块法显示表达物具有一定的纤溶作用。结论成功构建前纳豆激酶原基因化学诱导型表达载体,并对转化菌的表达条件进行了研究。
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关键词
前
纳
豆
激酶
原
基因
纳
豆
激酶
克隆
表达
纤溶作用
原文传递
前纳豆激酶原基因温控型表达载体的构建及其表达条件的研究
4
作者
郭文秀
孙志
+1 位作者
云华
陈宇飞
《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2013年第1期66-71,共6页
纳豆激酶(nattokinase,简称NK)是一种枯草芽孢杆菌蛋白激酶,该酶具有强烈溶栓活性。本研究从枯草芽胞杆菌中分离纯化得到基因组DNA作为模板,通过PCR扩增前纳豆激酶原基因,将其克隆到质粒pUC19中,构建重组克隆质粒pNK并转化大肠杆菌DH5α...
纳豆激酶(nattokinase,简称NK)是一种枯草芽孢杆菌蛋白激酶,该酶具有强烈溶栓活性。本研究从枯草芽胞杆菌中分离纯化得到基因组DNA作为模板,通过PCR扩增前纳豆激酶原基因,将其克隆到质粒pUC19中,构建重组克隆质粒pNK并转化大肠杆菌DH5α,测序结果表明,所克隆片段全长1152bp,与GenBank中已报道序列同源性达100%。将目的基因片段与表达载体pBV220连接,构建重组表达质粒pBNK,转化大肠杆菌HB101。采用不同诱导时间、不同诱导温度(40℃、42℃和44℃)诱导表达,结果发现转化菌pBNK6-HB101在LB培养基中经30℃培养,42℃诱导表达7小时目的产物表达量达到最大,约占菌体总蛋白的25.35%,转化菌pBNK6-HB101在不同的培养基(LB和TB)中培养,无明显差异。
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关键词
前
纳
豆
激酶
原
基因
枯草芽孢杆菌
克隆
表达
原文传递
题名
纳豆激酶原基因的克隆及表达
被引量：
16
1
作者
谢秋玲
孙奋勇
廖美德
张玲
汪炬
机构
暨南大学生物工程研究所
华南理工大学食品与生物工程学院
出处
《华南理工大学学报（自然科学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2002年第6期19-21,共3页
文摘
从纳豆菌中克隆具有溶血栓性质的纳豆激酶原的基因 ,与质粒PBV2 2 0连接 ,转化大肠杆菌E .coliDH5α .挑取阳性克隆用EcoRⅠ /BamHⅠ双酶切鉴定得到一条约10 0 0bp的条带 .阳性克隆经温度诱导表达 ,用SDS_PAGE电泳鉴定 ,在 38kD处有一条明显的带 ,占菌体蛋白的 2 0 %左右 ,同时还表明该蛋白以包涵体的形式蛋白分子量为存在 .包涵体经收集。
关键词
纳
豆
激酶
原
基因克隆
基因表达
Keywords
pro_nattokinase
clone
expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
纳豆激酶原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达
被引量：
16
2
作者
刘北域
官孝群
宋后燕
机构
上海医科大学基础医学院分子遗传学研究室
出处
《上海医科大学学报》
CSCD
1999年第6期401-404,共4页
文摘
目的 构建纳豆激酶原基因克隆 ,实现其在大肠杆菌中的表达。方法 从纳豆芽胞杆菌中分离纯化基因组DNA ,作为模板通过PCR扩增纳豆激酶原基因。运用重组DNA技术 ,构建表达质粒pESX 1,转化大肠杆菌JF112 5 ,温度诱导表达目的蛋白。结果 琼脂糖凝胶电脉及核苷酸序列分析证实 pESX 1为含纳豆激酶原基因的阳性克隆。在大肠杆菌中表达纳豆激酶原 ,经自体加工产生具有纤溶活性的纳豆激酶。结论 成功地构建了纳豆激酶原基因克隆 ,实现了在大肠杆菌中的表达。
关键词
纳
豆
激酶
原
基因克隆
大肠杆菌
基因表达
Keywords
pro nattokinase
gene clone
expressed with Escherichia coli
分类号
R378.21 [医药卫生—病原生物学]
Q556.9 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
前纳豆激酶原基因化学诱导型表达载体的构建及鉴定
3
作者
郭文秀
孙志
云华
陈宇飞
机构
内蒙古国际旅行卫生保健中心
出处
《中国国境卫生检疫杂志》
CAS
2012年第2期78-82,共5页
基金
内蒙古自然科学基金资助(200408020318)
文摘
目的克隆前纳豆激酶原基因,实现其在大肠杆菌中的表达,并对其表达条件进行研究。方法从枯草芽孢杆菌中分离纯化基因组DNA作为模板,通过PCR扩增前纳豆激酶原基因,将其克隆到质粒pUC19中,构建重组克隆质粒pNK并转化大肠杆菌DH5α;将目的基因片段与表达载体pET30a连接,构建重组表达质粒pENK,转化大肠杆菌BL21(DE3),对其表达条件进行研究。结果序列检测结果表明,所克隆片段全长1152bp,与Genbank中已报道序列相比较,同源性达到100%。转化菌pENK108-BL21(DE3)经IPTG诱导表达目的产物,SDS-PAGE检测结果显示具特异条带,Western Blotting检测结果表明,表达产物确系目的融合蛋白。转化菌pENK108-BL21(DE3)在LB培养基中经37℃培养,1mmol/L IPTG诱导4h后,目的产物表达量达到最大,约占菌体总蛋白的31%。时间凝块法显示表达物具有一定的纤溶作用。结论成功构建前纳豆激酶原基因化学诱导型表达载体,并对转化菌的表达条件进行了研究。
关键词
前
纳
豆
激酶
原
基因
纳
豆
激酶
克隆
表达
纤溶作用
Keywords
Pre-Pro-nattokinase gene
Nattokinase
Clone
Expression
Fibrinolytic activity
分类号
R115 [医药卫生—公共卫生与预防医学]
原文传递
题名
前纳豆激酶原基因温控型表达载体的构建及其表达条件的研究
4
作者
郭文秀
孙志
云华
陈宇飞
机构
内蒙古国际旅行卫生保健中心
出处
《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2013年第1期66-71,共6页
基金
内蒙古自然科学基金资助项目(编号200408020318)
文摘
纳豆激酶(nattokinase,简称NK)是一种枯草芽孢杆菌蛋白激酶,该酶具有强烈溶栓活性。本研究从枯草芽胞杆菌中分离纯化得到基因组DNA作为模板,通过PCR扩增前纳豆激酶原基因,将其克隆到质粒pUC19中,构建重组克隆质粒pNK并转化大肠杆菌DH5α,测序结果表明,所克隆片段全长1152bp,与GenBank中已报道序列同源性达100%。将目的基因片段与表达载体pBV220连接,构建重组表达质粒pBNK,转化大肠杆菌HB101。采用不同诱导时间、不同诱导温度(40℃、42℃和44℃)诱导表达,结果发现转化菌pBNK6-HB101在LB培养基中经30℃培养,42℃诱导表达7小时目的产物表达量达到最大,约占菌体总蛋白的25.35%,转化菌pBNK6-HB101在不同的培养基(LB和TB)中培养,无明显差异。
关键词
前
纳
豆
激酶
原
基因
枯草芽孢杆菌
克隆
表达
Keywords
Nattokinase gene
Bacillus subtilis
clone
expression
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
纳豆激酶原基因的克隆及表达
谢秋玲
孙奋勇
廖美德
张玲
汪炬
《华南理工大学学报（自然科学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2002
16
下载PDF
职称材料
2
纳豆激酶原的基因克隆及在大肠杆菌中的表达
刘北域
官孝群
宋后燕
《上海医科大学学报》
CSCD
1999
16
下载PDF
职称材料
3
前纳豆激酶原基因化学诱导型表达载体的构建及鉴定
郭文秀
孙志
云华
陈宇飞
《中国国境卫生检疫杂志》
CAS
2012
0
原文传递
4
前纳豆激酶原基因温控型表达载体的构建及其表达条件的研究
郭文秀
孙志
云华
陈宇飞
《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2013
0
原文传递
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