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大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究
1
作者
全胜
夏肖萍
胡伟航
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期107-110,共4页
目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位（heat-labile enterotoxin subunitA，LTA）基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统，探讨重组LTKA63（rLTKA63）粘膜免疫佐剂活性的机制。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA...
目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位（heat-labile enterotoxin subunitA，LTA）基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统，探讨重组LTKA63（rLTKA63）粘膜免疫佐剂活性的机制。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA基因，利用定位突变技术构建LTKA63突变体，T-A克隆后测序。采用无His-tag的原核表达载体pET-15b。构建LTKA63原核表达系统，通过SDS-PAGE鉴定表达产物。采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径。结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA基因条带。与报道的LTA序列比较，所克隆的LTA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．03％～99．61％和98．33％～99．22％。LTA基因定位突变后获得序列正确的LT-KA63突变体。rLTKA63表达量占细菌总蛋白的15％左右。rLTKA63作用后Th1和Th2细胞较阴性对照组分别增加21．9％和36．2％。结论本文成功地构建了LTKA63原核表达系统，所表达的rLTKA能同时激活Th1和Th2细胞。
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关键词
大肠杆菌
LTKA63基因
克隆/表达载体构建
重组蛋白/表达
粘膜免疫
/
佐剂
活性
TH1/TH2
下载PDF
职称材料
LTB的表达及其粘膜免疫佐剂活性分析
被引量：
3
2
作者
张国广
罗茂春
+1 位作者
董艳美
陈亮
《厦门大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期918-922,共5页
粘膜免疫是预防一些通过吸附粘膜组织侵入机体病原的很好措施,但粘膜免疫通常需要粘膜免疫佐剂,大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素的B亚基具有很好的粘膜免疫佐剂活性.本研究从大肠杆菌195菌株中扩增出LT(heat-labile enterotoxin...
粘膜免疫是预防一些通过吸附粘膜组织侵入机体病原的很好措施,但粘膜免疫通常需要粘膜免疫佐剂,大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素的B亚基具有很好的粘膜免疫佐剂活性.本研究从大肠杆菌195菌株中扩增出LT(heat-labile enterotoxin)基因,测序后将其B亚基基因与pET32a连接构建了重组质粒pET32a-LTB,SDS-PAGE显示LTB(heat-labile enterotoxin B subunit)在原核细胞中得到表达,Western blotting和人神经节苷脂结合酶联免疫吸附试验(GM1-ELISA)结果表明,重组LTB具有抗原性和GM1结合活性.将其与禽流感M2e表位融合蛋白M2eHBc+混合通过滴鼻途径免疫小鼠,抗体检测结果表明,所表达的LTB能很好地提高共免疫抗原的粘膜和系统免疫应答.
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关键词
LTB表达
GM1-ELISA
粘膜免疫
佐剂
活性
下载PDF
职称材料
题名
大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究
1
作者
全胜
夏肖萍
胡伟航
机构
浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠疾病实验室在读研究生
浙江大学附属邵逸夫医院检验科
杭州市第一人民医院急诊科
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期107-110,共4页
文摘
目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位（heat-labile enterotoxin subunitA，LTA）基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统，探讨重组LTKA63（rLTKA63）粘膜免疫佐剂活性的机制。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA基因，利用定位突变技术构建LTKA63突变体，T-A克隆后测序。采用无His-tag的原核表达载体pET-15b。构建LTKA63原核表达系统，通过SDS-PAGE鉴定表达产物。采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径。结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA基因条带。与报道的LTA序列比较，所克隆的LTA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．03％～99．61％和98．33％～99．22％。LTA基因定位突变后获得序列正确的LT-KA63突变体。rLTKA63表达量占细菌总蛋白的15％左右。rLTKA63作用后Th1和Th2细胞较阴性对照组分别增加21．9％和36．2％。结论本文成功地构建了LTKA63原核表达系统，所表达的rLTKA能同时激活Th1和Th2细胞。
关键词
大肠杆菌
LTKA63基因
克隆/表达载体构建
重组蛋白/表达
粘膜免疫
/
佐剂
活性
TH1/TH2
Keywords
Escherichia coli
LTKA63 gene
cloning/expression vector construction
recombinant protein / expression
Mucosal immunity/ Adjuvant activity
Th1/Th2
分类号
R378.2 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
LTB的表达及其粘膜免疫佐剂活性分析
被引量：
3
2
作者
张国广
罗茂春
董艳美
陈亮
机构
厦门大学生命科学学院
漳州师范学院生物科学与技术系
龙岩学院生命科学学院
出处
《厦门大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期918-922,共5页
基金
福建省科技厅重点项目(2009N0051)
福建省自然科学基金项目(2010J01240)
厦门市科技计划项目(3502Z20103007)
文摘
粘膜免疫是预防一些通过吸附粘膜组织侵入机体病原的很好措施,但粘膜免疫通常需要粘膜免疫佐剂,大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素的B亚基具有很好的粘膜免疫佐剂活性.本研究从大肠杆菌195菌株中扩增出LT(heat-labile enterotoxin)基因,测序后将其B亚基基因与pET32a连接构建了重组质粒pET32a-LTB,SDS-PAGE显示LTB(heat-labile enterotoxin B subunit)在原核细胞中得到表达,Western blotting和人神经节苷脂结合酶联免疫吸附试验(GM1-ELISA)结果表明,重组LTB具有抗原性和GM1结合活性.将其与禽流感M2e表位融合蛋白M2eHBc+混合通过滴鼻途径免疫小鼠,抗体检测结果表明,所表达的LTB能很好地提高共免疫抗原的粘膜和系统免疫应答.
关键词
LTB表达
GM1-ELISA
粘膜免疫
佐剂
活性
Keywords
. LTB expression
GM1-ELISA
mucosal immunoadj uvant activity
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究
全胜
夏肖萍
胡伟航
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
下载PDF
职称材料
2
LTB的表达及其粘膜免疫佐剂活性分析
张国广
罗茂春
董艳美
陈亮
《厦门大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
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职称材料
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