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全氟辛酸对大鼠肝细胞BRL-3A脂质蓄积的影响
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作者 孙伟强 马新壮 +2 位作者 周勇兵 王力 刘辉 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期107-112,共6页
目的探讨全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)对大鼠肝细胞BRL-3A细胞活力及对转录因子核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和精氨酸琥珀酸合酶(arginosuccinate synthase 1,Ass1)表达的影响。方... 目的探讨全氟辛酸(perfluorooctanoic acid, PFOA)对大鼠肝细胞BRL-3A细胞活力及对转录因子核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和精氨酸琥珀酸合酶(arginosuccinate synthase 1,Ass1)表达的影响。方法培养大鼠肝细胞BRL-3A,分为对照组(0μmol/L PFOA)、低剂量组(6.25μmol/L PFOA)、中剂量组(25μmol/L PFOA)和高剂量组(100μmol/L PFOA)。分别于染毒48 h后,用噻唑蓝比色法检测细胞活力,自由基指示剂2′,7′-二氯氢化荧光素乙二酯检测活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)含量;试剂盒检测氧化应激相关酶活性;荧光免疫细胞化学、Western blot检测Nrf2、Ass1蛋白表达水平。结果与对照组比较,随着PFOA染毒浓度的增高,中、高剂量组的细胞活力有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);细胞内的ROS含量升高,中、高剂量组增高显著(P<0.05),平均荧光强度分别为(5417.66±161.09)和(5725.50±166.83)。与对照组相比,低、中剂量组细胞内甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量无明显变化,高剂量组TG、TC和MDA含量显著升高(P<0.05),分别为(0.21±0.05)mmol/L、(14.5±6.07)mmol/L和(1.23±0.33)nmol/mL。荧光免疫细胞化学检测法、Western blot结果显示,Nrf2蛋白的表达水平在高剂量组显著增高(P<0.05),Ass1蛋白的表达水平在低剂量组显著增高(P<0.05)。结论 PFOA染毒可以导致BRL-3A细胞内ROS的积累,Nrf2和Ass1在PFOA导致的大鼠肝脏细胞氧化损伤刺激下通过增加表达发挥清除ROS和氨解毒作用。 展开更多
关键词 全氟辛酸 核因子E2相关因子2 精氨酸琥珀酸合酶1 细胞活力 BRL-3A
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Atg7-siRNA通过调节精氨酸循环干扰食管癌ECA109细胞放疗敏感性 被引量：4
2
作者 张小红 周云 +2 位作者 杜秋莹 任慧欣 王超群 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2021年第4期28-34,共7页
目的探讨siRNA干扰自噬相关基因7(Atg7)后,对ECA109细胞放疗敏感性的影响以及对精氨酸循环相关通路的调控。方法食管癌ECA109细胞分为Ctrl组、siRNA组、Ctrl+R8Gy组(8Gy放射剂量处理的转染Atg7-Ctrl的ECA109细胞)和siRNA+R8Gy组(8Gy放... 目的探讨siRNA干扰自噬相关基因7(Atg7)后,对ECA109细胞放疗敏感性的影响以及对精氨酸循环相关通路的调控。方法食管癌ECA109细胞分为Ctrl组、siRNA组、Ctrl+R8Gy组(8Gy放射剂量处理的转染Atg7-Ctrl的ECA109细胞)和siRNA+R8Gy组(8Gy放射剂量处理的转染Atg7-siRNA的ECA109细胞);采用Western blotting法分别检测各组细胞Atg7、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、精氨酸琥珀酸合成酶1(ASS1)和精氨酸琥珀酸裂解酶(ASL)蛋白的表达。CCK8实验检测精氨酸对ECA109细胞的影响,绘制不同浓度(0、8、16、32、64、128 mmol/L)精氨酸处理下的细胞存活曲线,并计算其IC50和IC10,将IC10作为后续实验的作用浓度。采用精氨酸和siRNA分别处理细胞,对细胞进行8Gy照射,24 h后通过计算细胞数量评估细胞的死亡率。结果无论放疗前后,siRNA干扰均可使细胞的Atg7蛋白下调(P<0.01)。与Ctrl组相比,Ctrl+R8Gy组自噬相关蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ上调(P<0.01);与Ctrl+R8Gy组相比,siRNA+R8Gy组自噬相关蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ下调(P<0.01)。与Ctrl+R8Gy组相比,siRNA+R8Gy组精氨酸循环相关通路蛋白ASS1和ASL上调(P<0.01)。精氨酸对ECA109细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。放疗后24 h,细胞死亡量分析显示,siRNA干扰可以提高细胞死亡率(F=73.59,P<0.001),添加精氨酸可以提高细胞死亡率(F=158.72,P<0.001),siRNA和精氨酸同时作用时细胞死亡率最高(F=7.88,P=0.02)。结论放疗可以诱导ECA109细胞发生自噬,Atg7敲低可以拮抗放疗诱导的自噬,提高放疗诱导的ECA109细胞死亡率,增加ECA109细胞对放疗的敏感性。Atg7敲低可以调控ECA109细胞放疗后精氨酸循环相关通路蛋白,提高精氨酸浓度增加ECA109细胞的放射敏感性。 展开更多
关键词 siRNA干扰自噬相关基因7 精氨酸琥珀酸合成酶1 精氨酸琥珀酸裂解酶 食管癌 精氨酸 放疗敏感性
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