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糖蛋白结构质谱解析的样品前处理 被引量：4
1
作者 周玮 刘晓慧 +2 位作者 周新文 申华莉 杨芃原 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期623-627,共5页
基于高分辨率、高精度、高灵敏度及良好表现力的多级质谱,以标准糖蛋白辣根过氧化物酶(HRP)、核糖核酸酶B(RNaseB)为对象,探索了糖蛋白质谱分析前样品处理的技术流程。通过对糖蛋白样品前处理的各个步骤(包括蛋白变性方法(RNaseB适合化... 基于高分辨率、高精度、高灵敏度及良好表现力的多级质谱,以标准糖蛋白辣根过氧化物酶(HRP)、核糖核酸酶B(RNaseB)为对象,探索了糖蛋白质谱分析前样品处理的技术流程。通过对糖蛋白样品前处理的各个步骤(包括蛋白变性方法(RNaseB适合化学变性,HRP适合热变性)、酶的选择及条件(RNaseB适用内蛋白酶Lys-C酶解,HRP适用胰蛋白酶酶解,酶解时间控制在12～16h)、提肽液的组成(对于低丰度糖蛋白用50%乙腈-5%三氟乙酸提取)、基质的组成、点样方法("三明治"式))进行了优化,形成了简单易行、无需糖肽富集标记的糖蛋白溶液酶解-质谱分析和胶上分离酶解-质谱分析的技术路线,为实际样品体系中糖蛋白的结构解析提供了可行的方法。 展开更多
关键词 糖蛋白结构 质谱解析 样品前处理 条件优化
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单纯疱疹病毒膜融合蛋白相互作用的研究进展
2
作者 胡婧萍(综述) 刘存宝(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第1期92-98,共7页
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是一种普遍存在的含双链DNA的包膜病毒。单纯疱疹病毒-1型(HSV-1)感染人体可引起口唇炎、结膜炎及脑炎等疾病,HSV-2感染可导致多年龄段的生殖器疱疹,这两种病毒均可在人体建立终身潜伏感染。HSV... 单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是一种普遍存在的含双链DNA的包膜病毒。单纯疱疹病毒-1型(HSV-1)感染人体可引起口唇炎、结膜炎及脑炎等疾病,HSV-2感染可导致多年龄段的生殖器疱疹,这两种病毒均可在人体建立终身潜伏感染。HSV的多种膜蛋白相互作用触发膜融合是病毒进入宿主细胞的重要方式,本文通过分析糖蛋白的结构及其相互作用方式对由gD、gH、gL、gB 4种病毒糖蛋白组成的HSV保守的核心融合机制作一综述。由于目前全球尚无HSV疫苗获批上市,因此研究HSV与宿主细胞的作用方式对研发疫苗具有重要意义。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白结构 感染机制
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重组人促卵泡激素(rhFSH)肽图分析方法研究 被引量：4
3
作者 梁成罡 沈舒 杨化新 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期333-335,共3页
目的建立重组人促卵泡激素(rh-FSH)的标准肽图分析方法。方法通过超滤、透析、冷冻干燥法富集制备rh-FSH对照品。通过尿素变性、二硫苏糖醇(DTT)还原、碘乙酸酰基化制备供试品溶液。采用N型-糖苷酶F(PNGaseF)酶解去除rh-FSH糖侧链,经SDS... 目的建立重组人促卵泡激素(rh-FSH)的标准肽图分析方法。方法通过超滤、透析、冷冻干燥法富集制备rh-FSH对照品。通过尿素变性、二硫苏糖醇(DTT)还原、碘乙酸酰基化制备供试品溶液。采用N型-糖苷酶F(PNGaseF)酶解去除rh-FSH糖侧链,经SDS-PAGE验证切糖结果后,用胰蛋白酶水解,酶解所得肽段通过RP-HPLC分析,得到rh-FSH肽图。结果利用国外原研厂rh-FSH制剂富集制备的rh-FSH结构完整,可用作rh-FSH肽图分析的对照品。国产样品的肽图谱与对照品一致。结论建立的肽图分析方法可作rh-FSH产品的结构确证。 展开更多
关键词 重组人促卵泡激素 肽图 质量控制 糖蛋白结构分析
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鸭坦布苏病毒囊膜糖蛋白结构域3(ED3)单克隆抗体的制备及其中和活性分析 被引量：2
4
作者 张淼 吕炫 +13 位作者 张冲 阚莹 王若洁 于胜祖 卢奇 祝萌 方天 刘丹 朱英奇 曹守林 王蓓 殷冬冬 王晴 王桂军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期931-938,共8页
目的以纯化的重组鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜糖蛋白结构域3(ED3)蛋白作为免疫原,制备ED3蛋白的单克隆抗体并研究其中和活性。方法利用反转录PCR扩增DTMUV AH-F10株ED3基因,构建重组表达载体pET32a-ED3并转化至表达菌株Rosetta,诱导表达后... 目的以纯化的重组鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜糖蛋白结构域3(ED3)蛋白作为免疫原,制备ED3蛋白的单克隆抗体并研究其中和活性。方法利用反转录PCR扩增DTMUV AH-F10株ED3基因,构建重组表达载体pET32a-ED3并转化至表达菌株Rosetta,诱导表达后利用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。以纯化的目的蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行细胞融合,采取有限稀释法筛选杂交瘤细胞并大量制备单克隆抗体。利用Western blot法、间接免疫荧光法、ELISA及分型试剂盒对单克隆抗体进行鉴定并通过病毒中和试验检测抗体中和效价。结果成功表达DTMUV ED3蛋白,并制备3株ED3蛋白的鼠源单克隆抗体B9D10C7、B9D7B8G10、B9D7B8F11,其亚型分别为IgG1、IgG2a、IgG2b,腹水间接ELISA检测抗体效价均达到1∶51200,且能够识别DTMUV的E蛋白,具有一定的中和活性。结论获得3株特异性强、敏感性高的DTMUV ED3的单克隆抗体。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒(DTMUV) 囊膜糖蛋白结构域3(ED3) 原核表达 单克隆抗体
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抗磷脂综合征实验室检查项目的结果解读 被引量：12
5
作者 郭晗 乔蕊 《临床检验杂志》 CAS 2019年第9期652-656,共5页
抗磷脂抗体(狼疮抗凝物、抗心磷脂抗体和抗β2糖蛋白Ⅰ抗体)是诊断抗磷脂综合征的重要组成部分,但并非每个试验的阳性结果都具有相同的诊断价值,因此正确理解抗磷脂抗体试验阳性的本质内涵,对于APS的诊断、危险分层,进而指导个体化治疗... 抗磷脂抗体(狼疮抗凝物、抗心磷脂抗体和抗β2糖蛋白Ⅰ抗体)是诊断抗磷脂综合征的重要组成部分,但并非每个试验的阳性结果都具有相同的诊断价值,因此正确理解抗磷脂抗体试验阳性的本质内涵,对于APS的诊断、危险分层,进而指导个体化治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 抗磷脂综合征 抗磷脂抗体 狼疮抗凝物 抗心磷脂抗体 抗β2糖蛋白Ⅰ抗体 抗β2糖蛋白Ⅰ结构域Ⅰ抗体
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重组人β_2糖蛋白1第一结构域对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生ICAM-1、MCP-1的影响 被引量：2
6
作者 付嘉 谭岩 +7 位作者 方艳秋 徐立 李明辉 刘桂英 姜艳芳 段秀梅 刘力华 许淑芬 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期307-310,共4页
目的:探讨重组人β2糖蛋白1第一结构域(hrβ2GPⅠDⅠ)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生细胞间黏附分子1(ICAM1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)的影响。方法:应用hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理前后的APS患者血清分别与人... 目的:探讨重组人β2糖蛋白1第一结构域(hrβ2GPⅠDⅠ)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导人脐静脉内皮细胞产生细胞间黏附分子1(ICAM1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)的影响。方法:应用hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理前后的APS患者血清分别与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,细胞ELISA和RTPCR方法分析处理前后HUVEC表达ICAM1、MCP1的变化。结果:hrβ2GPⅠDⅠ二聚体处理后的APS患者血清较处理前相比,与其孵育的HUVEC表达ICAM1、MCP1在蛋白和mRNA水平均明显降低。结论:hβ2GPⅠDⅠ可中和APS患者血清中的大部分致病性抗β2GPⅠ抗体(anti-β2GPⅠ)。 展开更多
关键词 重组人β2 糖蛋白1第一结构域 抗磷脂抗体综合征 人脐静脉内皮细胞 ICAM-1 MCP-1
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西尼罗病毒糖蛋白第三结构域的原核表达及鉴定
7
作者 曹增国 李岭 +11 位作者 王化磊 金宏丽 郑学星 冯娜 李倩 赵国星 闫飞虎 赵永坤 王铁成 高玉伟 杨松涛 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期70-74,共5页
根据西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)序列设计1对特异性引物,用PCR反应扩增糖蛋白第三结构域(WNVEDⅢ)基因,将PCR产物克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,获得重组表达质粒,将该质粒转化入E.coli DH5α,命名为pG-EDⅢ,鉴定正确后转入transe... 根据西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)序列设计1对特异性引物,用PCR反应扩增糖蛋白第三结构域(WNVEDⅢ)基因,将PCR产物克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,获得重组表达质粒,将该质粒转化入E.coli DH5α,命名为pG-EDⅢ,鉴定正确后转入transetta表达菌中,经IPTG诱导后纯化重组蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot方法证实WNV-EDⅢ基因可在大肠杆菌中高效表达,小鼠免疫试验证明该原核表达蛋白有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 西尼罗病毒 糖蛋白第三结构域(WNVEDⅢ) 原核表达 免疫原性
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