红花黄色素对糖氧剥夺小胶质细胞炎性反应通路的影响 被引量：7

1

作者 杨兴旺 张辉 +10 位作者 丁智斌 李艳花 尉杰忠 刘春云 赵永飞 张琼 王青 宋丽娟 柴智 肖保国 马存根 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期2508-2511,共4页

目的:探讨红花黄色素(SY)对小鼠源永生细胞系小胶质细胞(BV2细胞)进行糖氧剥夺/复氧(OGD/R)处理后炎性反应的影响及其抗炎作用的机制。方法:BV2细胞进行常规培养和传代,细胞长到90%左右后建立OGD/R模型。实验分为正常组、OGD/R组、OGD/... 目的:探讨红花黄色素(SY)对小鼠源永生细胞系小胶质细胞(BV2细胞)进行糖氧剥夺/复氧(OGD/R)处理后炎性反应的影响及其抗炎作用的机制。方法:BV2细胞进行常规培养和传代,细胞长到90%左右后建立OGD/R模型。实验分为正常组、OGD/R组、OGD/R联合SY干预(OGD/R+SY)组。MTT法检测BV2细胞的活性以评价SY的细胞毒性作用,免疫印迹法检测炎性信号通路TLR4、p-NF-κB(p65)蛋白表达情况,ELISA检测BV2细胞白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的炎性因子释放。结果:BV2细胞经OGD/R处理后,TLR4、p-NF-κB(p65)蛋白表达升高,SY可以抑制其升高并下调IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的分泌。结论:OGD/R可能通过激活BV2细胞TLR4-NF-κB信号通路,引发炎性反应;SY可以通过抑制TLR4-NF-κB信号通路而发挥抗炎作用。 展开更多

关键词 红花黄色素 小胶质细胞 炎性反应 糖氧剥夺/复氧

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注射用丹参多酚酸对周细胞增殖与迁移和凋亡的影响 被引量：6

2

作者 刘文杰 袁庆 +4 位作者 张彤 殷孟兰 赵磊 贾壮壮 胡利民 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期27-30,共4页

目的探讨注射用丹参多酚酸对周细胞(C3H/10T1/2)增殖、迁移和凋亡的影响。方法C3H/10T1/2细胞采用氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型模拟缺血缺氧损伤。将细胞分为5组:正常组、模型组和低、中、高3个剂量的实验组(注射用丹参多酚酸的6.25,12.50,... 目的探讨注射用丹参多酚酸对周细胞(C3H/10T1/2)增殖、迁移和凋亡的影响。方法C3H/10T1/2细胞采用氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型模拟缺血缺氧损伤。将细胞分为5组:正常组、模型组和低、中、高3个剂量的实验组(注射用丹参多酚酸的6.25,12.50,25.00μg·mL^-1),正常组将培养液置换为新鲜的高糖DMEM,6 h后敷箱培养18 h;模型组将培养液置换为无糖DMEM,6 h后换为高糖培养基敷箱培养18 h;实验组是在模型组的基础上6 h后置换为含药的高糖培养基培养箱孵育18 h。细胞计数法检测周细胞活力(OD值);细胞划痕实验检测周细胞迁移;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2-相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果正常组、模型组和低、中、高3个剂量的实验组的细胞活力分别是(100.00±8.18)%,(80.49±6.79)%,(98.36±9.65)%,(98.92±9.05)%和(103.10±8.73)%;这5组的细胞迁移率分别是(44.32±8.78)%,(26.96±2.78)%,(38.24±1.74)%,(41.13±1.88)%和(49.92±2.18)%;这5组的Bcl-蛋白表达水平分别是100%,(41.95±9.86)%,(109.73±9.00)%,(91.14±9.49)%和(82.14±10.36)%;这5组的Bax蛋白表达水平分别是100%,(131.61±4.60)%,(67.26±0.99)%,(85.17±14.35)%和(93.39±14.00)%。上述指标:模型组与正常组比较,或低、中、高3个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论注射用丹参多酚酸可以促进OGD/R损伤周细胞的细胞增殖及细胞迁移能力,抑制细胞凋亡。 展开更多

关键词 注射用丹参多酚酸 糖氧剥夺/复氧 增殖 迁移 凋亡

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依托咪酯调节cAMP/PKA/CREB信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响

3

作者 钟祖凌 古学东 +1 位作者 易小波 张勇 《中国煤炭工业医学杂志》 2024年第1期107-112,共6页

目的探究依托咪酯(Eto)调节环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路对糖氧剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元损伤的影响。方法将海马神经元细胞HT22随机分为对照组、模型组、Eto低、中、高剂量组、抑制剂组。... 目的探究依托咪酯(Eto)调节环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)信号通路对糖氧剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元损伤的影响。方法将海马神经元细胞HT22随机分为对照组、模型组、Eto低、中、高剂量组、抑制剂组。MTT法计算细胞增殖抑制率,筛选Eto最佳干预浓度;EdU、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;ELISA法检测细胞中cAMP、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;全自动生化分析仪检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;Western blot方法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及cAMP/PKA/CREB信号通路蛋白表达。结果与对照组比较,模型组HT22细胞EdU阳性细胞率、cAMP、GSH-Px、PCNA、Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达显著降低,凋亡率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、Bax表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,Eto低、中、高剂量HT22细胞EdU阳性细胞率、cAMP、GSH-Px、PCNA、Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达显著升高,凋亡率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、Bax表达显著降低(P<0.05);cAMP/PKA/CREB信号通路抑制剂H-89可减弱Eto对神经细胞的保护作用(P<0.05)。结论Eto可能通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路,抑制氧化应激和炎症反应,促进细胞增殖,降低细胞凋亡,减弱OGD/R诱导的HT22细胞损伤。 展开更多

关键词 依托咪酯 cAMP/PKA/CREB信号通路 糖氧剥夺/复氧 神经元细胞

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miR-1298表达对PC-12细胞糖氧剥夺/复氧损伤的影响及其机制研究

4

作者 鞠加圣 陈建良 +3 位作者 杨云峰 彭智涛 钟远强 杨淬 《现代生物医学进展》 CAS 2022年第12期2212-2216,共5页

目的:通过体外细胞培养探讨mi R-1298对缺血缺氧性神经损伤的调节作用。方法:首先通过细胞活性检测和乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性法确定大鼠PC-12细胞糖氧剥夺/复氧(OGD/R)的造模效果,同时采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞mi R-1298... 目的:通过体外细胞培养探讨mi R-1298对缺血缺氧性神经损伤的调节作用。方法:首先通过细胞活性检测和乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性法确定大鼠PC-12细胞糖氧剥夺/复氧(OGD/R)的造模效果,同时采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞mi R-1298的表达差异。体外转染mi R-1298mimic、mimic NC、mi R-1298 inhibitor和inhibitor NC至大鼠PC-12细胞系,检测mimic、mimic NC、inhibitor、inhibitor NC的转染效率。经过OGD/R处理后将细胞分为Control组、OGD/R组、mimic组、mimicNC组、inhibitor组和inhibitorNC组。流式细胞术检测各组PC-12细胞凋亡的情况,免疫印迹试验(Western blot)检测各组PC-12细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)和Bcl-2相关的x基因(Bax)表达的情况。结果:PC12细胞经过OGD/R处理后,其细胞存活率与Control组比明显下降且LDH漏出率明显上升(均P<0.05);模型细胞中mi R-1298相对表达量明显低于Control组(P<0.05)。转染24小时后mimic组细胞中mi R-1298的相对表达量明显高于mimicNC组(P<0.05);mimic组细胞凋亡率低于mimicNC组,而inhibitor组细胞凋亡率高于inhibitor NC组(均P<0.05);mimic组的BCL-2表达量较mimicNC组升高,而BAX表达量下降,inhibitor组与inhibitorNC组相比,BCL-2表达量下降,而BAX表达量上升,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:mi R-1298通过抑制细胞凋亡减轻PC-12细胞OGD/R的损伤。 展开更多

关键词 mi R-1298 PC-12细胞 糖氧剥夺/复氧 凋亡 BCL-2 BAX

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基于PARP1信号通路研究芒柄花素对糖氧剥夺/复氧复糖神经元细胞损伤的影响 被引量：1

5

作者 郁丽 王湄 +2 位作者 王文秀 曹丽平 何前松 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第2期207-211,共5页

目的 基于PARP1信号通路研究芒柄花素对糖氧剥夺/复氧复糖神经元细胞损伤的影响,为揭示运用锦鸡儿异黄酮治疗脑缺血再灌注损伤提供理论依据。方法 建立小鼠神经元细胞(HT22)糖氧剥夺/复氧复糖(OGD/R)模型,通过Western blot检测糖氧剥夺... 目的 基于PARP1信号通路研究芒柄花素对糖氧剥夺/复氧复糖神经元细胞损伤的影响,为揭示运用锦鸡儿异黄酮治疗脑缺血再灌注损伤提供理论依据。方法 建立小鼠神经元细胞(HT22)糖氧剥夺/复氧复糖(OGD/R)模型,通过Western blot检测糖氧剥夺/复氧复糖不同时间HT22神经元细胞中PARP1和PARG表达情况,选择通路变化最佳时间点。分别使用芒柄花素、PARP1抑制剂(PJ34)和PARG抑制剂处理OGD/R后的HT22细胞,设置6个组,分别为对照组、对照组+芒柄花素组、OGD/R组、OGD/R+芒柄花素组、OGD/R+PJ34组、OGD/R+PARG抑制剂组。对照组HT22细胞正常培养,不进行OGD/R处理;采用免疫荧光、Western blot法检测各组细胞凋亡因子、相关蛋白表达水平。结果 在糖氧剥夺/复氧复糖3 h后,HT22细胞中PARP1通路激活最明显,在OGD/R 3 h条件下,芒柄花素、PJ34或PARG抑制剂处理后可提高E3泛素连接酶(Iduna),抑制PARP1、PARG通路蛋白表达,并降低AIF和P53表达,提高AKT蛋白磷酸化水平。结论 HT22小鼠神经元细胞在OGD/R条件下,芒柄花素可通过提高Iduna蛋白表达抑制PARP1/AIF/Akt信号通路减轻HT22小鼠神经元细胞损伤。 展开更多

关键词 芒柄花素 糖氧剥夺/复氧复糖 神经元损伤 PARP1信号通路

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柚皮素激活SHH-GLI1信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响

6

作者 单萍 张继龙 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期861-866,共6页

目的探究柚皮素(NAR)对氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)诱导神经元损伤的改善作用及机制。方法将大鼠皮层神经元分为正常组、OGD/R组、NAR组和NAR+环巴胺组,给予相应处理。CCK-8法测定神经元活性;试剂盒测定神经元活性氧(ROS)、8-羟脱氧鸟苷(O... 目的探究柚皮素(NAR)对氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)诱导神经元损伤的改善作用及机制。方法将大鼠皮层神经元分为正常组、OGD/R组、NAR组和NAR+环巴胺组,给予相应处理。CCK-8法测定神经元活性;试剂盒测定神经元活性氧(ROS)、8-羟脱氧鸟苷(OHdG)、丙二醛(MDA)水平;TUNEL染色观察神经元凋亡;Western印迹检测声波刺猬(SHH)-胶质瘤相关癌基因同源物(GLI)1通路及脑源性神经营养因子(BDNF)、c-AMP反应元件结合蛋白(CREB)水平;免疫荧光染色观察GLI1的核移位。结果CCK-8法分析显示,40 mg/L NAR为最佳作用浓度。相较于正常组,OGD/R组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量、SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于OGD/R组,NAR组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于NAR组,NAR+环巴胺组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显增加(P<0.05),BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1蛋白无明显变化(P>0.05)。结论NAR可以减轻OGD/R诱导的神经元氧化损伤,其作用机制与激活SHH-GLI1通路有关。 展开更多

关键词 柚皮素 糖氧剥夺/复氧复糖 神经元 声波刺猬(SHH)-胶质瘤相关癌基因同源物(GLI)1通路 凋亡

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一种改良原代海马神经元糖氧剥夺/复氧模型的建立

7

作者 史晋朝 马娜 +4 位作者 张倩 陈静 钟锦 周阳 李建国 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第4期471-474,480,共5页

目的 建立一种改良的原代海马神经元糖氧剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型。方法 从SD乳鼠脑组织中分离海马组织,制备海马神经元悬液,通过抑制胶质细胞数量,将海马神经元悬液分为无抑制、部分抑制和完全... 目的 建立一种改良的原代海马神经元糖氧剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型。方法 从SD乳鼠脑组织中分离海马组织,制备海马神经元悬液,通过抑制胶质细胞数量,将海马神经元悬液分为无抑制、部分抑制和完全抑制组,经镜下观察细胞形态,确定原代海马神经元的最佳培养条件。在此基础上,将海马神经元进行糖氧剥夺0.5、1和1.5 h,再分别复氧0、24、36和48 h,ELISA法检测培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)含量,CCK-8法测定神经元存活率,以LDH含量较高,对神经元存活率影响较小的条件为原代海马神经元OGD/R模型的最佳建模条件。结果 部分抑制胶质细胞时,神经元纯度较高,生长状态均一良好,胶质细胞与海马神经元数量比约1∶1,可保留胶质细胞与神经元间的结构和功能联系。与OGD 1 h组比较,OGD 1 h/R 36 h时,LDH含量显著升高(t=4.31,P <0.05),神经元存活率差异无统计学意义(t=1.99,P> 0.05)。结论 获得了胶质细胞与神经元数量约为1∶1的原代海马神经元,且生长状态良好。OGD 1 h/R 36 h条件下建立的OGD/R模型,神经元树突缩短,活力受损,存活率较高。本研究为后续相关疾病的发病机制深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 海马神经元 原代 糖氧剥夺/复氧模型 乳酸脱氢酶 细胞存活率

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补阳还五汤通过调节自噬促进OGD/R损伤大鼠NSCs增殖、分化能力 被引量：6

8

作者 秦彬喻 彭冬 +3 位作者 王逸雪 章时杰 王奇 关莉 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期9-18,共10页

目的:探讨补阳还五汤(BDT)对神经干细胞(NSCs)糖氧剥夺/复氧(OGD/R)损伤后增殖、分化的影响。方法:从SD大鼠海马区域分离培养NSCs,将细胞随机分为5组,分别为常氧组,模型组,BDT组,雷帕霉素(Rapa)组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合BDT... 目的:探讨补阳还五汤(BDT)对神经干细胞(NSCs)糖氧剥夺/复氧(OGD/R)损伤后增殖、分化的影响。方法:从SD大鼠海马区域分离培养NSCs,将细胞随机分为5组,分别为常氧组,模型组,BDT组,雷帕霉素(Rapa)组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合BDT组,常氧组和模型组使用20%空白血清,BDT组使用20%含药血清,Rapa剂量1μmol·L^(-1),3-MA剂量5 mmol·L^(-1)。除常氧组外,其余各组进行糖氧剥夺/复氧。光镜观察细胞形态的变化;免疫荧光检测巢蛋白(nestin)表达,鉴定NSCs;细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测NSCs的存活率;5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶苷(EdU)标记法检测NSCs增殖;Ad-mCherry-GFP-LC3B检测自噬活性;蛋白免疫印记法检测BDT对自噬相关蛋白的影响;免疫荧光法检测脑源性神经营养因子(BDNF),β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结果:与常氧组比较,糖氧剥夺/复氧会显著降低大鼠NSCs的细胞活力,与模型组比较,20%BDT含药血清明显改善了大鼠NSCs存活(P<0.01)。BDT可以诱导OGD后NSCs自噬小体的产生,与常氧组比较,微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ),Beclin-1表达升高(P<0.05,P<0.01),p62变化不明显;与模型组比较,BDT组LC3Ⅱ,Beclin-1明显上调(P<0.05,P<0.01),p62表达下调(P<0.01);Rapa组起到类似效果(P<0.05,P<0.01),3-MA组抑制了自噬的活性(P<0.01)。Ad-mCherry-GFP-LC3B结果显示,与常氧组比较,模型组荧光强度显著增加(P<0.01);与模型组比较,20%BDT含药血清和Rapa组显著增加自噬荧光强度(P<0.01),3-MA抑制了自噬活性(P<0.01)。免疫荧光结果显示,与常氧组比较,EdU,β-tubulinⅢ,GFAP和BDNF阳性细胞数显著减少(P<0.01);与模型组比较,20%BDT含药血清和Rapa起到了类似的保护和促进作用(P<0.05,P<0.01);3-MA组可以部分阻断BDT的神经保护和分化能力(P<0.05)。结论:BDT预保护可以通过上调自噬减少糖氧剥夺造成的大鼠NSCs损伤,促进增殖、分化。 展开更多

关键词 补阳还五汤 糖氧剥夺/复氧(OGD/R) 神经干细胞(NSCs) 自噬 神经再生

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微小RNA-146b-5p在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤中的作用与机制

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作者 黄松 汪雷 +3 位作者 周有东 胡火军 董元训 马金阳 《微循环学杂志》 2022年第1期35-40,共6页

目的:探究微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤(OGD/R)中的作用及机制。方法:建立小鼠小胶质细胞系EOC 13.31的OGD/R模型。将miR-146b-5p模拟物、miR-146b-5p抑制剂及相应的阴性对照,分别转染至EOC 13.31细胞中... 目的:探究微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤(OGD/R)中的作用及机制。方法:建立小鼠小胶质细胞系EOC 13.31的OGD/R模型。将miR-146b-5p模拟物、miR-146b-5p抑制剂及相应的阴性对照,分别转染至EOC 13.31细胞中,然后再分别进行OGD/R处理,分别命名为OGD/R+miR-146b-5p mimic组、OGD/R+miR-146b-5p inhibitor组、OGD/R+NC mimic组和OGD/R+NC inhibitor组,以常规培养的细胞为对照组(Control组),只行OGD/R处理的细胞为OGD/R组,48h后检测相关指标。实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-146b-5p表达;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测TRAF6蛋白表达;生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析miR-146b-5p和TRAF6之间的关系。结果:与Control组相比,OGD/R组中miR-146b-5p表达显著下调(P<0.01),TRAF6蛋白表达显著上调(P<0.01)。与OGD/R+NC mimic组比较,OGD/R+miR-146b-5p mimic组细胞存活率显著增高,凋亡率显著降低,MDA含量显著降低,SOD、CAT含量显著增高,TNF-α,IL-1β和IL-6含量显著降低,含TRAF6-WT的荧光素酶活性显著降低,TRAF6蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与OGD/R+NC inhibitor组比较,OGD/R+miR-146b-5p inhibitor组细胞的存活率显著降低,凋亡率显著升高,MDA含量显著增高,SOD、CAT含量显著降低,TNF-α,IL-1β和IL-6含量显著升高,TRAF6蛋白表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-146b-5p通过靶向TRAF6促进小胶质细胞OGD/R模型细胞存活,抑制细胞凋亡,减轻氧化应激和炎症反应。 展开更多

关键词 miR-146b-5p TRAF6 糖氧剥夺/复氧损伤 氧化应激 炎症反应

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14,15-环氧化二十碳三烯酸对糖氧剥夺/复氧诱导的BV2细胞炎症反应的影响

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作者 王娟 田浩 +1 位作者 谢敏杰 刘璐 《医药导报》 CAS 2017年第8期857-861,共5页

目的观察14,15-环氧化二十碳三烯酸(14,15-EET)对糖氧剥夺/复氧(OGD/R)诱导的BV2小鼠小胶质细胞炎症反应的影响。方法将BV2细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组及14,15-EET干预组。在14,15-EET的干预作用下,利用酶联免疫吸附测定(ELISA... 目的观察14,15-环氧化二十碳三烯酸(14,15-EET)对糖氧剥夺/复氧(OGD/R)诱导的BV2小鼠小胶质细胞炎症反应的影响。方法将BV2细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组及14,15-EET干预组。在14,15-EET的干预作用下,利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定BV2细胞OGD1h后复糖复氧0,3,6,12,24 h时细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;并用噻唑蓝(MTT)实验检测其各时间点细胞活性的改变。同样条件下,Transwell细胞迁移实验用来观察BV2细胞的迁移能力变化。结果与溶剂对照组比较,14,15-EET干预组BV2细胞培养液中分泌的炎症因子浓度显著减少;细胞活性明显降低;迁移能力显著减弱。以上结果均以OGD1h/R12h最具统计学意义。结论 14,15-EET对BV2细胞OGD再灌注损伤后的炎症反应具有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 14 15-环氧化二十碳三烯酸 BV2细胞 糖氧剥夺/复氧模型 炎症反应

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体外培养大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型的建立

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作者 殷成 秦新月 吴小慧 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期791-793,共3页

目的建立体外培养大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型。方法取体外培养7d的海马神经元,分为正常对照组和糖氧剥夺/复氧组。后者分别在糖氧剥夺0.5、1.0、1.5h再复糖复氧。常氧状态下检测各组复氧后1、5、24、48、72h培养液中的LD... 目的建立体外培养大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型。方法取体外培养7d的海马神经元,分为正常对照组和糖氧剥夺/复氧组。后者分别在糖氧剥夺0.5、1.0、1.5h再复糖复氧。常氧状态下检测各组复氧后1、5、24、48、72h培养液中的LDH活性,并观察神经元形态和轴突长度的变化。结果糖氧剥夺/复氧后的神经元折光性降低,胞体肿胀,并且轴突逐渐变短,同时LDH水平随时间延长增加。其中糖氧剥夺0.5h再复氧组效果最佳,其轴突缩短明显且神经元存活率较高。结论成功建立了体外培养SD大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型。 展开更多

关键词 糖氧剥夺/复氧模型 海马神经元 体外培养 轴突

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HT22细胞糖氧剥夺／复氧模型建立条件的优化研究

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作者 赵立希 王文竹 +2 位作者 张通 陈惠 刘丽旭 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期55-59,共5页

目的优化小鼠海马神经元HT22细胞糖氧剥夺／复氧模型的建立条件，探讨该模型建立的依据并测定相关指标。方法首先通过细胞计数法绘制HT22细胞的生长曲线并计算该细胞的倍增时间。其次，采用乳酸脱氢酶（LDH）细胞活性实验确认模型最佳... 目的优化小鼠海马神经元HT22细胞糖氧剥夺／复氧模型的建立条件，探讨该模型建立的依据并测定相关指标。方法首先通过细胞计数法绘制HT22细胞的生长曲线并计算该细胞的倍增时间。其次，采用乳酸脱氢酶（LDH）细胞活性实验确认模型最佳的糖氧剥夺时长和复氧时长。最后，用CCK-8细胞活性实验、细胞计数法、细胞形态学观察以及流式细胞仪凋亡检测方法进一步确定模型建立的条件。结果HT22细胞的倍增时间为17h 18min。最佳模型的糖氧剥夺时长为18h，复氧时间长为20h。CCK-8检测结果显示，糖氧剥夺18h／复氧20h（OGD18h／R20h）细胞吸光度值为0．334±0．138，对照组细胞吸光度值为0．756±0．026，差异有统计学意义（P〈0．05）。在形态学方面，OGD18h／R20h细胞明显发生皱缩。流式细胞仪凋亡检测结果显示，0GD18h／R20h细胞中凋亡晚期和坏死细胞分布比例为24．56％±5．76％．早期凋亡细胞2．63％±0．55％，对照组细胞中凋亡晚期和坏死细胞分布比例为8．13％±0．87％，早期凋亡细胞0.80％±0．10％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论HT22细胞糖氧剥夺／复氧模型的糖氧剥夺时长和复氧时长与细胞的倍增时间有关，糖氧剥夺18h后复氧20h可较好实现建模要求。 展开更多

关键词 糖氧剥夺/复氧模型 倍增时间 细胞死亡 细胞形态

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羟基红花黄色素A对糖氧剥夺/复糖复氧诱导的BV2细胞炎性反应的机制研究 被引量：6

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作者 苗珠月 魏汝恒 +5 位作者 刘可心 韩光远 黄建军 马东 杨德兵 宋丽娟 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1412-1416,共5页

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的小胶质细胞(MG)炎性反应作用机制的研究。方法构建BV2细胞OGD/R模型模拟脑缺血再灌注损伤,BV2细胞分为正常对照组(常规培养)、模型组(OGD/R模型)、HSYA药物干预组(OGD/R... 目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的小胶质细胞(MG)炎性反应作用机制的研究。方法构建BV2细胞OGD/R模型模拟脑缺血再灌注损伤,BV2细胞分为正常对照组(常规培养)、模型组(OGD/R模型)、HSYA药物干预组(OGD/R模型+25μmol·L^(-1)HSYA)、TREM2激动剂组(5μmol·L^(-1)Hsp60+OGD/R模型)、HSYA+TREM2激动剂组(5μmol·L^(-1)Hsp60+OGD/R模型+25μmol·L^(-1)HSYA)。用蛋白质印迹法(Western blot)检测髓样细胞触发受体2(TREM2)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况,用双重免疫荧光染色检测一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)荧光染色数量;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10的表达。结果正常对照组、模型组、HSYA药物干预组、TREM2激动剂组、HSYA+TREM2激动剂组IL-1β的含量分别为(48.10±2.42)、(76.16±5.03)、(55.88±3.35)、(91.15±3.43)和(69.47±7.04)pg·mL^(-1);TNF-α的含量分别为(307.42±37.63)、(479.63±34.13)、(377.87±36.16)、(671.55±33.47)和(496.85±47.68)pg·mL^(-1);TREM2蛋白表达分别为0.72±0.02、1.20±0.04、0.85±0.03、1.97±0.14和1.06±0.27;TLR4蛋白表达分别为0.32±0.01、0.43±0.02、0.37±0.03、0.62±0.02和0.39±0.04;iNOS蛋白免疫荧光染色数量分别为1.83±0.25、28.80±4.73、12.73±2.63、60.11±4.77和32.17±4.31;Arg1蛋白免疫荧光染色数量分别为1.91±0.19、21.90±2.62、66.70±3.96、12.43±2.11和20.50±4.49。上述指标,模型组与正常对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);HSYA药物干预组、TREM2激动剂组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);HSYA+TREM2激动剂组与TREM2激动剂组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论HSYA可调控TREM2的表达,进而抑制TLR4/NF-κB通路的激活以减轻神经炎性反应。 展开更多

关键词 羟基红花黄色素A 糖氧剥夺/复糖复氧 髓样细胞触发受体2

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羟基红花黄色素A对糖氧剥夺/复糖复氧后星形胶质细胞保护作用及其机制研究 被引量：6

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作者 韩光远 刘可心 +5 位作者 魏汝恒 苗珠月 马存根 肖保国 黄建军(指导) 宋丽娟(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期275-281,共7页

目的:探讨糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)状态下羟基红花黄色素A(HSYA)对星形胶质细胞(Ast)的保护作用及其机制。方法:分离小鼠原代Ast,实验设置为正常对照组、模型组和HSYA处理组。MTT、LDH检测Ast活力;免疫荧光检测GFAP蛋白表达;RT-PCR和We... 目的:探讨糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)状态下羟基红花黄色素A(HSYA)对星形胶质细胞(Ast)的保护作用及其机制。方法:分离小鼠原代Ast,实验设置为正常对照组、模型组和HSYA处理组。MTT、LDH检测Ast活力;免疫荧光检测GFAP蛋白表达;RT-PCR和Western blot检测C3、S100A10、PTX3极化指标;RT-PCR和ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10炎症因子表达;氧化检测试剂盒检测CAT、SOD、GSH-Px、RNS、ROS、MDA含量;Western blot检测GFAP、p-NF-κB(p65)、p-STAT3、Nrf2、HO-1蛋白表达。结果:Ast经OGD/R处理后被激活且形态发生改变;同时A1型Ast增加,TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子及RNS、ROS、MDA表达升高;A2型Ast降低,CAT、SOD、GSH-Px降低。HSYA可减轻OGD/R状态下Ast的形态异常,减少A1型Ast,同时减少炎症因子分泌以及RNS、ROS和MDA含量,降低p-NF-κB(p65)和p-STAT3表达;增加IL-10分泌和CAT、SOD、GSH-Px活性,增加Nrf2和HO-1蛋白表达。结论:HSYA可能通过p-NF-κB(p65)/p-STAT3通路降低OGD/R后Ast的炎症反应和激活Nrf2/HO-1通路来减轻Ast的氧化应激发挥保护作用。 展开更多

关键词 羟基红花黄色素A 糖氧剥夺/复糖复氧 星形胶质细胞

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13-MTD对氧反常诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的影响 被引量：7

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作者 余涓 胡桂芳 翁绳美 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期347-352,共6页

目的:研究13-甲基十四烷酸(13-methyltetradecanoic acid,13-MTD)对SH-SY5Y神经细胞氧反常的保护作用。方法:采用体外细胞培养建立SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/再复氧糖(OGD/R)模型,光镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率,AO/EB双重染色法观察... 目的:研究13-甲基十四烷酸(13-methyltetradecanoic acid,13-MTD)对SH-SY5Y神经细胞氧反常的保护作用。方法:采用体外细胞培养建立SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/再复氧糖(OGD/R)模型,光镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率,AO/EB双重染色法观察细胞凋亡,MTT法检测线粒体活性,Rhodamine-123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果:与正常对照组细胞相比,OGD/R模型组SH-SY5Y细胞出现明显病理损伤,细胞凋亡率显著增加(P<0.01),线粒体活性、细胞存活率、线粒体膜电位均显著下降(P<0.01);不同剂量的13-MTD可显著改善以上变化(P<0.01),且存在剂量依赖关系。结论:13-MTD对OGD/R诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤有保护作用,其可能对脑缺血再灌注损伤具有治疗作用。 展开更多

关键词 13-MTD SH-SY5Y 糖氧剥夺/再复糖氧 细胞存活率 凋亡 线粒体活性 线粒体膜电位

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富氢水通过降低小鼠神经细胞OGD/R后过度自噬减轻细胞损伤 被引量：1

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作者 李叶红 刘颖 +1 位作者 陶浚泠 李世欣 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期633-637,共5页

目的探讨富氢水是否通过影响小鼠海马神经元细胞株(HT22细胞)氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后自噬水平而发挥细胞损伤的保护作用。方法取体外培养的对数增长期小鼠HT22细胞,用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,寻找Na_(2)S_(2)O_(4... 目的探讨富氢水是否通过影响小鼠海马神经元细胞株(HT22细胞)氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后自噬水平而发挥细胞损伤的保护作用。方法取体外培养的对数增长期小鼠HT22细胞,用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,寻找Na_(2)S_(2)O_(4)的最佳制模浓度。将HT22细胞分为对照组(NC组)、OGD/R组(无糖培养基+10 mmol/L Na_(2)S_(2)O_(4)处理90 min后换正常培养基继续培养4 h)和富氢水处理组(HW组,无糖培养基+10 mmol/L Na_(2)S_(2)O_(4)处理90 min后换含富氢水培养基继续培养4 h)。采用倒置显微镜观察HT22细胞形态;CCK-8法检测细胞活性;透射电镜观察细胞超微结构;免疫荧光法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1的表达;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测细胞自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1的蛋白表达。结果倒置显微镜下显示:与NC组比较,OGD/R组细胞状态差,胞体肿胀,可见细胞裂解碎片,细胞活性明显降低〔(49.1±2.7)%比(100.0±9.7)%,P<0.01〕;与OGD/R组比较,HW组细胞状态改善,细胞活性明显升高〔(63.3±1.8)%比(49.1±2.7)%,P<0.01〕。透射电镜下显示:与NC组比较,OGD/R组细胞神经元核膜溶解,可见较多数量自噬溶酶体;与OGD/R组比较,HW组细胞神经元损伤减轻,自噬溶酶体数量明显减少。免疫荧光法检测结果显示:与NC组比较,OGD/R组细胞LC3和Beclin-1的表达明显增强;与OGD/R组比较,HW组LC3和Beclin-1的表达明显减弱。Western blotting检测结果显示:与NC组比较,OGD/R组细胞LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达均明显升高(LC3Ⅱ/Ⅰ:1.44±0.05比0.37±0.03,Beclin-1/β-actin:1.00±0.02比0.64±0.01,均P<0.01);与OGD/R组比较,HW组细胞LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达均明显降低(LC3Ⅱ/Ⅰ:0.54±0.02比1.44±0.05,Beclin-1/β-actin:0.83±0.07比1.00±0.02,均P<0.01)。结论富氢水对OGD/R致HT22细胞损伤有明显的保护作用,其机制可能与抑制自噬相关。 展开更多

关键词 糖氧剥夺再复糖复氧 HT22细胞 富氢水 自噬

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