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表达PRRSV GP2a-GP4的重组LCMV的构建与鉴定 被引量:1
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作者 井汇源 李华玮 +5 位作者 王金合 曹素芳 王海花 张艳 董望 包文奇 《动物医学进展》 北大核心 2023年第3期32-37,共6页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是危害养猪业发展的重要病原之一。高效PRRS疫苗的研发是病毒防控的重要前提。借助机体产生针对病毒颗粒表面糖蛋白(glycoprotein, GP)GP2a/GP4的... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是危害养猪业发展的重要病原之一。高效PRRS疫苗的研发是病毒防控的重要前提。借助机体产生针对病毒颗粒表面糖蛋白(glycoprotein, GP)GP2a/GP4的中和抗体,阻止与CD163受体的结合,成为PRRSV疫苗研发的关键策略之一。据此,构建了基于重组淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(Lymphocytic choriomeningitis virus, LCMV)的反向遗传学操作系统,使重组LCMV携带PRRSV GP2a-GP4蛋白的基因序列。对比P2代和P16代重组病毒的生长曲线发现P16代病毒增殖速度更快、滴度更高。在重组LCMV感染的细胞中,通过Western blot试验能够检测到GP2a-GP4蛋白的表达。该重组LCMV载体的免疫保护效果有待攻毒保护试验的进一步评估。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 糖蛋白2a 糖蛋白4 反向遗传学 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒
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PRG4蛋白SMB结构域的表达及聚集现象研究
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作者 王黎芳 韩之波 +4 位作者 陈文虎 杜蓬 孙爱华 杨萍 赵宏光 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1319-1324,共6页
利用糖蛋白4(PRG4)分子多态性的特点,克隆表达含有两个人促细胞生成素B(SMB)结构域及少量糖基化重复序列的重组蛋白(SMBPRG4),并建立了成熟的纯化工艺流程,可高效表达重组蛋白。进一步通过凝胶排阻、动态光散射实验发现重组蛋白具有自... 利用糖蛋白4(PRG4)分子多态性的特点,克隆表达含有两个人促细胞生成素B(SMB)结构域及少量糖基化重复序列的重组蛋白(SMBPRG4),并建立了成熟的纯化工艺流程,可高效表达重组蛋白。进一步通过凝胶排阻、动态光散射实验发现重组蛋白具有自我聚集的特点,在溶液中以稳定的二聚体形式存在。结构预测及非还原电泳揭示SMBPRG4是非共价结合的同源二聚体。 展开更多
关键词 糖蛋白4 基因表达 结构 蛋白聚集
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复方甘草酸苷对乙型肝炎模型大鼠血清中肝炎相关因子的影响 被引量:10
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作者 陈应强 庄海 +2 位作者 吴维巍 许建炜 刘涛 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期1626-1628,共3页
目的探讨复方甘草酸苷对乙型肝炎模型大鼠血清肝炎相关因子的影响。方法 60只成年健康雄性大鼠,随机分为6组,正常组、模型组、对照组、低、中、高3个剂量实验组,每组10只。正常组与模型组每日灌服等体积的生理盐水3m L,实验组每天灌服3... 目的探讨复方甘草酸苷对乙型肝炎模型大鼠血清肝炎相关因子的影响。方法 60只成年健康雄性大鼠,随机分为6组,正常组、模型组、对照组、低、中、高3个剂量实验组,每组10只。正常组与模型组每日灌服等体积的生理盐水3m L,实验组每天灌服3个浓度(10,20,30 mg·kg-1)复方甘草酸苷悬浊液3 m L,对照组组每天灌胃23.3 mg·m L-1拉米夫定溶液3 m L。干预结束后,抽取静脉血3 m L,PCR法检测肝组织中的CD4+T淋巴细胞基因表达,流式细胞法检测T淋巴细胞亚群及激活素a(ACT-a)水平,放免法检测肿瘤因子水平。结果与对照组相比,高、中2个剂量实验组CD4+及CD8+T淋巴细胞亚群水平明显降低,ACT-a及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平也明显降低(均P<0.05)。结论复方甘草酸苷能够明显抑制肿瘤因子的合成,并降低ACT-a的水平,改善CD4+及CD8+T淋巴细胞水平。 展开更多
关键词 复方甘草酸苷 乙型肝炎 细胞膜表面单链糖蛋白4 T淋巴细胞亚群
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常染色体隐性遗传念珠状发一例及其家系基因突变研究 被引量:5
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作者 王沛 周城 +5 位作者 王雨馨 温广东 刘萍 于聪 廖文俊 张建中 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期158-161,共4页
目的 报道国内首例常染色体隐性遗传念珠状发,对患者及其父母桥粒芯糖蛋白4编码基因(DSG4)进行突变研究.方法 抽取1例念珠状发患儿及其父母外周血,提取血液基因组DNA,同时取100例健康汉族人基因组DNA样品作对照,采用PCR方法扩增DSG4基... 目的 报道国内首例常染色体隐性遗传念珠状发,对患者及其父母桥粒芯糖蛋白4编码基因(DSG4)进行突变研究.方法 抽取1例念珠状发患儿及其父母外周血,提取血液基因组DNA,同时取100例健康汉族人基因组DNA样品作对照,采用PCR方法扩增DSG4基因16个外显子,并对产物进行测序分析.结果 患儿 DSG4基因存在2个杂合突变,突变1为第8外显子移位突变c.837delA(p.E280Rfs*4),突变2为第16外显子无义突变c.2389C> T(p.R797*).对其父母的基因分析证明,突变1来自其父亲,突变2来自其母亲.100例健康对照均未发现该杂合突变.结论 DSG4基因的2个杂合突变c.837delA(p.E280Rfs*4)和c.2389C>T(p.R797*)导致该常染色体隐性遗传念珠状发家系的临床表型,2个突变均导致DSG4基因翻译的提前终止. 展开更多
关键词 念珠形发 稀毛症 皮肤疾病 遗传性 桥粒芯糖蛋白质类 突变 桥粒芯糖蛋白4基因
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常染色体隐性遗传念珠状发1例及DSG4基因突变分析
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作者 储开宇 王键旋 +2 位作者 钟敏华 毛荣军 罗文峰 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期651-654,共4页
目的:对常染色体隐性遗传念珠状发1例患儿及其父母进行桥粒芯糖蛋白(DSG)4基因突变分析。方法:提取患儿、患儿父母的DNA样本,采用二代皮肤靶向测序包检测患儿的突变基因,对发现的突变位点应用Sanger测序对患儿及其父母进行验证。结果:... 目的:对常染色体隐性遗传念珠状发1例患儿及其父母进行桥粒芯糖蛋白(DSG)4基因突变分析。方法:提取患儿、患儿父母的DNA样本,采用二代皮肤靶向测序包检测患儿的突变基因,对发现的突变位点应用Sanger测序对患儿及其父母进行验证。结果:基因测序显示患儿DSG4基因存在2~16号外显子杂合缺失,并且DSG4基因内含子15存在1个杂合变异c.2355+1G>A;患儿父亲DSG4基因2~16号外显子杂合缺失突变;患儿母亲携带DSG4基因c.2355+1G>A杂合突变;100例健康人对照DSG4基因均未发现上述位点突变。结合患儿临床特征及基因检测结果,最终诊断为常染色体隐性遗传念珠状发。结论:本研究进一步证实了常染色体隐性遗传念珠状发的临床特征和DSG4基因变异,丰富了该病的遗传和临床数据。 展开更多
关键词 常染色体隐性遗传 念珠状发 桥粒芯糖蛋白4
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基于蛋白质组学探讨丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板活化的影响机制
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作者 张玉昆 冯月男 +3 位作者 卞敬琦 刘欣欣 肖洪彬 牛雯颖 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1-8,共8页
目的:通过长期高脂饲料喂养复制高脂血症动物模型,采用蛋白质组学、分子生物学等方法阐释丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板活化的影响机制。方法:Wistar大鼠,按血脂水平随机分正常组、模型组、丹参饮组,每组10只。正常组动物喂食基础饲料... 目的:通过长期高脂饲料喂养复制高脂血症动物模型,采用蛋白质组学、分子生物学等方法阐释丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板活化的影响机制。方法:Wistar大鼠,按血脂水平随机分正常组、模型组、丹参饮组,每组10只。正常组动物喂食基础饲料,模型组和丹参饮组动物喂食高脂饲料造模,3组动物均自由饮水、自由进食。于第9周开始治疗干预,丹参饮组实验动物给予丹参饮灌胃给药,剂量为3.6 g·kg^(-1)生药;模型组和正常组实验动物根据体质量给予等体积生理盐水。第12周后取材并进行相关指标检测,利用生化分析仪来检测血清中血脂4项水平,利用血液流变仪来检测全血黏度和血浆黏度,利用液质联用色谱仪来检测血小板蛋白质组,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血小板膜糖蛋白4(CD36)、黏着斑激酶(FAK)、磷脂酰肌醇4-磷酸5-激酶(PIP5K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达。结果:与模型组比较,丹参饮组高脂血症模型大鼠血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平能够明显降低(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,丹参饮组大鼠血小板聚集率明显降低(P<0.05);模型组与正常组比较上调蛋白数目44个,下调蛋白数目12个,差异蛋白总数为56个;丹参饮组与模型组比较上调蛋白数目21个,下调蛋白数目22个,差异蛋白总数为43个;丹参饮组和正常组比较上调蛋白数目31个,下调蛋白数目49个差异蛋白总数共计80个,通过基因本体(GO)功能富集分析主要涉及胆固醇转运和外排,以及细胞因子的产生比较显著且与血脂异常和血小板活化有关,京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能富集分析涉及ECM-receptor interaction信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路、黏着斑信号通路、PI3K/A 展开更多
关键词 高脂血症 丹参饮 活血化瘀 血小板膜糖蛋白4
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丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板生理特性和功能的影响机制 被引量:3
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作者 张玉昆 冯月男 +3 位作者 卞敬琦 刘欣欣 肖洪彬 牛雯颖 《中国药房》 CAS 北大核心 2023年第7期790-795,共6页
目的基于血小板膜糖蛋白4(CD36)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路探讨丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板生理特性和功能的影响机制。方法通过喂养高脂饮食复制高脂血症模型大鼠,将其随机分为模型组、辛伐他汀组(0.004 g/kg... 目的基于血小板膜糖蛋白4(CD36)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路探讨丹参饮对高脂血症模型大鼠血小板生理特性和功能的影响机制。方法通过喂养高脂饮食复制高脂血症模型大鼠,将其随机分为模型组、辛伐他汀组(0.004 g/kg)和丹参饮高、低剂量组(3.6、0.9 g/kg),另设空白组(喂养基础饲料),每组10只。各给药组大鼠每天灌胃相应药物,其余组灌胃等体积生理盐水,连续4周。末次给药后,检测大鼠血脂生化指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]含量,全血黏度、血浆黏度和血浆中纤维蛋白原(FIB)含量,血小板相关参数[血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(PDW)和血小板平均体积(MPV)],血小板生理特性和功能相关因子[血管性血友病因子(vWF)、纤维连接蛋白(Fn)、磷脂酶A2(PLA2)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓素A2(TXA2)、前列腺素(PGI2)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、β-血小板球蛋白(β-TG)]水平,血小板聚集率(最大聚集率、60 s聚集率、180 s聚集率)和纤溶系统相关因子[组织型纤溶酶原活化剂(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)]水平,血小板中CD36/PI3K/Akt信号通路相关蛋白[CD36、黏着斑激酶(FAK)、磷脂酰肌醇4-磷酸5-激酶(PIP5K)、PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)、p-Akt1/2/3]表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠血浆中TC、TG、LDL-C含量,全血黏度、血浆黏度、血浆中FIB含量,血浆中PLT、MPV、vWF、Fn、PLA2、TXB2、TXA2、cGMP、β-TG水平,血小板最大聚集率、60 s聚集率,血浆中PAI-1水平,CD36、FAK、PIP5K、PI3K、p-Akt、p-Akt1/2/3蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);HDL-C含量和6-keto-PGF1α、PGI2、t-PA水平均显著降低(P<0.05)。经丹参饮干预后,上述大部分指标均显著逆转(P<0.05)。结论丹参饮可改善高脂血症模型大鼠血小板生理特性� 展开更多
关键词 高脂血症 丹参饮 血小板活化 血小板膜糖蛋白4/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路
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CSPG4基因在鼻咽癌中的表达分析 被引量:1
8
作者 宋亚莉 李小玲 +13 位作者 黄丽丽 李俏 孙梦熙 张文玲 石磊 范松青 龚朝建 喻正源 向波 彭淑平 熊炜 阳剑波 曾朝阳 李桂源 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第24期1997-2000,共4页
目的:研究硫酸软骨素多糖蛋白4(CSPG4)基因在鼻咽癌及对照组织中的表达。方法:采用实时荧光定量PCR测定CSPG4基因在4例正常鼻咽上皮和18例鼻咽癌组织(其中Ⅱ期6例,Ⅲ期5例,Ⅳ期7例)中的表达情况;通过构建包含92例对照和187例鼻咽癌的组... 目的:研究硫酸软骨素多糖蛋白4(CSPG4)基因在鼻咽癌及对照组织中的表达。方法:采用实时荧光定量PCR测定CSPG4基因在4例正常鼻咽上皮和18例鼻咽癌组织(其中Ⅱ期6例,Ⅲ期5例,Ⅳ期7例)中的表达情况;通过构建包含92例对照和187例鼻咽癌的组织芯片,应用免疫组织化学检测CSPG4蛋白的表达和分布。结果:正常鼻咽上皮中CSPG4基因mRNA表达水平较低,在鼻咽癌中CSPG4表达上调且与临床分期呈正相关,差异具有统计学意义(P=0.017)。免疫组织化学结果表明鼻咽癌中CSPG4蛋白表达水平高于对照组,91.98%的鼻咽癌组织中CSPG4为强阳性表达,而对照组的强阳性率为76.09%(P=0.001)结论:CSPG4在鼻咽癌中随着临床进展表达逐渐上调,可能参与了鼻咽癌的发生发展,具体机制及临床应用前景值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 鼻咽癌 硫酸软骨素多糖蛋白4 表达 组织芯片
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人皮肤组织桥粒芯糖蛋白4片段的克隆和在寻常型天疱疮中免疫识别的初步研究
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作者 李薇 冯云 +2 位作者 吕小岩 黎静宜 冉玉平 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期84-87,共4页
目的扩增人皮肤组织桥粒芯糖蛋白4(desm og le in 4,D sg4)胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4的核酸序列,为寻常型天疱疮(pem ph igus vu lgaris,PV)发病机制的研究提供依据。方法根据G enB ank中的D sg 4序列(登录号为AY 177664)分析,通过逆... 目的扩增人皮肤组织桥粒芯糖蛋白4(desm og le in 4,D sg4)胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4的核酸序列,为寻常型天疱疮(pem ph igus vu lgaris,PV)发病机制的研究提供依据。方法根据G enB ank中的D sg 4序列(登录号为AY 177664)分析,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法从人正常皮肤组织中抽提RNA,逆转录合成cD-NA,聚合酶链反应(PCR)扩增皮肤组织桥粒芯糖蛋白4胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4目的基因;应用基因重组技术将目的基因分别与质粒pET 32a在T 4 DNA连接酶作用下相连接,转化E.coli DH 5α感受态细菌,用含氨苄青霉素的LB培养基平板筛选转化菌,阳性重组子DNA序列测定鉴定;重组融合蛋白经EL ISA法与PV患者、正常对照组血清进行反应。结果RT-PCR扩增产物经凝胶电泳得到均约为350 bp的4条条带;质粒载体pET 32a连接的目的基因经序列测定后与在G enB ank登录的D sg4胞外区域EC1、EC2、EC3和EC4核酸序列完全一致,4个D sg4胞外区域cDNA读码框架正确;D sg4 EC1、EC2、EC3和EC4与患者血清反应,而不与正常对照组血清反应。结论D sg4胞外区域多肽片断在PV发病中可能有作用。 展开更多
关键词 桥粒芯糖蛋白4 天疱疮 克隆 融合蛋白 免疫识别
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散结镇痛胶囊联合曲普瑞林治疗子宫内膜异位症的临床研究 被引量:6
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作者 左侠 张坤 《现代药物与临床》 CAS 2016年第10期1616-1620,共5页
目的探讨散结镇痛胶囊联合曲普瑞林治疗子宫内膜异位症的临床疗效。方法选取2012年5月—2015年5月在西安市第四医院接受治疗的子宫内膜异位症患者90例,按照治疗方法的差别分成对照组(45例)和治疗组(45例)。对照组患者于术后第一次月经第... 目的探讨散结镇痛胶囊联合曲普瑞林治疗子宫内膜异位症的临床疗效。方法选取2012年5月—2015年5月在西安市第四医院接受治疗的子宫内膜异位症患者90例,按照治疗方法的差别分成对照组(45例)和治疗组(45例)。对照组患者于术后第一次月经第2天肌肉注射注射用曲普瑞林,3.75 mg/次,1次/4周。治疗组在对照组的基础上口服散结镇痛胶囊,4粒/次,3次/d。两组患者均连续治疗6个月。比较两组临床疗效、CA125、乙醛脱氢酶1(ALDH1)、人类软骨糖蛋白-4(YKL-4)、前列腺素F2α(PGF2α)、白介素-6(IL-6)、IL-18及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)表达水平。结果治疗后,对照组和治疗组总有效率分别为80.00%和95.56%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组CA125、ALDH1、YKL-4和PGF2α水平均较同组治疗前显著降低,同组治疗前后差异具有统计学意义(P<0.05);且治疗后,治疗组这些观察指标显著低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血清E2、FSH和LH表达水平均低于同组治疗前,同组治疗前后差异具有统计学意义(P<0.05);且治疗后,治疗组这些观察指标显著低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组IL-6、IL-18和TNF-α表达水平均降低,同组治疗前后差异具有统计学意义(P<0.05);且治疗后,治疗组这些观察指标显著低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论散结镇痛胶囊联合曲普瑞林治疗子宫内膜异位症疗效显著,可明显改善机体雌激素水平,并降低炎症反应,具有一定的临床推广应用价值。 展开更多
关键词 散结镇痛胶囊 曲普瑞林 子宫内膜异位症 乙醛脱氢酶 人类软骨糖蛋白-4 卵泡刺激素 黄体生成素
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