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松材线虫类毒过敏原蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：3
1
作者 林世锋 简恒 +2 位作者 赵海娟 卜祥霞 刘倩 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期128-135,共8页
利用重叠延伸PCR基因合成法,按大肠杆菌偏爱密码子,合成松材线虫类毒过敏原蛋白基因(Bxvap2),将其连接到原核表达载体pET-29b(+)上。获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,目的蛋白以可溶形式高... 利用重叠延伸PCR基因合成法,按大肠杆菌偏爱密码子,合成松材线虫类毒过敏原蛋白基因(Bxvap2),将其连接到原核表达载体pET-29b(+)上。获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,目的蛋白以可溶形式高效表达,占细菌总蛋白的33.5%。将表达产物经Ni-NTA亲和柱纯化后进行质谱分析,结果显示纯化的蛋白为BXVAP2蛋白。用制备的BXVAP2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,间接ELISA测得抗体灵敏度5.4 ng.mL-1(效价为1∶1 360 000),为进一步研究该蛋白的组织定位及功能,明确该基因在致病过程中的作用机理奠定了基础。 展开更多
关键词 松材线虫 类毒过敏原蛋白 基因优化 原核表达 多克隆抗体
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日本血吸虫类毒过敏原蛋白的筛选及其生物信息学分析 被引量：1
2
作者 孙磊 郑明辉 +1 位作者 胡媛 曹建平 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第9期1059-1066,共8页
目的从日本血吸虫基因组中筛选鉴定类毒过敏原基因,并分析其编码蛋白的生物学特性。方法基于日本血吸虫基因组筛选出类毒过敏原基因序列,并进行PCR验证;通过生物信息学方法分析该基因编码蛋白的结构特征,包括疏水区、跨膜区、信号肽及... 目的从日本血吸虫基因组中筛选鉴定类毒过敏原基因,并分析其编码蛋白的生物学特性。方法基于日本血吸虫基因组筛选出类毒过敏原基因序列,并进行PCR验证;通过生物信息学方法分析该基因编码蛋白的结构特征,包括疏水区、跨膜区、信号肽及结构域,以及编码蛋白质的二级、三级结构及其抗原表位;利用Clustal-X 2.1软件对其编码的氨基酸序列进行同源比对;利用MEGA X软件构建系统发育树;通过STRING数据库对其蛋白互作网络进行预测。结果从日本血吸虫基因组中筛选鉴定出1条具有完整编码区的类毒过敏原基因序列,其长度为486 bp,编码161个氨基酸;预测其编码蛋白相对分子质量为18.93891×10^5,为分泌蛋白;其5′区域包含一个信号肽,无跨膜区,推测具有7个抗原表位。以STRING在线数据库中线虫蛋白互作网络信息作为参考,对血吸虫类毒过敏原蛋白互作网络进行预测,共鉴定出包括10个蛋白在内的16个互作关系。结论从血吸虫基因组中筛选出1条类毒过敏原蛋白基因,生物信息学方法预测其为分泌蛋白,并含有一定数量的抗原表位,为该蛋白作为候选疫苗和诊断抗原提供了分子基础。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 基因组 类毒过敏原蛋白 生物信息学分析
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