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尖吻蝮蛇毒类凝血酶促凝作用的研究 被引量：26
1
作者 周素芳 钟满森 +1 位作者 余清声 管锦霞 《蛇志》 1997年第4期1-5,共5页
探讨尖吻蝮蛇毒类凝血酶（ＤＡＴＬＥ）的促凝作用特点及影响其药效的有关因素。方法测定ＤＡＴＬＥ诱导的体外全血浆及吸咐血浆凝固时间，不同实验条件对ＤＡＴＬＥ及凝血酶诱导体外全血浆凝固时间（ＴＴ）、白陶土部分凝血活酶时间（... 探讨尖吻蝮蛇毒类凝血酶（ＤＡＴＬＥ）的促凝作用特点及影响其药效的有关因素。方法测定ＤＡＴＬＥ诱导的体外全血浆及吸咐血浆凝固时间，不同实验条件对ＤＡＴＬＥ及凝血酶诱导体外全血浆凝固时间（ＴＴ）、白陶土部分凝血活酶时间（ＫＰＴＴ）和凝血酶原时间（ＰＴ）的影响。结果在体外，ＤＡＴＬＥ能直接使人全血浆及吸咐血浆凝固，并呈剂量相关性，该促凝作用不受ＡＴ－Ⅲ和肝素的影响，Ｎａ＋离子抑制，而Ｃａ２＋离子能增强其促凝作用；ＤＡＴＬＥ促凝作用的最适ｐＨ值在５．０～８．５之间；ＤＡＴＬＥ在体内能增强内源性和外源性凝血作用，在０．０５～０．１ｍｇ／ｋｇ的促凝剂量下，ＤＡＴＬＥ略使血浆纤原含量减少。结论ＤＡＴＬＥ为一类凝血酶，在一定剂量范围内，主要表现为促凝作用，有不同于凝血酶的特点。 展开更多
关键词 尖吻蝮蛇毒 蛇毒 类凝血酶 促凝作用
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蛇毒类凝血酶的研究进展 被引量：25
2
作者 符民桂 管锦霞 《国外医学（输血及血液学分册）》 北大核心 1995年第5期297-300,共4页
本文综述蛇毒类凝血酶研究的最新进展,重点阐述蛇毒类凝血酶分子结 构及酶学特性的研究成果。
关键词 蛇毒 类凝血酶 酶学
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一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶对血液活性的研究 被引量：16
3
作者 唐松山 滕达 王晓华 《徐州医学院学报》 CAS 2005年第4期308-312,共5页
目的研究蛇毒类凝血酶Agacutin的止血效果。方法新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果。结果静脉注射Agacutin0.01～0.05U·kg-1剂量后,各剂量组全血凝固时间... 目的研究蛇毒类凝血酶Agacutin的止血效果。方法新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果。结果静脉注射Agacutin0.01～0.05U·kg-1剂量后,各剂量组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%～60.5%),给药后30min药效达高峰,药效持续24h。与给药前比较,各实验组兔血纤维蛋白原含量和血黏度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致。试验结果显示,Agacutin对活化部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性。腹腔注射Agacutin0.5～2.0U·kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%～66%)。结论Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白和不激活凝血因子Ⅱ和,当有伤口时,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成不溶性纤维蛋白和血栓的形成。所有实验结果显示,Agacutin是一个有效的潜在止血剂。 展开更多
关键词 类凝血酶 止血剂 尖吻蝮蛇 蛇毒 血液凝固 Agacutin 药效学
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蛇毒类凝血酶的研究进展 被引量：12
4
作者 李民 杨青 +2 位作者 包永明 许小明 安利佳 《生命科学研究》 CAS CSCD 2002年第S1期61-66,共6页
已在40余种蛇毒中发现类凝血酶成份,其有效的体内抗凝、体外促凝作用逐渐受到关注.对它的性质结构及制备纯化的研究取得重要成果.在揭示酶的功能与结构关系以及临床抗血栓应用方面前景广阔.
关键词 蛇毒 类凝血酶 丝氨酸蛋白酶 功能与结构
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尖吻蝮蛇蛇毒抗凝、纤溶组分的分离及对凝血系统的影响 被引量：14
5
作者 雷丹青 蒙怡 刘绵林 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期545-547,共3页
目的:研究同一尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化的类凝血酶和纤溶酶对凝血系统的影响。方法:采用DEAE-SepharoseCL-6B和Sephadex G-75层析法从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化获得类凝血酶和纤溶酶,通过体内实验,观察两者对凝血系统指标的影响。结果:从... 目的:研究同一尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化的类凝血酶和纤溶酶对凝血系统的影响。方法:采用DEAE-SepharoseCL-6B和Sephadex G-75层析法从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化获得类凝血酶和纤溶酶,通过体内实验,观察两者对凝血系统指标的影响。结果:从尖吻蝮蛇蛇毒中分别分离获得单一组分的类凝血酶和纤溶酶,它们的相对分子质量分别为39300和26600,体内实验证明,尖吻蝮蛇毒类凝血酶和纤溶酶都能明显延长全血凝固时间、活化的部分凝血酶原时间、凝血酶时间和凝血酶原时间,降低纤维蛋白原含量,但类凝血酶的作用更强,而纤溶酶在较大剂量时才显现抗凝作用,两者合用优于各自单用。结论:尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶和纤溶酶对动物体内的凝血系统有影响,两者合用具有明显的抗凝作用。 展开更多
关键词 尖吻蝮蛇蛇毒 类凝血酶 纤溶酶 血液凝固
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降纤酶研究进展 被引量：13
6
作者 罗晓清 杨化新 金少鸿 《中国药事》 CAS 2008年第11期1008-1013,共6页
降纤酶(Defibrase)是从尖吻蝮蛇Agkistrodon acutus和长白山白眉蝮蛇Agkistrodon halys ussuriensis蛇毒中提取分离得到的一种类凝血酶。具有显著的去纤、降粘、溶栓等作用,广泛地应用于临床治疗和预防心脑血管血栓性疾病。对降纤酶的... 降纤酶(Defibrase)是从尖吻蝮蛇Agkistrodon acutus和长白山白眉蝮蛇Agkistrodon halys ussuriensis蛇毒中提取分离得到的一种类凝血酶。具有显著的去纤、降粘、溶栓等作用,广泛地应用于临床治疗和预防心脑血管血栓性疾病。对降纤酶的生化性质与结构、生产制备、药理作用与临床应用以及质量分析与控制等方面的研究进行了综述。 展开更多
关键词 降纤酶 类凝血酶 结构 生产 质量分析
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蛇毒类凝血酶的分子生物学研究进展及其应用 被引量：8
7
作者 袁盛凌 张兆山 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期419-421,共3页
蛇毒类凝血酶在体外可以作用于纤维蛋白原使其凝固,具有类似凝血酶的功能。但在体内却表现出抗凝、降纤的功能。本文概述了蛇毒类凝血酶对纤维蛋白原的识别和作用、序列同源性特点、cDNA克隆的表达以及在临床中的应用。
关键词 蛇毒 类凝血酶 分子生物学 序列同源性 克隆 表达
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一种检测凝血酶、类凝血酶的新方法——纤维蛋白原平板法 被引量：11
8
作者 廖共山 班建东 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第6期967-968,共2页
目的:创建一种定量检测凝血酶(Thrombin)、类凝血酶(Thrombin-likeenzymes)活性的新方法——纤维蛋白原平板法。方法:采用纤维蛋白原作为底物,用琼脂糖与纤维蛋白原制作成纤维蛋白原平板,以凝血酶、类凝血酶标准品分别在该平板上的扩散... 目的:创建一种定量检测凝血酶(Thrombin)、类凝血酶(Thrombin-likeenzymes)活性的新方法——纤维蛋白原平板法。方法:采用纤维蛋白原作为底物,用琼脂糖与纤维蛋白原制作成纤维蛋白原平板,以凝血酶、类凝血酶标准品分别在该平板上的扩散反应,制作相应的标准曲线及回归曲线,并对凝血酶、类凝血酶活性作定量测定。结果:本法制作的凝血酶、类凝血酶检测标准曲线具有良好的线性关系(r=0.9994、r=0.9997)。结论:纤维蛋白原平板法可用于凝血酶、类凝血酶定量测定。具有操作简便、直观、稳定、敏感度高,不受检品浊度或颜色干扰且成本低廉等特点。 展开更多
关键词 凝血酶 类凝血酶 纤维蛋白原 平板法 活性
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尖吻蝮蛇毒中一种新类凝血酶的分离纯化 被引量：12
9
作者 翟宁 陈正杰 +1 位作者 冯军 赵文杰 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期601-603,共3页
用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分。经Superdex75HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%。SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k。该组分的凝血酶比活为41.... 用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分。经Superdex75HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%。SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k。该组分的凝血酶比活为41.5u/mg,精氨酸酯酶比活为14.29u/mg,但不激活血浆凝血因子ⅩⅢ。EDTA不能抑制其凝血活性,而苯甲磺酰氟则产生不可逆抑制作用。结果表明该酶是一种新尖吻蝮蛇毒类凝血酶。 展开更多
关键词 类凝血酶 尖吻蝮蛇毒 柱色谱
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蛇毒类凝血酶Calobin cDNA的设计合成与克隆 被引量：5
10
作者 袁盛凌 段海清 张兆山 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期357-360,共4页
人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodoncaliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母菌的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并... 人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodoncaliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母菌的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并加以改进,通过4次PCR延伸反应,得到了全长基因。经扩增后回收目的片段,双酶切后连接到克隆载体,将得到的转化子酶切鉴定后,任意选择6个克隆进行双向测序,得到了全序列正确的3个克隆。本工作为类凝血酶在大肠杆菌和酵母系统中的高效表达奠定了基础,也为长度为700～900bp片段的合成提供了帮助。 展开更多
关键词 蛇毒 类凝血酶 基因合成 聚合酶链式反应 序列分析
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不同蛇毒类凝血酶制剂对纤维蛋白原的作用 被引量：10
11
作者 崔亮亮 孙东 +4 位作者 石皎 丁忠福 刘鹏辉 宁静 薛雁 《药物生物技术》 CAS 2014年第1期53-56,共4页
主要研究了人凝血酶、速乐涓、邦亭、苏灵、巴曲亭对纤维蛋白原的水解作用。通过还原性SDS-PAGE法对作用结果进行检测,并用透射电子显微镜观察各样品在不同时间形成的凝块结构。速乐涓、苏灵、巴曲亭只作用于纤维蛋白原的α链,对β、γ... 主要研究了人凝血酶、速乐涓、邦亭、苏灵、巴曲亭对纤维蛋白原的水解作用。通过还原性SDS-PAGE法对作用结果进行检测,并用透射电子显微镜观察各样品在不同时间形成的凝块结构。速乐涓、苏灵、巴曲亭只作用于纤维蛋白原的α链,对β、γ链无作用;邦亭起初作用于纤维蛋白原的β链,对α链作用较弱,随着时间的延长对α链增强,对γ链无作用。相同反应条件下,类凝血酶制剂作用纤维蛋白原的初速度:巴曲亭≥人凝血酶>速乐涓>邦亭>苏灵;反应过程的速度:邦亭>人凝血酶>苏灵>巴曲亭≥速乐涓;凝块纤维直径:巴曲亭>苏灵>速乐涓≥邦亭≥人凝血酶。不同蛇毒来源类凝血酶制剂对纤维蛋白原作用情况有差异,为临床应用提供参考。 展开更多
关键词 类凝血酶 人凝血酶 纤维蛋白凝块 纤维蛋白原
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长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶的分离纯化 被引量：8
12
作者 牟萍 尹家荣 +1 位作者 侯瑞鹏 于鸿儒 《锦州医学院学报》 2005年第5期39-42,共4页
目的建立一种分离纯化长白山白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的方法。方法将长白山白眉蝮蛇蛇毒溶解后离心,取上清进行阴离子交换层析,所得蛋白进行分子筛层析。提纯的蛋白用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定及相对分子量测定。测定酶的N-末端... 目的建立一种分离纯化长白山白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的方法。方法将长白山白眉蝮蛇蛇毒溶解后离心,取上清进行阴离子交换层析,所得蛋白进行分子筛层析。提纯的蛋白用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定及相对分子量测定。测定酶的N-末端氨基酸序列。结果经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈单一区带,相对分子量为35.5kDa。N-末端氨基酸序列分析表明其N-末端氨基酸序列与立止血中巴曲酶N-末端氨基酸序列基本一致。提取率约为5mg类凝血酶/g蛇毒。结论用上述方法可制得高纯度的类凝血酶。 展开更多
关键词 长白山白眉蝮蛇 类凝血酶 纯化
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长白白眉蝮蛇类凝血酶的研究Ⅱ——理化、酶学性质的鉴定 被引量：7
13
作者 王晓辉 何宝俊 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 1991年第3期167-171,共5页
长白白眉蝮蛇类凝血酶分子量为39 000,是一种糖蛋白。氨基酸组成分析表明,此酶共含303个氨基酸残基,其中酸性氨基酸含量较高,等电点为4.25。该酶对BAEE(苯甲酰-L-精氨酸乙酯)水解活力的最适pH值为8左右,Km为3.53×10^(-4)mol/L,其... 长白白眉蝮蛇类凝血酶分子量为39 000,是一种糖蛋白。氨基酸组成分析表明,此酶共含303个氨基酸残基,其中酸性氨基酸含量较高,等电点为4.25。该酶对BAEE(苯甲酰-L-精氨酸乙酯)水解活力的最适pH值为8左右,Km为3.53×10^(-4)mol/L,其活性可被DFP(二异丙基氟磷酸)及PMSF(苯甲基磺酰氟)所抑制。催化降解纤维蛋白原过程中,只释放纤肽A,不释放纤肽B,形成的纤维蛋白可被5 mol/L尿素液溶解。 展开更多
关键词 蛇毒 类凝血酶 长白白眉蝮蛇 鉴定
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大连蛇岛蝮蛇类凝血酶在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量：6
14
作者 雷旭宇 杨青 +3 位作者 包永明 许建强 栾雨时 安利佳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第9期44-48,共5页
将编码大连蛇岛蝮蛇类凝血酶 (Gloshedobin)的基因克隆于表达载体pET 32a( + )中 ,以融合蛋白形式在大肠杆菌中获得表达。在 2 5℃下经 1mmol LIPTG诱导 6h ,SDS PAGE和蛋白质印迹分析表明 ,部分融合蛋白以可溶形式存在于大肠杆菌的细... 将编码大连蛇岛蝮蛇类凝血酶 (Gloshedobin)的基因克隆于表达载体pET 32a( + )中 ,以融合蛋白形式在大肠杆菌中获得表达。在 2 5℃下经 1mmol LIPTG诱导 6h ,SDS PAGE和蛋白质印迹分析表明 ,部分融合蛋白以可溶形式存在于大肠杆菌的细胞质中。针对金属螯合亲和层析分离某些含His 标签重组蛋白质时专一性不高 ,并且存在配基泄漏的缺陷 ,设计合成了以抗重组类凝血酶的鸡卵黄免疫球蛋白为配基的免疫亲和层析柱。通过疏水色谱OctylSepharoseFF ,IgY免疫亲和层析以及强阴离子交换色谱SourceQ等三步柱色谱分离纯化获得比活力为 45 4 7U mg的重组蛇毒类凝血酶 ,活力回收率为 34 8%。蛋白质印迹分析和纤维蛋白原凝结活性分析表明 。 展开更多
关键词 蝮蛇 类凝血酶 大肠杆菌 融合蛋白 蛋白质印迹 配基 ET 蛇类 蛇岛 重组蛋白质
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蛇毒类凝血酶研究进展 被引量：8
15
作者 林奕心 余晓东 +2 位作者 和七一 宋锡迅 李恒 《重庆师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第2期27-32,F0003,共7页
对有关蛇毒类凝血酶(SVTLEs)的分布分类、理化性质、酶学性质、结构特征、基因克隆表达、临床应用等方面的研究资料进行了概括和综述。结果发现:SVTLEs主要分布在蝮亚科和蝰科毒蛇的毒液中;根据SVTLEs水解纤维蛋白原释放FPA和FPB的速度... 对有关蛇毒类凝血酶(SVTLEs)的分布分类、理化性质、酶学性质、结构特征、基因克隆表达、临床应用等方面的研究资料进行了概括和综述。结果发现:SVTLEs主要分布在蝮亚科和蝰科毒蛇的毒液中;根据SVTLEs水解纤维蛋白原释放FPA和FPB的速度不同,可将其分为SVTLE-AB、SVTLE-A和SVTLE-B等3类;多数SVTLEs的分子量在30～50kD,含6个二硫键,pI较低,部分SVTLEs的pI较高;SVTLEs可水解TAME和BAEE,其活性可被DFP和PMSF所抑制,但不被胰蛋白酶trypsin及凝血活性中心His的专一抑制剂TLCK和EDTA抑制;对SVTLEs的一级结构和二级结构研究较多,对高级结构研究有待深入;很多SVTLEs基因在大肠杆菌中成功获得了表达,但表达物不能被糖基化和正确折叠,故没有活性或活性不高,而其在真核表达系统中表达活性较高;部分碳水化合物具有稳定SVTLEs结构及提高SVTLEs的酶活力的作用;SVTLEs的临床应用涉及心肌梗塞、缺血性中风、血栓性疾病等疾病的治疗。SV-TLEs未来的研究重点将集中于其在真核表达系统的表达和对其高级结构的解析。 展开更多
关键词 蛇毒 类凝血酶 SVTLEs 凝血活性 蛋白结构
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降纤酶治疗急性缺血性脑血管病的展望 被引量：7
16
作者 刘秀琴 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2001年第6期363-365,共3页
关键词 急性缺血性脑血管病 降纤酶 类凝血酶 临床应用 蛇毒制剂
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新的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin止血作用的实验研究 被引量：8
17
作者 唐松山 王晓华 +3 位作者 张娟辉 杨志勇 刘菁 祁荣 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2005年第7期781-786,共6页
目的:研究类凝血酶Agacutin的止血效果.方法:新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射Agacutin,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果.结果:静脉注射Agacutin 0.01～0.05U·kg-1后,各组全血凝固时间与给药前相比均... 目的:研究类凝血酶Agacutin的止血效果.方法:新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射Agacutin,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果.结果:静脉注射Agacutin 0.01～0.05U·kg-1后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%～60.5%),给药后30 min药效达高峰,药效持续24h.与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血粘度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致.试验结果显示,Agacutin对部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性、血小板体外聚集、优球蛋白凝固时间均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性.腹腔注射Agacutin0.5～2 U·kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%～66%).结论:Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白且不激活凝血因子Ⅱ和XIII,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成血栓形成. 展开更多
关键词 类凝血酶 止血剂 尖吻蝮蛇蛇毒 Agacutin
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大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因克隆与表达研究 被引量：6
18
作者 杨青 雷旭宇 +4 位作者 许建强 李民 苏志国 安利佳 杨克瑞斯特.杨森 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第2期156-159,共4页
根据同源性设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,并由此推测出其相应的氨基酸序列.将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕氏酵母细胞中获得表达.该表达产物经两步柱层析后,进行聚... 根据同源性设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,并由此推测出其相应的氨基酸序列.将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕氏酵母细胞中获得表达.该表达产物经两步柱层析后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,获得单一条带,并表现较强的生色底物活性. 展开更多
关键词 大连蛇岛 蝮蛇 类凝血酶 基因克隆 基因表达 酵母表达系统 氨基酸序列 蛇毒
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降纤酶的制备和药理 被引量：7
19
作者 张天民 《食品与药品》 CAS 2005年第03A期1-4,共4页
关键词 降纤酶 蛇毒 蛋白水解酶 类凝血酶 药理作用
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类凝血酶效价测定方法的研究 被引量：7
20
作者 郝苏丽 沈佳 孙磊 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 1997年第3期134-136,共3页
对蛇毒中提取的类凝血酶进行了分析，并建立了类凝血酶效价测定法，此法灵敏度高，重视性好，操作简便，适用于蛇毒有效成分的分析及厂方质量的跟踪检测。
关键词 类凝血酶 效价测定法 蛇毒
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