芡叶类黄酮-3'-羟化酶(F3'H)基因表达分析及功能验证 被引量：4

1

作者 景宗慧 尹梦娇 +4 位作者 王前 鲍锞 周佩娜 刘潺潺 吴啟南 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第18期4712-4720,共9页

芡叶中含有丰富的花青素,花青素合成是类黄酮合成路径重要分支之一,其中类黄酮-3'-羟化酶(F3'H)可参与生成花青素合成所需的重要的中间产物。该研究依据芡Euryale ferox叶转录组数据,克隆获得芡叶F3'H的cDNA序列,命名为EfF3... 芡叶中含有丰富的花青素,花青素合成是类黄酮合成路径重要分支之一,其中类黄酮-3'-羟化酶(F3'H)可参与生成花青素合成所需的重要的中间产物。该研究依据芡Euryale ferox叶转录组数据,克隆获得芡叶F3'H的cDNA序列,命名为EfF3'H。通过生物信息学与qRT-PCR技术检测EfF3'H在芡的不同栽培种及不同时期基因表达,进而分析该基因与黄酮类物质合成的相关性,并通过真核表达系统验证了EfF3'H的生物学功能。结果显示,EfF3'H包含长1566 bp开放阅读框,编码521个氨基酸,属亲水性跨膜蛋白,预测定位于细胞质膜,结合保守结构域预测分析,该蛋白属于细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)家族;qRT-PCR结果表明,EfF3'H表达在不同栽培种之间具有显著差异性,且其表达水平与芡叶中的相关类黄酮物质含量呈高度相关性。真核表达研究表明,EfF3'H蛋白具有将山柰酚转化为槲皮素的生物活性。该研究首次克隆了芡中EfF3'H的cDNA序列,并验证了其生物功能,为进一步开发芡叶资源提供科学依据,同时为进一步解析药用植物中黄酮类物质的生物合成途径奠定了基础。 展开更多

关键词 芡 类黄酮-3'-羟化酶 QRT-PCR 真核表达 槲皮素

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植物F3'H基因的序列与进化分析 被引量：4

2

作者 胡利宗 张佳慧 +2 位作者 王秋霞 李俐俐 王红星 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期41-49,共9页

类黄酮-3＇-羟化酶（F3＇H）催化二氢堪非醇生成二氢栎皮黄酮,是花青素合成途径关键酶之一,主要参与决定植物花色、种皮和茎叶着色等性状。利用生物信息学手段对植物类黄酮-3＇-羟化酶基因的序列和进化特征进行系统性分析。基因结构分... 类黄酮-3＇-羟化酶（F3＇H）催化二氢堪非醇生成二氢栎皮黄酮,是花青素合成途径关键酶之一,主要参与决定植物花色、种皮和茎叶着色等性状。利用生物信息学手段对植物类黄酮-3＇-羟化酶基因的序列和进化特征进行系统性分析。基因结构分析表明,植物F3＇H基因外显子数变异范围为2~7,单子叶植物包括2个外显子,绝大多数双子叶与陆生低等植物具有3或4个外显子。蛋白序列分析显示,植物F3＇H蛋白具有13个保守基序,其中10个保守基序与结构域p450相互重叠,其他3个保守基序具有种属特异性。进化分析表明,植物F3＇H蛋白具有4个类群,在GroupⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ亚群中分别检测到4、6、1、7个正选择位点（P〉0.05）,这些位点主要分布在F3＇H蛋白不规则卷曲区,说明植物F3＇H蛋白主要受控于纯净选择。利用滑动窗口方法发现,5对直系同源基因受到负选择作用,但4对旁系同源基因受到正选择作用,发生适应性进化。试验结果可为进一步研究植物F3＇H基因功能及其关键氨基酸位点提供参考。 展开更多

关键词 植物 花青素 类黄酮-3'-羟化酶 序列特征 进化

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大叶蛇葡萄类黄酮-3'-羟化酶基因(F3'H)的克隆及生物信息学分析 被引量：2

3

作者 李永华 蒲天珍 +3 位作者 周佩娜 方佳慧 张秀桥 龚玲 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第18期5984-5993,共10页

类黄酮-3’-羟化酶(F3’H)是黄酮化合物生物合成过程中的关键酶之一,本研究从大叶蛇葡萄转录组数据库中筛选出类黄酮-3’-羟化酶基因(F3’H),利用RT-PCR等技术克隆了其全长序列,并分析F3’H基因编码蛋白的理化性质和结构特征。结果表明... 类黄酮-3’-羟化酶(F3’H)是黄酮化合物生物合成过程中的关键酶之一,本研究从大叶蛇葡萄转录组数据库中筛选出类黄酮-3’-羟化酶基因(F3’H),利用RT-PCR等技术克隆了其全长序列,并分析F3’H基因编码蛋白的理化性质和结构特征。结果表明,该序列全长为1718 bp,开放阅读框(ORF)长度为1530 bp,相对分子质量为55.89 kD,编码509个氨基酸,等电点为7.3,分子式为C2(513)H3974N696O705S21,不稳定指数为38.26,为稳定蛋白;脂肪族指数为96.42,总平均疏水性为-0.004,为亲水性蛋白;具有多个磷酸化位点,有信号肽,存在一个跨膜区,亚细胞定位于内质网膜,二级结构以α-螺旋为主。系统进化分析和多重序列比对表明该序列与藤茶的亲缘关系最近。密码子偏性分析表明该基因以G/C结尾的密码子使用频率较高,最适合该基因的异源表达宿主是大肠杆菌。本研究结果为进一步研究大叶蛇葡萄F3’H蛋白功能,以及揭示该植物中具生物活性的黄酮类成分的生物合成机制提供了一定的基础。 展开更多

关键词 大叶蛇葡萄(Ampelopsis megalophylla) 类黄酮-3’-羟化酶基因(F3’H) 基因克隆 生物信息学分析

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植物类黄酮3’-羟化酶(F3’H)基因的研究进展 被引量：27

4

作者 侯杰 佟玲 +2 位作者 崔国新 许志茹 李玉花 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期641-647,共7页

本文介绍了植物F3’H基因的克隆、序列分析、表达分析、系统进化及转录调控的研究进展。

关键词 花青素 类黄酮3’.羟化酶基因 表达特性 转录调控

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山葡萄中类黄酮3’-羟化酶基因(F3’H)cDNA的克隆和分析 被引量：18

5

作者 刘海峰 杨成君 +2 位作者 赵权 李波 王军 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1186-1190,共5页

用RT-PCR和SMART RACE技术克隆了山葡萄F3’H基因的全长cDNA序列。其GenBank登陆号为FJ645766,F3’HcDNA全长1844bp,包括开放阅读框1530bp,编码509个氨基酸,该基因表达产物相对分子质量为56.14kDa,等电点为8.24,是不稳定蛋白。该基因属... 用RT-PCR和SMART RACE技术克隆了山葡萄F3’H基因的全长cDNA序列。其GenBank登陆号为FJ645766,F3’HcDNA全长1844bp,包括开放阅读框1530bp,编码509个氨基酸,该基因表达产物相对分子质量为56.14kDa,等电点为8.24,是不稳定蛋白。该基因属于P450超基因家族,不包含信号肽。氨基酸序列与欧亚种葡萄(AJ8803537)、矢车菊(FJ753550)、金鱼草(DQ272592)、大豆(AB061212)和玉米(EU966228)等植物的F3’H氨基酸序列的同源性系数分别为98%、77%、72%、74%和57%。 展开更多

关键词 山葡萄 CDNA克隆 类黄酮3’-羟化酶

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银杏类黄酮3’羟化酶基因的克隆与表达分析 被引量：15

6

作者 李琳玲 程华 +1 位作者 陈小玲 程水源 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期643-654,共12页

利用简并PCR和RACE技术从银杏叶片中分离到黄酮3’羟化酶基因Gb F3’H的c DNA全长序列(Gen Bank No.:KP056747)。其全长为2 144 bp,含有一个1 671 bp的开放式阅读框(ORF),编码556个氨基酸序列,预测氨基酸大小为63.47 k D,等电点为7.71... 利用简并PCR和RACE技术从银杏叶片中分离到黄酮3’羟化酶基因Gb F3’H的c DNA全长序列(Gen Bank No.:KP056747)。其全长为2 144 bp,含有一个1 671 bp的开放式阅读框(ORF),编码556个氨基酸序列,预测氨基酸大小为63.47 k D,等电点为7.71。蛋白质同源序列分析表明,Gb F3’H与其他物种F3’H同源性较低,而与菊苣(Cichorium intybus)同源性最高,为56.3%。同源建模分析显示Gb F3’H与P450家族蛋白的三维结构及活性位点高度相似,最终定位于微粒体膜上。进化树分析结果显示Gb F3’H与其他植物分化较早,序列差异较大。组织表达分析显示,Gb F3’H在银杏不同组织中都有表达,其中雄蕊表达水平最高,其次为成熟叶。诱导表达分析显示,Gb F3’H转录水平受UV-B、6-BA、SA、ABA和IAA影响诱导上调,而伤害处理对其表达量无明显影响。Gb F3’H诱导表达模式与调控银杏黄酮含量变化呈正相关,其上游调控序列存在与黄酮调控相关的顺式元件,意味着Gb F3’H可能参与了银杏黄酮类物质的合成代谢,并与黄酮类物质向花青素合成分流有关。 展开更多

关键词 银杏 类黄酮3’羟化酶 黄酮 表达调控

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芜菁的类黄酮3'羟化酶基因克隆和UV-A诱导表达特性 被引量：10

7

作者 许志茹 崔国新 +2 位作者 李春雷 孙燕 李玉花 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期931-935,共5页

用UV-A处理‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁块根24h后提取总RNA,以RT-PCR方法分别克隆到BrF3'H1和BrF3'H2基因。BrF3'H1和BrF3'H2的开放读码框为1536bp,均编码511个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrF3'H1和BrF3'H2与... 用UV-A处理‘津田’芜菁和‘赤丸’芜菁块根24h后提取总RNA,以RT-PCR方法分别克隆到BrF3'H1和BrF3'H2基因。BrF3'H1和BrF3'H2的开放读码框为1536bp,均编码511个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrF3'H1和BrF3'H2与甘蓝型油菜F3'H的同源性达99%,在第45～476的肽段含有细胞色素P450家族基因的结构域。BrF3'H1和BrF3'H2基因有高度同源性,核苷酸序列的17个位点处有差异,推导的氨基酸序列在5个位点处有差异。Northern杂交结果显示,UV-A可以诱导BrF3'H1表达,基因的表达量与UV-A处理时间呈相关,UV-A不能诱导BrF3'H2基因表达。 展开更多

关键词 芜菁 类黄酮3’羟化酶基因 基因克隆 序列分析 基因表达

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飞机草类黄酮3’-羟化酶基因(CoF3’H)的克隆及其在烟草中的表达 被引量：6

8

作者 何海旺 潘华清 +1 位作者 张铙丹 何龙飞 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期479-486,共8页

利用RT-PCR和RACE技术从飞机草中克隆得到1628 bp的类黄酮3’-羟化酶c DNA的全长序列,命名为Co F3’H,Gen Bank登录号为HQ268505.1。Co F3’H基因的编码区长度为1524 bp,编码507个氨基酸。氨基酸序列含P450蛋白结构域和半胱氨酸亚铁血... 利用RT-PCR和RACE技术从飞机草中克隆得到1628 bp的类黄酮3’-羟化酶c DNA的全长序列,命名为Co F3’H,Gen Bank登录号为HQ268505.1。Co F3’H基因的编码区长度为1524 bp,编码507个氨基酸。氨基酸序列含P450蛋白结构域和半胱氨酸亚铁血红素结合域保守区(F××G×R×C×G),利用DNAMAN软件比对显示,Co F3’H与其他植物的F3’H蛋白的同源性很高。通过农杆菌介导成功地将Co F3’H基因导入烟草,T2代的转Co F3’H基因烟草植株的黄酮含量显著高于野生型。说明Co F3’H在黄酮的生物合成中起重要作用,为后续研究飞机草的化感作用及综合利用提供基础。 展开更多

关键词 飞机草 类黄酮3’-羟化酶 克隆 表达

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一个类黄酮3'-羟化酶参与多星韭花色素生物合成的功能解析

9

作者 孔德静 梁进丽 +4 位作者 宫秋玲 俞沙沙 梁琳 孙威 鞠志刚 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2024年第4期581-587,共7页

类黄酮3'-羟化酶(F3'H)在花色素苷生物合成过程中起关键作用。明确多星韭F3'H在花色素苷生物合成中的功能,将为多星韭花色形成及改良研究提供基因资源。基于转录组数据从多星韭花朵中克隆获得AwF3'H,并对其进行生物信... 类黄酮3'-羟化酶(F3'H)在花色素苷生物合成过程中起关键作用。明确多星韭F3'H在花色素苷生物合成中的功能,将为多星韭花色形成及改良研究提供基因资源。基于转录组数据从多星韭花朵中克隆获得AwF3'H,并对其进行生物信息学分析,利用Real time PCR对AwF3'H1的表达模式进行分析,并利用蘸花法将AwF3'H转入拟南芥中,同时对转基因植株进行表型观察及花色素苷检测分析。结果表明,Aw F3'H的ORF全长为1545 bp,编码514个氨基酸,属于细胞色素P450家族成员,与洋葱AcF3'H的亲缘关系最近;在所检测组织均有表达,但在雄蕊中表达最高,根中表达最低;与野生型拟南芥相比,转AwF3'H拟南芥T2代幼苗子叶及下胚轴颜色明显加深,矢车菊素与天竺葵素类花色苷积累量显著增加。表明AwF3'H具有类黄酮3'-羟化酶的功能。 展开更多

关键词 多星韭 基因功能验证 类黄酮3'-羟化酶 表达分析 花青素

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橡胶树F3’H基因克隆及其功能分析 被引量：6

10

作者 范月婷 辛士超 +4 位作者 NAYCHI Koko 畅娇 黄天带 黄华孙 华玉伟 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2020年第9期1733-1740,共8页

从橡胶树叶片转录组数据库中调取花青素合成途径中的关键酶类黄酮3’-羟化酶(F3’H)基因序列信息,通过RT-PCR扩增得到2个橡胶树F3’H基因,分别命名为HbF3’H1和HbF3’H2。通过荧光定量PCR分析发现,只有HbF3’H1基因在不同发育时期的橡... 从橡胶树叶片转录组数据库中调取花青素合成途径中的关键酶类黄酮3’-羟化酶(F3’H)基因序列信息,通过RT-PCR扩增得到2个橡胶树F3’H基因,分别命名为HbF3’H1和HbF3’H2。通过荧光定量PCR分析发现,只有HbF3’H1基因在不同发育时期的橡胶树叶片和嫩茎中的表达水平与花青素的合成积累趋势完全一致。HbF3’H1所编码的蛋白属于P450超家族,具有保守的F3’H结构域,而且HbF3’H1基因的启动子中包含多种环境效应元件,说明HbF3’H1基因的表达受环境因子调控。通过农杆菌转化烟草发现,过表达HbF3’H1基因的烟草花瓣大量累积花青素,其颜色较非转基因烟草显著加深,同时,荧光定量PCR发现HbF3’H1表达水平与转基因烟草花瓣颜色呈正相关,说明HbF3’H1基因表达促进花青素的累积。本研究为阐明橡胶树花青素代谢途径奠定基础。 展开更多

关键词 橡胶树 花青素 类黄酮3’-羟化酶 转基因烟草

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过量表达紫茎泽兰类黄酮3’-羟化酶基因对转基因烟草POD、PAL活性的影响 被引量：6

11

作者 张松焕 李春奇 +2 位作者 郭惠明 裴熙祥 程红梅 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第3期98-101,共4页

紫茎泽兰具有强烈的化感作用,可抑制周围其他植物生长。类黄酮3’-羟化酶(F3’H)属于细胞色素P450(CYP)单加氧酶,具有催化多种依赖NADPH或NADH的底物氧化反应的功能,在植物化感作用中行使一定的功能。利用转F3’H基因的烟草为实验材料,... 紫茎泽兰具有强烈的化感作用,可抑制周围其他植物生长。类黄酮3’-羟化酶(F3’H)属于细胞色素P450(CYP)单加氧酶,具有催化多种依赖NADPH或NADH的底物氧化反应的功能,在植物化感作用中行使一定的功能。利用转F3’H基因的烟草为实验材料,分别测定转F3’H基因植株、转pB I121空载体植株和野生型植株的过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,结果表明,转F3’H基因植株的POD活性分别是野生型植株和转空载体植株的3.8倍和2.0倍,而PAL活性则相应为4.0倍和2.0倍。由此推断F3’H基因在抵御伤害方面具有重要作用。 展开更多

关键词 类黄酮3’-羟化酶 过表达 POD PAL

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苦荞类黄酮3′-羟化酶基因的克隆及其冷胁迫下的组织表达 被引量：5

12

作者 李双江 朱冬寅 +3 位作者 秦东 李成磊 陈惠 吴琦 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1300-1306,共7页

目的克隆苦荞Fagopyrum tataricum类黄酮3′-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3′H)基因全长cDNA序列,对该基因进行序列分析和原核表达,以及冷胁迫条件下该基因表达量和花青素定量测定。方法采用同源克隆和RACE技术从苦荞花蕾中克隆... 目的克隆苦荞Fagopyrum tataricum类黄酮3′-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3′H)基因全长cDNA序列,对该基因进行序列分析和原核表达,以及冷胁迫条件下该基因表达量和花青素定量测定。方法采用同源克隆和RACE技术从苦荞花蕾中克隆苦荞F3′H(FtF3′H);构建FtF3′H原核表达载体pET-30b(+)-FtF3′H,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达;采用半定量RT-PCR分析FtF3′H基因在冷胁迫下芽期苦荞不同组织的表达量,并采用分光光度计法测量花青素量。结果苦荞FtF3′H基因含有一个1 470 bp的ORF,编码489个氨基酸,编码蛋白属于细胞色素P450家族;SDS-PAGE分析表明,目的蛋白相对分子质量54 000;芽期苦荞冷胁迫处理前后子叶和胚轴中FtF3′H表达量以及花青素量的变化分析表明,冷胁迫显著增强了FtF3′H的表达和花青素的积累(P<0.05)。结论成功克隆FtF3′H基因,并实现了FtF3′H基因的异源表达;芽期苦荞在冷胁迫下,可能通过提高FtF3′H基因表达量进而促进花青素的合成,参与其抗逆生理过程。 展开更多

关键词 苦荞 类黄酮3’-羟化酶 基因克隆 原核表达 冷胁迫 花青素

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水芹类黄酮3＇-羟化酶基因的克隆与表达特性分析 被引量：4

13

作者 康美玲 冯凯 +3 位作者 段希 王柯文 王枫 熊爱生 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期282-290,共9页

类黄酮3'-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3'H)属于细胞色素P450家族(cytochromeP450,CYP450),在植物主要成色物质花青素的合成中发挥重要作用。本实验以‘八卦洲水芹’以及紫色叶柄突变型水芹为实验材料,利用RT-PCR方法,... 类黄酮3'-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3'H)属于细胞色素P450家族(cytochromeP450,CYP450),在植物主要成色物质花青素的合成中发挥重要作用。本实验以‘八卦洲水芹’以及紫色叶柄突变型水芹为实验材料,利用RT-PCR方法,从紫色叶柄突变型水芹的cDNA中克隆得到编码类黄酮3'-羟化酶的基因,命名为OjF3'H1。序列分析显示,OjF3'H1基因全长1575bp,共编码524个氨基酸。OjF3'H1蛋白相对分子质量为58292.59,理论等电点为6.77。系统进化分析显示,OjF3'H1蛋白具有高度保守性,与同属伞形科的胡萝卜F3'H1进化关系最近。OjF3'H1编码的蛋白属于疏水蛋白,无序化比例为5.53%,空间结构主要由α-螺旋和β-折叠组成。实时定量PCR分析显示,OjF3'H1在不同品种水芹茎中相对表达量有明显差异,紫色叶柄突变型水芹中OjF3'H1的表达量明显比‘八卦洲水芹’中高。 展开更多

关键词 水芹 类黄酮3'-羟化酶基因 克隆 叶柄 表达分析

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芜菁类黄酮3'-羟化酶基因的功能鉴定及启动子初步分析 被引量：4

14

作者 许志茹 马静 +2 位作者 崔国新 刘通 刘关君 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期572-582,共11页

类黄酮3'-羟化酶(Flavonoid 3'-hydroxylase,F3'H)是细胞色素P450单加氧酶,在花青素合成途径中催化二氢山奈酚生成二氢槲皮素,进而形成矢车菊色素。利用津田芜菁Br F3'H1和赤丸芜菁Br F3'H2基因构建过量表达载体后... 类黄酮3'-羟化酶(Flavonoid 3'-hydroxylase,F3'H)是细胞色素P450单加氧酶,在花青素合成途径中催化二氢山奈酚生成二氢槲皮素,进而形成矢车菊色素。利用津田芜菁Br F3'H1和赤丸芜菁Br F3'H2基因构建过量表达载体后遗传转化烟草,转基因植株的花色加深。通过染色体步移法克隆了Br F3'H1和Br F3'H2基因上游846和851 bp的启动子序列。生物信息学分析表明,Br F3'H1P和Br F3'H2P均包含TATA box、CAAT box、光调控元件、MRE、ABRE、ATGCAAAT-motif、ERE、O2-site、RY-element、LTR等多个顺式作用元件;二者的核苷酸序列在7个位点存在差异。利用Br F3'H1P和Br F3'H2P序列替换p CAMBIA1301植物表达载体的35S启动子后遗传转化烟草。GUS组织化学染色结果表明,Br F3'H1P和Br F3'H2P序列均能驱动GUS基因表达。通过PCR方法获得了Br F3'H1P和Br F3'H2P的一系列缺失片段,融合GUS基因后转化烟草。染色结果显示,Br F3'H1P和Br F3'H2P系列缺失片段均具有起始GUS基因表达的活性。Br F3'H1和Br F3'H2基因的功能鉴定及启动子的初步分析将为揭示津田芜菁和赤丸芜菁F3'H基因的光诱导表达调控机理奠定研究基础。 展开更多

关键词 芜菁 类黄酮3'-羟化酶基因 遗传转化 启动子 功能分析

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威氏绿绒蒿MwF3'H基因克隆与表达分析 被引量：2

15

作者 严朋飞 张莹欣 +2 位作者 贾维嘉 刘建 屈燕 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2022年第19期6382-6387,共6页

为探究类黄酮3’-羟化酶(flavonoid 3’-hydroxylase,F3’H)基因在威氏绿绒蒿(Meconopsis wilsonii)花色形成过程中的表达规律。本研究以威氏绿绒蒿蓝紫色的花瓣为研究材料,使用RACE克隆技术克隆获得了威氏绿绒蒿花青素合成途径中的关... 为探究类黄酮3’-羟化酶(flavonoid 3’-hydroxylase,F3’H)基因在威氏绿绒蒿(Meconopsis wilsonii)花色形成过程中的表达规律。本研究以威氏绿绒蒿蓝紫色的花瓣为研究材料,使用RACE克隆技术克隆获得了威氏绿绒蒿花青素合成途径中的关键酶基因F3’H,命名为MwF3’H。分析发现其开放阅读框长度为1620 bp,编码了539个氨基酸,推测蛋白质分子量为59.7 kD,理论等电点(pI)为8.05,不稳定指数为33.02,属于稳定蛋白。序列比对和系统发育树分析显示,威氏绿绒蒿(M.wilsonii)与长果绿绒蒿(M.delavayi)的F3’H氨基酸序列一致性最高,相似度达到92.86%,聚为一个分支。实时荧光定量PCR结果显示,Mw F3’H基因在威氏绿绒蒿花发育不同的5个时期均有表达,在前期花青素积累时期表达最多,随着花的发育逐渐降低,但在盛花期表达量再次增长。推测其在威氏绿绒蒿花色的形成过程中起着重要作用。 展开更多

关键词 威氏绿绒蒿 类黄酮3’-羟化酶 花色 表达分析

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棕色棉F3'H-羟化酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量：3

16

作者 梁明炜 刘海峰 +5 位作者 肖向文 陆雪莹 李艳红 宋武 鲁春芳 李晓波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期199-206,共8页

根据葡萄的类黄酮3'-羟化酶(F3'H)基因全长cDNA序列Blast所得棉花的EST序列设计引物,以开花后16 d(DPA16)的新彩棉5号(XC-5)纤维为材料,利用RACE和RT-PCR技术分离得到了2个类黄酮3'-羟化酶基因cDNA序列,此2个序列编码区完... 根据葡萄的类黄酮3'-羟化酶(F3'H)基因全长cDNA序列Blast所得棉花的EST序列设计引物,以开花后16 d(DPA16)的新彩棉5号(XC-5)纤维为材料,利用RACE和RT-PCR技术分离得到了2个类黄酮3'-羟化酶基因cDNA序列,此2个序列编码区完全相同,仅在3'UTR区存在片段长短的差异,推测可能是基因转录后加工方式不同所造成。克隆所获得的棉花F3'H基因编码区全长1 533 bp,编码510个氨基酸,氨基酸序列分析预测表明,该基因所编码蛋白含有一个跨膜结构域,是一种分泌蛋白,定位于内质网上,并含有一段与细胞色素P450功能区相匹配的保守功能域;序列比对结果表明,棉花F3'H基因与其他多个物种的F3'H基因在氨基酸序列上有较高的同源性;聚类分析结果表明,棉花F3'H蛋白与双子叶植物大豆的F3'H亲缘关系较为接近,而与单子叶植物高粱等作物则较远。 展开更多

关键词 类黄酮3'-羟化酶 棕色棉 RACE 序列分析

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石榴花类黄酮3′羟化酶基因的克隆及序列分析 被引量：3

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作者 陶吉寒 招雪晴 +2 位作者 苑兆和 尹燕雷 冯立娟 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第4期121-124,共4页

为研究花色苷生物合成途径中类黄酮3′羟化酶基因(F3′H)的序列信息,以泰山红石榴花瓣为试材,提取总RNA后反转录为cDNA,根据GenBank中登录的相关物种F3′H基因的保守序列设计兼并引物,对反转录后的cDNA进行PCR扩增并测序。结果表明:在... 为研究花色苷生物合成途径中类黄酮3′羟化酶基因(F3′H)的序列信息,以泰山红石榴花瓣为试材,提取总RNA后反转录为cDNA,根据GenBank中登录的相关物种F3′H基因的保守序列设计兼并引物,对反转录后的cDNA进行PCR扩增并测序。结果表明:在石榴中克隆到了长度为996bp的F3′H基因cDNA片段,该基因编码331个氨基酸,含有细胞色素P450保守域,属于CYP75B亚家族。该序列在GenBank中的登录号为KC430328。 展开更多

关键词 石榴 类黄酮3’羟化酶基因 基因克隆 序列分析

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滁菊类黄酮3′-羟化酶基因的克隆及分子特性 被引量：1

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作者 蔡华 许雪峰 +3 位作者 诸立新 孙艳辉 代洪亮 崔勇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第17期145-149,共5页

以安徽滁州地区特有的药食两用植物资源——滁菊(Dendranthema morifolium‘chuju’)为试材,采用同源基因克隆方法克隆滁菊类黄酮3′-羟化酶基因(flavonoid 3′-hydroxylase,f3′h),NCBI注册号HQ256697。结果表明:采自不同地点的滁菊样... 以安徽滁州地区特有的药食两用植物资源——滁菊(Dendranthema morifolium‘chuju’)为试材,采用同源基因克隆方法克隆滁菊类黄酮3′-羟化酶基因(flavonoid 3′-hydroxylase,f3′h),NCBI注册号HQ256697。结果表明:采自不同地点的滁菊样品均能扩增出一条长381bp的f3′h基因片段,该片段与探针序列GU249553第3外显子对应区域的核苷酸序列同源性达98.69%,同源区域内有5个单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms,SNP),其中3个SNPs导致氨基酸编码序列的改变。滁菊与葡萄属(Vitis vinifera)、高粱属(Sorghum bicolor)、芸苔属(Brassica napus)、牵牛属(Ipomoea nil Magenta)、苹果属(Malus×domestica)、番薯属(Ipomoea purpurea)等物种f3′h基因的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在60%～98%和68%～97%之间。不同植物f3′h基因的分类与物种间的亲缘关系存在明显的相关性,菊属植物f3′h基因在系统进化中处于较高位置。 展开更多

关键词 滁菊:类黄酮 类黄酮3’.羟化酶基因 外显子3 序列分析

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梅花类黄酮3′-羟化酶基因片段基于基因组DNA的简并PCR法克隆(英文) 被引量：2

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作者 赵昶灵 杨清 陈俊愉 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期608-616,共9页

用本研究设计的“预先去杂—SDS法”从梅花嫩叶提取到高质量的基因组DNA。根据11条已公开发表的并提交到GenBank的类黄酮3′-羟化酶基因cDNA的假定氨基酸序列的保守区设计2个正向简并引物和3个反向简并引物组成6对引物,仅有1对引物能以... 用本研究设计的“预先去杂—SDS法”从梅花嫩叶提取到高质量的基因组DNA。根据11条已公开发表的并提交到GenBank的类黄酮3′-羟化酶基因cDNA的假定氨基酸序列的保守区设计2个正向简并引物和3个反向简并引物组成6对引物,仅有1对引物能以PCR法同时从梅花‘南京红须’、‘南京红’和‘粉皮宫粉’的基因组DNA扩增到一个469 bp的核苷酸片段,这3个片段在总体上有99 .72 %的一致性,与11条类黄酮3′-羟化酶基因cDNA的相应区域有65 .57 %的一致性。同时,“GGEK”并非类黄酮3′-羟化酶的特征性模体。这是首次从木本植物的基因组DNA克隆到类黄酮3′-羟化酶基因片段。本研究结果可为梅花类黄酮3′-羟化酶基因全长的克隆奠定基础。 展开更多

关键词 梅花 基因组DNA提取 类黄酮3'-羟化酶基因片段 简并PCR

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甘蓝型油菜F3’H基因反义植物表达载体的构建

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作者 许本波 谢伶俐 +2 位作者 田志宏 柴友荣 李加纳 《长江大学学报（自科版）（中旬）》 CAS 2007年第3期77-79,83,共4页

类黄酮3’-羟化酶(F3’H)是类黄酮途径中的一个关键酶,对种皮色泽和花色的形成具有重要作用。通过PCR法扩增了甘蓝型油菜(Brassica napus L.)F3’H基因的一段特异保守片段F3’HA,并将其亚克隆到中间载体pCAMBIA2301G中,构建了F3’H反义... 类黄酮3’-羟化酶(F3’H)是类黄酮途径中的一个关键酶,对种皮色泽和花色的形成具有重要作用。通过PCR法扩增了甘蓝型油菜(Brassica napus L.)F3’H基因的一段特异保守片段F3’HA,并将其亚克隆到中间载体pCAMBIA2301G中,构建了F3’H反义植物表达载体pCAMBIA2301-F3’HA,通过PCR鉴定和酶切鉴定证实载体构建成功,并转化到根癌农杆菌LBA4404菌株中形成工程菌株。为进一步研究F3’H基因在甘蓝型油菜种皮色素合成途径中的分子生物学机理和该基因的代谢调控网络奠定基础。 展开更多

关键词 类黄酮3’-羟化酶 反义表达载体 甘蓝型油菜(Brassica NAPUS L.)

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