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电转化方法将外源性质粒导入干酪乳杆菌的研究 被引量：17
1
作者 格日勒图 王艳霞 +2 位作者 包秋华 代兄 张和平 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2009年第2期9-13,共5页
以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆菌(L.casei Zhang)为材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件。结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms。pMG36c转化不同对数生长期L.casei Zhang时,发现转化对数生长... 以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆菌(L.casei Zhang)为材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件。结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms。pMG36c转化不同对数生长期L.casei Zhang时,发现转化对数生长中期菌体获得的转化子数最高,而转化效率不是最高;转化生长初期获得的转化子数为4.04×106 mL-1,电转化效率为89.78%;后期则为1.6×107 mL-1和4.0%。磷酸钠作电击缓冲液获得的转化子数高于体积分数为10%甘油获得的转化子数。复苏培养基甘氨酸质量分数为0.5%时得到的转化子数最高,转化效率为35.56%;当甘氨酸质量分数增加到1%时得到的转化子数和转化效率分别下降到5.6×106 mL-1和6.22%,甘氨酸质量分数为2%时得到的转化子数和转化效率更低;不同质粒转化L.casei Zhang时,pMG36c转化获得的转化子数高于pMG36e转化子数。选择pMG36e转化L.casei Zhang的转化子为模板,通过PCR反应已证实转化试验的可靠性。本研究为外源基因电转化干酪乳酸菌提供了可靠的参考依据。 展开更多
关键词 干酪乳杆菌 电转化 外源性质粒 pMG36e(表达载体 红霉素抗性) pMG36c(克隆载体 氯霉素抗性)
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红霉素抗菌作用及细菌产生红霉素抗性的机制 被引量：14
2
作者 李凌凌 张部昌 马清钧 《国外医药（抗生素分册）》 CAS 2004年第1期12-16,33,共6页
红霉素是一类广谱的大环内酯类抗生素 ,随着红霉素在临床上的大量使用 ,红霉素也和其他抗生素一样出现了病原菌耐药性问题。从分子水平上将红霉素的抗菌机制与细菌产生耐药性机制联系起来对研制新一代的红霉素抗生素起指导性作用。红霉... 红霉素是一类广谱的大环内酯类抗生素 ,随着红霉素在临床上的大量使用 ,红霉素也和其他抗生素一样出现了病原菌耐药性问题。从分子水平上将红霉素的抗菌机制与细菌产生耐药性机制联系起来对研制新一代的红霉素抗生素起指导性作用。红霉素通过从空间上阻滞新生肽链的延伸和促进pt -tRNA的脱落而起抗菌作用 ,而细菌则通过影响红霉素在胞内的积累、破坏红霉素的结构。 展开更多
关键词 红霉素 抗菌作用 细菌产生红霉素抗性 耐药机制 核糖体
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红色糖多孢菌红霉素抗性基因的克隆与鉴定 被引量：2
3
作者 孙丽萍 沈琼 +2 位作者 叶江 吴海珍 张惠展 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期20-23,共4页
将红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)的染色体 DNA用 Pst I酶切后与载体p UWL2 0 1连接 ,转化变铅青链霉菌 ( S.lividans) TK2 3的原生质体。采用双重抗性筛选得到了 9个转化子。分别抽提其中的质粒并再次转化原生质体 ,在... 将红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)的染色体 DNA用 Pst I酶切后与载体p UWL2 0 1连接 ,转化变铅青链霉菌 ( S.lividans) TK2 3的原生质体。采用双重抗性筛选得到了 9个转化子。分别抽提其中的质粒并再次转化原生质体 ,在含红霉素的平板上各筛选约 2 0 0个转化子 ,其中有 3个在抗性板上生长良好 ,分别命名为 p LP42、p LP1 b和 p LP44。对其中的 p LP42酶切分析表明 ,其含有约 3.0 kb的红色糖多孢菌 ( Saccharopolyspora erythraea)染色体 DNA片段 ,它的载体部分发生了缺失。以 p UC1 8为载体 ,将 p LP42的 1 .7kb- Kpn I片断克隆、测序、经与 Genebank的erm E基因顺序比较 ,证实已克隆了 Saccharopolyspora 展开更多
关键词 鸟枪法 原生质体转化 红色糖多孢菌 红霉素抗性基因 双重抗性筛选 基因克隆 基因鉴定
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沼泽红假单胞菌高产辅酶Q10菌株的诱变选育研究 被引量：2
4
作者 李涵依 李建国 +2 位作者 欧小兵 车晨 郝葆青 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第6期869-873,共5页
以沼泽红假单胞菌为出发菌株,通过紫外诱变和罗红霉素抗性筛选,以期获得辅酶Q10高产菌株.试验结果表明,紫外照射时间60-70s时可能达到最大正向突变概率.通过紫外诱变、罗红霉素初筛和发酵复筛,获得一株沼泽红假单胞菌突变株R-1,辅酶Q10... 以沼泽红假单胞菌为出发菌株,通过紫外诱变和罗红霉素抗性筛选,以期获得辅酶Q10高产菌株.试验结果表明,紫外照射时间60-70s时可能达到最大正向突变概率.通过紫外诱变、罗红霉素初筛和发酵复筛,获得一株沼泽红假单胞菌突变株R-1,辅酶Q10产量达到0.021g/L,较出发菌株产量(0.018g/L)提高16%.经过6次传代培养,突变菌株产辅酶Q10产量稳定,可用于进一步研究. 展开更多
关键词 沼泽红假单胞菌 辅酶Q10 紫外诱变 罗红霉素抗性筛选
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透明颤菌血红蛋白基因在淀粉酶产色链霉菌中的表达及对合成丰加霉素的影响 被引量：2
5
作者 马正 刘金秀 +2 位作者 申屠旭萍 边亚琳 俞晓平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1175-1185,共11页
【目的】丰加霉素(Toyocamycin)是核苷类抗生素家族的重要成员,其在农业植物病害防治领域具有巨大的应用价值。为改善丰加霉素生产菌淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes 1628)发酵过程溶氧限制,旨在实现vgb在S.diastato... 【目的】丰加霉素(Toyocamycin)是核苷类抗生素家族的重要成员,其在农业植物病害防治领域具有巨大的应用价值。为改善丰加霉素生产菌淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes 1628)发酵过程溶氧限制,旨在实现vgb在S.diastato-chromogenes 1628中的表达以促进丰加霉素的生物合成。【方法】首先以gfp为报告基因检测红霉素抗性基因启动子Perm*在S.diastatochromogenes 1628中的转录活性,再利用PermE*实现vgb的异源表达。【结果】在荧光显微镜下,重组菌1628-GFP菌丝可发出稳定明亮的绿色荧光,表明启动子PermE*在菌株1628中可有效启动外源基因的表达;通过一氧化碳结合差光谱分析显示VHb具有生物学活性;摇瓶实验表明:与原始菌株相比,重组菌可促进丰加霉素产量的提高,在中度和高度限氧条件下促进效果尤为明显,提高幅度分别为48.9%和104.5%。PCR和发酵效价检测显示重组菌具有良好的遗传稳定性。【结论】成功实现了vgb在S.diastatochromogenes 1628中的表达,有效提高了其丰加霉素的合成水平,为丰加霉素的工业化生产提供了基础条件。 展开更多
关键词 淀粉酶产色链霉菌 丰加霉素 绿色荧光蛋白 透明颤菌血红蛋白 红霉素抗性基因启动子
原文传递
基因工程
6
《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第9期36-47,共12页
892690 含同感序列和特异性启动子的新型重组 DNA[专,德]/Boehr.Mannheim/EP-285-152:19.10.87-DE-735381(05.10.88)(31.03.87-DE-710633)30.03.88 as 105219.88-294149/42(12页)
关键词 逆病毒载体 染色体外因子 启动子调控 转座子 外源基因 编码区 特异性启动子 红霉素抗性基因 拷贝数 粘性末端
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基因工程
7
《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第4期22-36,共15页
911030 大肠杆菌严格饥饿蛋白(SSP)启动子在克隆基因表达系统中应用的可能性[会,英]/Williams,M.D.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1990,199 Meet.,Pt.1.-BIOT124[译自DBA,1990,9(17),90-09776]分离到大肠杆菌SSP基因,经定位诱变构建ssp缺... 911030 大肠杆菌严格饥饿蛋白(SSP)启动子在克隆基因表达系统中应用的可能性[会,英]/Williams,M.D.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1990,199 Meet.,Pt.1.-BIOT124[译自DBA,1990,9(17),90-09776]分离到大肠杆菌SSP基因,经定位诱变构建ssp缺陷突变子。 展开更多
关键词 基因表达系统 启动子调控 复制起点 红霉素抗性基因 突变子 选择标记 外源基因 克隆基因 融合蛋白 噬菌体克隆
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基因工程
8
《生物技术通报》 CAS CSCD 1994年第1期33-52,共20页
关键词 启动子调控 电激法 基因文库 DNA 基因组计划 克隆位点 编码区 红霉素抗性基因 选择标记 酵母人工染色体
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基因标记、转化、表达与检测
9
《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第9期33-37,共5页
932922二硫苏糖醇可改进酵母菌的转化效率[英]/Redd-y,A.…//Anal.Biochem.-1993,208(1).-211～212[译自 DBA,1993,12(6),93-03093]这是用于酿酒酵母转化的醋酸锂改良法,包括与二硫苏糖醇(DTT)一起保温步骤。
关键词 酿酒酵母 二硫苏糖醇 基因标记 启动子调控 人基因组 细胞亚群 受体菌 杆状病毒 红霉素抗性基因 重组体
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