期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到5篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ基因的高表达 被引量：2
1
作者 方浩 夏黎明 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第4期784-790,共7页
纤维二糖水解酶II(CBH II)是纤维素酶的重要组分之一,对纤维素酶的水解性能有着重大影响,而里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶制剂中纤维二糖水解酶II明显不足,为了优化其酶系结构,采用了基因重组技术构建CBH II高产菌株:将里氏木霉... 纤维二糖水解酶II(CBH II)是纤维素酶的重要组分之一,对纤维素酶的水解性能有着重大影响,而里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶制剂中纤维二糖水解酶II明显不足,为了优化其酶系结构,采用了基因重组技术构建CBH II高产菌株:将里氏木霉CBH II基因置于里氏木霉强启动子Pcbh1(及其信号肽)和终止子Tcbh1之间,并进一步以pCAMBIA1300为载体骨架,构建成含潮霉素B抗性标记的重组质粒pCAMBIA1300-hph-PsCT。以里氏木霉ZU-02为宿主,采用根瘤农杆菌介导转化技术将重组质粒转入宿主分生孢子。以潮霉素B为抗性标记初筛到324个阳性转化子,进一步通过复筛,在以微晶纤维素为唯一碳源的筛选培养基上获得8个生长较快的优良转化子。在摇瓶条件下,分别对8个转化子进行产酶试验,培养48 h时,纤维二糖水解酶活力最高可达18.24 U·mL-1,是出发菌株的2.51倍。本结果对于里氏木霉纤维素酶的定向进化、提高其对纤维素的协同糖化效率具有重要意义。 展开更多
关键词 里氏木霉 纤维素酶 纤维二糖水解酶ⅱ基因 高表达
下载PDF
拟康氏木霉和微紫青霉纤维二糖水解酶基因Ⅰ(Cbh1)启动子的初步分析 被引量：3
2
作者 王景林 高培基 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第6期764-768,共5页
应用 PCR技术 ,分别扩增拟康氏木霉 (T.pseudokoningii S38)和微紫青霉 (P.janthinellumAs3.51 0 ) Cbh1启动子的 2 84bp和 2 1 5bp两个片段 ,并通过凝胶阻滞试验 ,初步分析了在槐糖和葡萄糖两种培养条件下 Cbh1启动子上参与 Cbh1基因... 应用 PCR技术 ,分别扩增拟康氏木霉 (T.pseudokoningii S38)和微紫青霉 (P.janthinellumAs3.51 0 ) Cbh1启动子的 2 84bp和 2 1 5bp两个片段 ,并通过凝胶阻滞试验 ,初步分析了在槐糖和葡萄糖两种培养条件下 Cbh1启动子上参与 Cbh1基因表达的调控信息 .凝胶阻滞试验结果表明 ,S38Cbh1启动子片段与葡萄糖和槐糖培养 /诱导条件下的无细胞提取物 ,均形成了蛋白质 - DNA复合物 ,而 As3.51 0 ,只有葡萄糖培养条件下的无细胞提取物与其启动子片段 ,形成了蛋白质 -DNA复合物 .表明在 S38Cbh1启动子的 - 30 2 /- 1 8bp处 ,可能存在与槐糖和葡萄糖介导的调控蛋白相互作用的特定核酸基元 ,而在 As3.51 0 Cbh1启动子上的 - 2 80 /- 65bp处有与葡萄糖介导的阻遏蛋白相互作用的特定核酸基元 .竞争性阻滞试验结果表明 ,S38和 As3.51 0 Cbh1启动子片段与胞内调控蛋白的相互作用是特异性的 . 展开更多
关键词 拟康氏木霉 微紫青霉 纤维二糖水解酶基因1
下载PDF
里氏木霉纤维二糖水解酶基因cbh1的分子改造 被引量：4
3
作者 陈小玲 张穗生 +2 位作者 黄俊 雷富 陈东 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1739-1743,共5页
【目的】用分子改造的方法改造里氏木霉（Trichoderma reesei）的纤维二糖水解酶基因cbh1，提高其纤维素酶活力，为工业化生产纤维素酶提供参考。【方法】用DNase Ⅰ消化里氏木霉cbb1，回收100bp左右的片段后用T4DNA连接酶连接，以连接... 【目的】用分子改造的方法改造里氏木霉（Trichoderma reesei）的纤维二糖水解酶基因cbh1，提高其纤维素酶活力，为工业化生产纤维素酶提供参考。【方法】用DNase Ⅰ消化里氏木霉cbb1，回收100bp左右的片段后用T4DNA连接酶连接，以连接产物作为模板进行PCR扩增，将PCR改造的cbh1基因转化里氏木霉原生质体，使改造的cbh1基因与里氏木霉原有的cbh1基因发生同源重组。通过比较滤纸酶活力的方法筛选纤维素酶活力提高的突变菌株，在NCBI上比对分析突变菌株的cbh1序列。【结果】经克隆测序获得基因片段大小为637bp，与里氏木霉同属菌株cbh1基因的相似性在88％-98％，确定为里氏木霉cbh1的基因片段。经DNaseⅠ消化15min、T4DNA连接酶连接、经PCR扩增获得改造后的cbh1基因。将改造cbh1基因片段转化里氏木霉原生质体，得到cbh1基因突变体库。从cbh1基因突变体库中筛选获得1株纤维素酶滤纸酶活比出发菌株高1．7518倍的突变菌株E2-1。序列比对分析发现，与出发菌株相比，突变菌株E2-1的cbh1基因有14个碱基发生了突变，其中5个碱基为置换突变，8个碱基为缺失突变，1个碱基为插入突变，分布于cbh1基因的9个位置。【结论】改造后的cbhI基因能与里氏木霉的染色体DNA发生同源重组，进而提高突变菌株的纤维素滤纸酶活力。 展开更多
关键词 里氏木霉 纤维素酶 纤维二糖水解酶基因 分子改造 碱基突变
下载PDF
强启动子glaA介导cbhB基因在黑曲霉中的表达 被引量：1
4
作者 秦慧彬 杨洪江 +1 位作者 黄文 李玲艳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期34-38,共5页
黑曲霉纤维素酶三类不同酶系中,纤维二糖水解酶基因表达处于很低水平,导致纤维素酶总体活力水平不高。为构建黑曲霉纤维素酶高产菌株,采用基因工程方法,全基因合成拼接黑曲霉高表达葡萄糖淀粉酶基因glaA的强启动子片段与纤维二糖水解酶... 黑曲霉纤维素酶三类不同酶系中,纤维二糖水解酶基因表达处于很低水平,导致纤维素酶总体活力水平不高。为构建黑曲霉纤维素酶高产菌株,采用基因工程方法,全基因合成拼接黑曲霉高表达葡萄糖淀粉酶基因glaA的强启动子片段与纤维二糖水解酶基因cbhB编码区片段,然后将杂合基因克隆到二元载体pCAMBIA1301上,重组质粒通过农杆菌介导转化黑曲霉分生孢子,携带杂合基因的T-DNA片段插入到黑曲霉转化子的染色体上,共筛选到48个具有潮霉素抗性的转化子。纤维素酶活力水平测定结果显示,转化子A3-9的CMC酶活力最高,为野生型黑曲霉菌株的1.31倍;转化子B1-7与A3-6的滤纸酶活力最高,为野生型黑曲霉菌株2.51倍。另外,初步分析了杂合基因在黑曲霉中的表达所需的诱导条件。 展开更多
关键词 黑曲霉 纤维二糖水解酶基因cbhB 葡萄糖淀粉酶基因glaA 杂合基因
原文传递
康氏木霉纤维素酶转录因子ACEII与外切纤维二糖水解酶基因I(cbh1)启动子的结合分析 被引量：2
5
作者 凌敏 梁纲 +2 位作者 覃拥灵 李楠 梁智群 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期60-63,共4页
ACEI、ACEII和Xyr1是康氏木霉中调控纤维素酶基因表达的转录因子。体外实验已证实ACEI和Xyr1可与cbh1启动子上的287bp序列(-304bp^-18bp)结合从而调控cbh1基因转录,但ACEII是否可与此序列结合仍未清楚。为进一步研究ACEII调控纤维素酶... ACEI、ACEII和Xyr1是康氏木霉中调控纤维素酶基因表达的转录因子。体外实验已证实ACEI和Xyr1可与cbh1启动子上的287bp序列(-304bp^-18bp)结合从而调控cbh1基因转录,但ACEII是否可与此序列结合仍未清楚。为进一步研究ACEII调控纤维素酶基因表达的机制,利用PCR技术扩增康氏木霉ACEII DNA结合区的基因序列,并使其在大肠杆菌中表达。凝胶迁移率移动试验表明ACEII DNA结合区不能与cbh1启动子的287bp序列结合。提示了康氏木霉cbh1基因在诱导表达时起调控作用的主要是Xyr1,而不是ACEII。这对阐明真菌纤维素酶基因表达调控的分子机制具有重要的意义。 展开更多
关键词 ACEII 纤维素酶 外切纤维二糖水解酶基因I 凝胶迁移率移动试验 康氏木霉
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部